福建省嗜肺军团菌血清1型及血清6型菌株PFGE分型研究

目的研究福建省2008年至2010年公共场所空调冷却塔水及冷凝水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)及血清Ⅵ型(LP6)的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对57株LP1型军团菌及15株LP6军团菌进行电泳,并用BioNumerics(version 6.0,Applied Maths,Inc)软件包对其进行聚类分析。结果 57株LP1军团菌可分为40种PFGE型,菌株间相似性系数在24.107%～100.000%之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。不同地区分离的LP1军团菌既有差异较大的带型,也存在相同和相似的带型;相同地区,菌株间相似性系数存在差异,无优势菌株。15株LP6军团菌可分为12个不同的PFGE型别,菌株间相似性系数在27.87%～100.00%之间。结论 2008-2010年福建省公共场所空调冷却塔水及冷凝水中分离的LP1及LP6军团菌呈现基因多样性。

广东省珠三角某市集中空调系统嗜肺军团菌1型检测及分子分型研究

目的研究广东省珠三角某市2014年公共场所集中空调系统嗜肺军团菌1型（Lp1）的基因特征。方法对该市公共场所集中空调系统的192份水样进行Lp1检测,对检出的18株Lp1采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型,并经Bio Numerics 6.6软件进行聚类分析。结果 192份水样检出18株Lp1,检出率为9.38%;18株Lp1图谱分为10种PFGE型别,不同地区Lp1存在同样的酶切图谱,同一采样点存在2种PFGE型别。菌株间相似性系数在39.84%~100.00%之间。结论广东省珠三角某市2014年公共场所集中空调系统存在一定程度的军团菌污染,Lp1基因型存在多样性。

嗜肺军团菌血清1型上海环境分离株的脂肪酸成分分析及其应用

目的分析上海不同地区和场所分离的嗜肺军团菌血清1型(LP1型