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嗜肺军团菌效应蛋白Lpg1972与CNOT7相互作用研究
1
作者 刘子赫 吴书娴 甄向凯 《福建师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第1期23-33,共11页
嗜肺军团菌是一种寄生在真核细胞内的革兰氏阴性致病菌,其致病性主要是依靠IVB型分泌系统分泌的330多种效应蛋白,效应蛋白之间彼此协作共同干扰真核宿主细胞的各种细胞活动.嗜肺军团菌效应蛋白Lpg1972与真核细胞Ccr4-Not复合物中的CNOT... 嗜肺军团菌是一种寄生在真核细胞内的革兰氏阴性致病菌,其致病性主要是依靠IVB型分泌系统分泌的330多种效应蛋白,效应蛋白之间彼此协作共同干扰真核宿主细胞的各种细胞活动.嗜肺军团菌效应蛋白Lpg1972与真核细胞Ccr4-Not复合物中的CNOT7亚基存在相互作用,而Ccr4-Not复合物是真核细胞中调控mRNA降解的关键蛋白。基于此通过分子生物学的手段验证了它们之间的相互作用,设计共表达载体纯化了复合物蛋白,并利用AlphaFold2对复合物的结构和相互作用进行了预测分析,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 嗜肺军团 大肠杆菌 Ccr4-Not复合物 相互作用
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mNGS检出嗜肺军团菌肺炎1例及文献复习 被引量:1
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作者 巴福元 田文杰 轩乾坤 《检验医学与临床》 CAS 2023年第22期3416-3418,共3页
嗜肺军团菌肺炎是一种主要由嗜肺军团菌引起的肺部感染性疾病,并可合并肺外其他系统损伤,常表现为严重且可能致命的肺炎,其病死率为10%~15%,若起始经验性抗菌药物治疗不恰当,病死率可高达27%,因此早期诊断、治疗尤为重要[1-2]。本研究... 嗜肺军团菌肺炎是一种主要由嗜肺军团菌引起的肺部感染性疾病,并可合并肺外其他系统损伤,常表现为严重且可能致命的肺炎,其病死率为10%~15%,若起始经验性抗菌药物治疗不恰当,病死率可高达27%,因此早期诊断、治疗尤为重要[1-2]。本研究采用宏基因组二代测序(mNGS)技术对1例嗜肺军团菌肺炎患者的肺泡灌洗液和外周血标本进行测序,明确了感染病原体,并结合临床症状及相关实验室检查结果,加强对嗜肺军团菌感染的认识,同时探讨mNGS在疑难、重症感染患者中病原体检测的价值。 展开更多
关键词 宏基因组二代测序 嗜肺军团 嗜肺军团
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酶底物定量法检测水中嗜肺军团菌
3
作者 张雅婕 高艳 +4 位作者 牛春燕 张永 刘晋源 何立伟 高斌 《环境卫生学杂志》 2023年第4期286-293,共8页
目的建立水中嗜肺军团菌定量检测法—酶底物定量法。方法通过加标比对试验确定酶底物定量法的样品保存条件以及试验条件;通过酶底物定量法与传统培养法对采集的水样加标前后测定结果的比对,获得该方法的准确度、精密度、特异性和灵敏度... 目的建立水中嗜肺军团菌定量检测法—酶底物定量法。方法通过加标比对试验确定酶底物定量法的样品保存条件以及试验条件;通过酶底物定量法与传统培养法对采集的水样加标前后测定结果的比对,获得该方法的准确度、精密度、特异性和灵敏度等技术指标,确定该方法的检测性能。结果酶底物定量法的样品应在含硫代硫酸钠的无菌采样容器中,常温条件下送往实验室完成检测;试验最适培养条件为36℃下培养7 d;准确度(回收率)范围在109%~113%;精密度RSD为0.37%~2.46%;方法特异性为94.59%,灵敏度为92.31%;50份实际样品测定时,酶底物定量法结果与真值的一致性为94%,准确度和灵敏度均高于传统培养法。结论酶底物定量法具有较好的准确度、精密度、特异性和灵敏度,适用于批量样品筛查以及较低水平嗜肺军团菌污染时的测定,是水中嗜肺军团菌标准检验方法的有益补充,同时为国标方法修订提供技术储备。 展开更多
关键词 嗜肺军团 酶底物定量法
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新生儿嗜肺军团菌感染重症肺炎1例
4
作者 杨文 陈彦香 +2 位作者 刘苗 顾江河 陈芳莉 《宁夏医科大学学报》 2023年第9期970-972,共3页
新生儿重症肺炎是新生儿呼吸系统疾病中常见的危重症,病程长短不一,且在新生儿期的临床表现多样,进展迅速,容易合并脓毒症及感染性休克,感染中毒症状重,短时间内可发展为呼吸衰竭及心力衰竭,需要气管插管机械通气等抢救治疗[1]。由于病... 新生儿重症肺炎是新生儿呼吸系统疾病中常见的危重症,病程长短不一,且在新生儿期的临床表现多样,进展迅速,容易合并脓毒症及感染性休克,感染中毒症状重,短时间内可发展为呼吸衰竭及心力衰竭,需要气管插管机械通气等抢救治疗[1]。由于病原菌不明确,增加了治疗难度,从影像学的特征无法对病原菌做出准确的鉴别,罕见病原菌通过细菌微生物的培养难以发现。银川市第一人民医院新生儿科曾收治1例感染嗜肺军团菌的重症肺炎患儿,通过肺泡灌洗液行宏基因组高通量测序明确病原体,现报告如下。 展开更多
关键词 感染中毒症状 重症炎患儿 新生儿期 新生儿科 病程长短 感染性休克 细菌微生物 嗜肺军团
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乙酰化修饰在嗜肺军团菌致病过程中的作用 被引量:2
5
作者 钟文红 陈涛涛 欧阳松应 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1088-1098,共11页
乙酰化修饰是由乙酰基转移酶、去乙酰化酶介导的可逆的蛋白质翻译后修饰。其中,乙酰基转移酶将乙酰辅酶A的乙酰基团转移至底物蛋白的氨基酸残基,而乙酰基团的去除由去乙酰化酶完成。乙酰化修饰参与许多基本生物学过程的调节作用,越来越... 乙酰化修饰是由乙酰基转移酶、去乙酰化酶介导的可逆的蛋白质翻译后修饰。其中,乙酰基转移酶将乙酰辅酶A的乙酰基团转移至底物蛋白的氨基酸残基,而乙酰基团的去除由去乙酰化酶完成。乙酰化修饰参与许多基本生物学过程的调节作用,越来越多的研究表明,蛋白质乙酰化修饰在病原菌的致病过程中具有重要作用。病原菌,如引起非典型性肺炎的嗜肺军团菌,可以通过分泌具有乙酰基转移酶活性的效应蛋白靶向宿主细胞信号通路的关键蛋白质因子,干扰宿主细胞信号通路及免疫反应。本文主要从嗜肺军团菌的致病机制、乙酰化修饰及乙酰化修饰在病原体致病过程中的调控作用进行综述,突出已知的乙酰化毒力蛋白的例子,并讨论它们如何影响与宿主的相互作用,为理解乙酰化修饰在嗜肺军团菌致病过程中的作用机制提供参考。 展开更多
关键词 嗜肺军团 乙酰化修饰 致病菌 毒力因子
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宏基因组二代测序诊断重症社区获得性嗜肺军团菌肺炎1例
6
作者 王嵩宇 陈颖 +2 位作者 黄建宁 刘卫平 张雪云 《沈阳医学院学报》 2023年第4期401-404,共4页
患者男,53岁,企业管理人员。因“发热2 d”,于2022年7月29日就诊于我院。患者体温最高达39.0℃,发热前有畏寒,咳嗽、无痰。乏力明显,流少量清鼻涕。气短明显,不能平卧。发热2 d以来食欲下降明显,进食量极少,自觉乏力气短,尿量偏少。于... 患者男,53岁,企业管理人员。因“发热2 d”,于2022年7月29日就诊于我院。患者体温最高达39.0℃,发热前有畏寒,咳嗽、无痰。乏力明显,流少量清鼻涕。气短明显,不能平卧。发热2 d以来食欲下降明显,进食量极少,自觉乏力气短,尿量偏少。于我院发热急诊完善肺CT提示左上肺及双下肺可见片状高密度影,右侧胸腔内可见弧形低密度影,见图1。 展开更多
关键词 嗜肺军团 宏基因组二代测序 诊断
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宏基因组二代测序技术确诊婴儿嗜肺军团菌肺炎1例
7
作者 刘梦利 陈蒙 《安徽医学》 2023年第6期741-742,共2页
1病例资料患儿,男性,10月。因“发热伴精神萎靡4天”于2021年2月2日收住我院PICU。患儿4天前接触“感冒”家人后出现稽留热,热峰40℃,热前有寒战,热时无抽搐,伴有单声咳嗽,无吐沫,呕吐数次,精神食欲欠佳,尿量偏少。查体:体温38.7℃,脉搏... 1病例资料患儿,男性,10月。因“发热伴精神萎靡4天”于2021年2月2日收住我院PICU。患儿4天前接触“感冒”家人后出现稽留热,热峰40℃,热前有寒战,热时无抽搐,伴有单声咳嗽,无吐沫,呕吐数次,精神食欲欠佳,尿量偏少。查体:体温38.7℃,脉搏169次/分,呼吸57次/分,血压93/60 mmHg(1 mmHg≈0.133 kPa),体质量11 kg。神志清楚,精神萎靡,反应欠佳,面色稍苍白,呼吸促,无鼻扇,口唇无发绀,双肺呼吸音粗,右肺呼吸音减低,未闻及干湿啰音。心脏、腹部、神经系统检查未见异常。患儿为G2P1,足月顺产,出生体质量3.6 kg,既往身体健康,出生史无异常,生长发育同一般同龄儿童,否认家族中遗传病史及传染病史。 展开更多
关键词 军团 嗜肺军团 宏基因组二代测序 婴儿
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嗜肺军团菌Dot/Icm分泌系统的结构基础与工作机制
8
作者 黄艳芳 关洪鑫 欧阳松应 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期375-384,共10页
嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是一种能引起人类军团病肺炎的革兰氏阴性致病菌,它独特的IVB型分泌系统Dot/Icm(defective for organelle trafficking/intracellular multi-plication defect)对其致病性至关重要。作为嗜肺军团菌... 嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)是一种能引起人类军团病肺炎的革兰氏阴性致病菌,它独特的IVB型分泌系统Dot/Icm(defective for organelle trafficking/intracellular multi-plication defect)对其致病性至关重要。作为嗜肺军团菌的毒力输出器,Dot/Icm分泌系统向宿主细胞内转运约330种效应蛋白质,并通过这些效应蛋白质调控宿主的多种细胞生命过程。本文总结了嗜肺军团菌Dot/Icm系统结构的最新研究进展,以及其底物识别和转运机制的最新认识。Dot/Icm分泌系统的结构分为外膜核心复合物(outer membrane core complex,OMCC)、内膜复合物(inner membrane complex,IMC)和Ⅳ型偶联复合物(type IV coupling complex,T4CC)3个组件。其中,OMCC和IMC共同组成一个跨细菌胞膜的通道以供效应蛋白质的向外输送。而T4CC利用自身不同的结构组件识别并捕获具有不同特征序列的效应蛋白质,这些效应蛋白质通过由IMC或T4CC形成的内膜通道最后穿过OMCC的中央通道分泌出去。本文将为深入理解嗜肺军团菌的致病机制提供帮助,也将为寻找更加有效地治疗微生物疾病的方法和开发生物技术和生物医学应用提供帮助。 展开更多
关键词 嗜肺军团 Dot/Icm分泌系统 Ⅳ型偶联复合物
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基于酶底物法对饮用水和非饮用水中嗜肺军团菌的定量测定
9
作者 翁馨妍 陶骏 陈珅珉 《净水技术》 CAS 2023年第S01期110-115,共6页
研究采用酶底物法对饮用水和非饮用水中的嗜肺嗜肺军团菌进行定量检测。结果表明,酶底物法对检测嗜肺嗜肺军团菌的质控样品有较高的准确度和稳定性。对饮用水实际样品中嗜肺军团菌进行检测,在30份管网水中未检出阳性结果,在60份二次供... 研究采用酶底物法对饮用水和非饮用水中的嗜肺嗜肺军团菌进行定量检测。结果表明,酶底物法对检测嗜肺嗜肺军团菌的质控样品有较高的准确度和稳定性。对饮用水实际样品中嗜肺军团菌进行检测,在30份管网水中未检出阳性结果,在60份二次供水样品中检出率达5%,其中3份阳性样品均来自公共场所建筑自来水龙头,阳性样品的检出浓度为1.0~5.2MPN/(100mL)。对非饮用水实际样品中嗜肺军团菌进行检测,在全部30份水样中检出率达67%,阳性样品的检出浓度为2.2~1992.6MPN/(100mL)。对酶底物法检测出的阳性样品均进行了菌落验证试验,无假阳性现象,表明酶底物法检测饮用水和非饮用水中实际水样的嗜肺军团菌特异度为100%。其结果表明,在非饮用水和饮用水末端公共场所区域水体中,仍存在嗜肺军团菌污染风险,对人群构成潜在威胁。 展开更多
关键词 酶底物法 嗜肺军团 定量检测 饮用水 非饮用水
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福建省嗜肺军团菌血清1型及血清6型菌株PFGE分型研究 被引量:8
10
作者 原灵 陈爱平 +1 位作者 杨劲松 林震宇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期461-463,共3页
目的研究福建省2008年至2010年公共场所空调冷却塔水及冷凝水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)及血清Ⅵ型(LP6)的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对57株LP1型军团菌及15株LP6军团菌进行电... 目的研究福建省2008年至2010年公共场所空调冷却塔水及冷凝水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)及血清Ⅵ型(LP6)的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对57株LP1型军团菌及15株LP6军团菌进行电泳,并用BioNumerics(version 6.0,Applied Maths,Inc)软件包对其进行聚类分析。结果 57株LP1军团菌可分为40种PFGE型,菌株间相似性系数在24.107%~100.000%之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。不同地区分离的LP1军团菌既有差异较大的带型,也存在相同和相似的带型;相同地区,菌株间相似性系数存在差异,无优势菌株。15株LP6军团菌可分为12个不同的PFGE型别,菌株间相似性系数在27.87%~100.00%之间。结论 2008-2010年福建省公共场所空调冷却塔水及冷凝水中分离的LP1及LP6军团菌呈现基因多样性。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌1型 嗜肺军团菌6型 脉冲场凝胶电泳 指纹图谱 PFGE型
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嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌所致社区获得性肺炎的临床对比分析 被引量:9
11
作者 金建敏 张沪生 陈东宁 《首都医科大学学报》 CAS 2008年第3期348-353,共6页
目的探讨嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌感染所致社区获得性肺炎的临床特点,提高对军团菌肺炎的认识。方法采用双重聚合酶链反应(DPCR)法对根据临床表现及血清抗体结果,临床诊断为军团菌肺炎患者的痰标本进行军团菌DNA检测。选择痰DPCR和血... 目的探讨嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌感染所致社区获得性肺炎的临床特点,提高对军团菌肺炎的认识。方法采用双重聚合酶链反应(DPCR)法对根据临床表现及血清抗体结果,临床诊断为军团菌肺炎患者的痰标本进行军团菌DNA检测。选择痰DPCR和血清抗体结果呈一致阳性的患者并根据检测结果将其分为嗜肺军团菌肺炎组(42例)和非嗜肺军团菌肺炎组(18例)。将2组患者的临床资料进行对比分析。结果痰标本DPCR结果与血清特异性抗体结果呈一致阳性,嗜肺军团菌肺炎与非嗜肺军团菌肺炎诊断明确。嗜肺军团菌肺炎多发于既往体健的青壮年,主要发病于夏秋季;非嗜肺军团菌倾向于四季散发,多发于有基础疾病的老年人。与非嗜肺军团菌肺炎相比,嗜肺军团菌肺炎患者的肺脏受累面积较大,胸腔积液及ARDS发病率高,同时全身感染中毒症状和肺外表现更为明显(P<0.05)。结论嗜肺与非嗜肺军团菌感染所致社区获得性肺炎临床特点有所不同,早期予大环内酯类/喹诺酮类抗生素治疗是改善预后的关键手段。 展开更多
关键词 社区获得性 嗜肺军团 嗜肺军团 双重聚合酶链反应
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嗜肺军团菌抗体在儿童嗜肺军团菌感染性肺炎诊断中的价值 被引量:2
12
作者 彭心华 肖桂珍 《检验医学与临床》 CAS 2013年第11期1420-1420,共1页
目的探讨嗜肺军团菌(LP)抗体在儿童LP感染性肺炎诊断中的价值。方法对547例以发热为主要症状或具有急性呼吸道感染症状的患儿,采用间接免疫荧光法检测血清LP-IgM。结果 547例患儿LP-IgM阳性率为10.2%(56/547);56例LP-IgM阳性患儿中,LP... 目的探讨嗜肺军团菌(LP)抗体在儿童LP感染性肺炎诊断中的价值。方法对547例以发热为主要症状或具有急性呼吸道感染症状的患儿,采用间接免疫荧光法检测血清LP-IgM。结果 547例患儿LP-IgM阳性率为10.2%(56/547);56例LP-IgM阳性患儿中,LP感染性肺炎确诊率为62.5%(35/56)。结论血清LP-IgM检测对儿童LP感染性肺炎有良好的诊断价值,但存在一定数量的假阳性结果;LP感染性肺炎的确诊必须结合患儿临床症状及其他检查。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌抗体 嗜肺军团菌感染性 间接免疫荧光法
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重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)体外诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞分泌IL-6和IL-1β 被引量:3
13
作者 佳莉娟 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期601-605,共5页
目的探讨重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)对RAW264.7巨噬细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的影响及其机制。方法采用(0.000、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞,并设细胞对照组,用CCK-8... 目的探讨重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白A(rflaA)对RAW264.7巨噬细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、IL-1β的影响及其机制。方法采用(0.000、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞,并设细胞对照组,用CCK-8法确定rflaA的半数效应剂量(EC_(50))。采用(0.04、0.08、0.16)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞24、36、48 h,采用ELISA检测IL-6、IL-1β分泌水平;(0.04、0.08、0.16)μg/mL rflaA处理RAW264.7细胞6、12、24、36、48 h,收集细胞,实时定量PCR检测IL-6、IL-1β、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)mRNA的含量;Western blot法检测NLRP3、caspase-1蛋白水平。结果 rflaA可促进RAW264.7细胞因子分泌,RAW264.7细胞被不同剂量的rflaA作用24、36、48 h,随rflaA剂量的递增,IL-6、IL-1β水平增加,以0.16μg/mL剂量时作用最显著,36 h达高峰;rflaA可增加RAW264.7细胞的IL-6、IL-1β、NLRP3、caspase-1 RNA水平,0.16μg/mL rflaA作用最显著,12 h达高峰;RAW264.7细胞被不同剂量的rflaA作用6、12、24、36 h,随rflaA剂量增加NLRP3、caspase-1表达水平增加,以0.16μg/mL剂量时作用最显著,24 h达高峰。结论 rflaA通过刺激NLRP3、caspase-1而增加RAW264.7细胞IL-6、IL-1β的分泌。 展开更多
关键词 嗜肺军团 重组嗜肺军团菌鞭毛蛋白(rflaA) 巨噬细胞 细胞因子
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广东地区环境水源和临床标本嗜肺军团菌培养与基因快速鉴定 被引量:29
14
作者 朱庆义 胡朝晖 +4 位作者 梁耀铭 潘文刚 刘元力 梁卫桥 王军 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期19-22,共4页
目的建立嗜肺军团菌培养与基因快速鉴定方法,探讨广东地区环境水源和非典型肺炎患者嗜肺军团菌感染状况。方法对广东地区采集的57份中央空调冷凝塔水、30份湖泊水和53份临床标本,用本室改良BCYE-α培养基作培养和PCR试验。结果57份中央... 目的建立嗜肺军团菌培养与基因快速鉴定方法,探讨广东地区环境水源和非典型肺炎患者嗜肺军团菌感染状况。方法对广东地区采集的57份中央空调冷凝塔水、30份湖泊水和53份临床标本,用本室改良BCYE-α培养基作培养和PCR试验。结果57份中央空调冷凝塔水培养检出嗜肺军团菌20株(35.1%),PCR检测LP-DNA阳性38份(66.7%);30份湖泊水细菌培养均阴性,PCR阳性4份(13.3%);53例非典型肺炎患者支气管洗液和痰液细菌培养均阴性,PCR阳性5例(9.4%);本实验设计的PCR扩增引物,只和标准嗜肺军团菌和本地分离株产生反应;不与其他病原菌扩增,而显示其良好特异性;本PCR敏感性可检出检体中0.6个细菌DNA含量。结论广东地区环境水源中普遍存在嗜肺军团菌,是引起非典型肺炎的重要病源之一。 展开更多
关键词 嗜肺军团 环境水源 非典型 快速鉴定
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水中嗜肺军团菌分布规律研究 被引量:16
15
作者 刘洪亮 侯常春 +2 位作者 徐瑛 黄爱华 陈学敏 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期416-419,共4页
目的 探讨水环境中嗜肺军团菌分布规律及分型特征。方法 采集自然环境及生活环境中各主要水体样品 ,浓缩后经常规细菌培养后的疑似菌株 ,用血清学鉴定与 1 6SrRNA半套式PCR技术双重鉴定进行军团菌和嗜肺军团菌的分型。结果 全部 1 2 ... 目的 探讨水环境中嗜肺军团菌分布规律及分型特征。方法 采集自然环境及生活环境中各主要水体样品 ,浓缩后经常规细菌培养后的疑似菌株 ,用血清学鉴定与 1 6SrRNA半套式PCR技术双重鉴定进行军团菌和嗜肺军团菌的分型。结果 全部 1 2 6个监测点水样有 2 8个出现军团菌阳性 (其中嗜肺军团菌 2 1个 ) ;自然环境及生活环境监测点军团菌阳性率分别为 32 1 %、2 2 2 % (其中嗜肺军团菌阳性率分别为2 1 4 %、1 6 7% ) ;全年 4 30份水样有 36份军团菌阳性 (其中 2 3份为嗜肺军团菌 ) ,夏、秋季检出率较高 ,春、冬季也有检出 ;空调冷却塔水、淋浴喷头水、公园湖水检出率较高。结论 嗜肺军团菌在自然环境及生活环境各水体中分布广泛。环境温度是军团菌污染的重要因素 ,夏、秋季是军团菌污染和军团病传播的高发季节 ,春、冬季也可发生。公园娱乐水体、空调冷却水、淋浴喷头水等与人群密切接触水体是军团菌污染和军团病传播的高危水体。 展开更多
关键词 水环境 嗜肺军团 分布规律 分子标记
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嗜肺军团菌荧光定量PCR检测 被引量:17
16
作者 朱水荣 张政 +3 位作者 卢亦愚 任红宇 扬仕贵 高晓萍 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1111-1113,共3页
目的建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。方法嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。利用嗜肺军团菌mip基因保... 目的建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。方法嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等。结果该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现。检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会。结论TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测。 展开更多
关键词 嗜肺军团 MIP基因 TAQMAN探针 荧光定量PCR
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广东地区嗜肺军团菌的扩增片段长度多态性分析 被引量:13
17
作者 胡朝晖 屈平华 +1 位作者 刘元力 朱庆义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1659-1665,共7页
【目的】了解广东部分地区2002~2007年环境水中嗜肺军团菌的基因型及遗传学关系。【方法】参考欧洲军团菌感染工作组(the European Working Group for Legionella Infections,EWGLI)制定的分型草案(1.2版),采用PstⅠ酶对我室保存的2株... 【目的】了解广东部分地区2002~2007年环境水中嗜肺军团菌的基因型及遗传学关系。【方法】参考欧洲军团菌感染工作组(the European Working Group for Legionella Infections,EWGLI)制定的分型草案(1.2版),采用PstⅠ酶对我室保存的2株标准菌株及41株不同时间、不同地点的嗜肺军团菌环境分离株进行扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析,电泳图谱与EWGLI进行比对。【结果】AFLP分型结果稳定,重复性好;43株嗜肺军团菌,其不同来源菌株呈现多态性分布,经AFLP分析得到33个基因型,辨别力指数为99.79%,其中Kingmed AFLP 011为优势基因型。按Dice系数≥0.8,可分为18个群,Kingmed AFLPD群为优势群,占总菌株数的34.88%。由电泳图谱的相似性,初步推断存在EWGLI 001 Lugano型、002 Lugano、012 Rome、013 London、014 London型、015 Dresden型、021 Lyon等7个基因型,以及多个未报道的新基因型。【结论】广东地区嗜肺军团菌的基因型十分丰富,AFLP技术是其分子流行病学研究的有效手段。 展开更多
关键词 嗜肺军团 基因分型 扩增片段长度多态性
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嗜肺军团菌主要外膜蛋白与鞭毛亚单位蛋白双基因融合表达载体的构建及其诱导表达 被引量:5
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作者 张雷 陈建平 +3 位作者 张莉 王涛 刘德松 田玉 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期216-220,共5页
目的构建嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)与鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)的融合表达载体,并在原核系统表达。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和flaA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质... 目的构建嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)与鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)的融合表达载体,并在原核系统表达。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和flaA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建mompS与flaA基因完全融合的重组质粒,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-FlaA融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了嗜肺军团菌904bp的mompS及1432bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSF,SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-LpSF在原核系统中得到了表达。结论成功构建了嗜肺军团菌mompS-flaA双基因的原核融合表达载体,并在大肠杆菌中得到了表达,为进一步研究嗜肺军团菌核酸双价疫苗提供研究基础。 展开更多
关键词 嗜肺军团 mompS-flaA融合基因 克隆 表达
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儿童嗜肺军团菌肺炎合并肺炎支原体感染的临床研究 被引量:10
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作者 何志慧 周玉福 石远滨 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期490-492,共3页
目的对儿童嗜肺军团菌(LP)肺炎合并肺炎支原体(MP)感染的临床特征进行研究总结,为临床防治积累资料。方法收集该院2010年1月至2012年6月收治的95例LP肺炎患儿的临床资料,其中有35例合并MP感染,对其临床特征进行回顾性对比分析。结果 LP... 目的对儿童嗜肺军团菌(LP)肺炎合并肺炎支原体(MP)感染的临床特征进行研究总结,为临床防治积累资料。方法收集该院2010年1月至2012年6月收治的95例LP肺炎患儿的临床资料,其中有35例合并MP感染,对其临床特征进行回顾性对比分析。结果 LP与MP混合感染所致儿童肺炎多见于城镇学龄前期儿童。与LP肺炎组比较,混合感染组多表现为热峰高、热程长,出现肺部阳性体征、心率增快、颈淋巴结肿大和肝脏增大的发生例数显著增多,差异有统计学意义(P<0.05);辅助检查出现胸片大片斑片影及胸腔积液表现,出现白细胞(WBC)增高、C反应蛋白(CRP)增高、心电图阳性表现(心动过速/ST段和T波即ST-T改变)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)增高、肝功异常的例数显著增多,差异有统计学意义(P<0.05);所需治疗时间显著延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童LP肺炎合并MP感染可群体发病,常表现为肺部症状体征重、更易合并肺外多器官及多系统的损害。应积极开展大样本、多中心的研究以获得我国感染现状的可靠资料,从而为临床防治提供思路和对策。 展开更多
关键词 支原体 儿童 嗜肺军团
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温泉水中嗜肺军团菌污染调查及分子分型研究 被引量:5
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作者 章乐怡 李毅 +4 位作者 上官智慧 吴跃进 谢爱蓉 王良怀 陈文斌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1096-1101,共6页
目的探讨温泉水环境中嗜肺军团菌的污染状况和分布规律,了解其主要血清型别及基因型别。方法采取随机抽样方法采集温泉场所蓄水池、温泉池、客房淋浴水等,浓缩后用细菌培养法分离得到可疑菌株,用血清学与荧光定量PCR技术进行嗜肺军团菌... 目的探讨温泉水环境中嗜肺军团菌的污染状况和分布规律,了解其主要血清型别及基因型别。方法采取随机抽样方法采集温泉场所蓄水池、温泉池、客房淋浴水等,浓缩后用细菌培养法分离得到可疑菌株,用血清学与荧光定量PCR技术进行嗜肺军团菌的鉴定。对分离的菌株用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型方法(SBT)进行基因分型。结果65份温泉水中35份检出嗜肺军团菌,检出率为53.85%。嗜肺军团菌计数范围在20CFU/100mL-16 000CFU/100mL之间。血清分型以LP1、LP3为主。分离的嗜肺军团菌菌株均携带dot基因。对40株嗜肺军团菌菌株进行了PFGE聚类分析,得到10种不同的带型。40株菌株13种ST型可以被分为3个克隆群和1个单态群。结论本地区温泉水嗜肺军团菌污染程度较高,分子分型结果表明这些菌株具有遗传多样性。 展开更多
关键词 温泉水 嗜肺军团 分子分型 遗传多样性
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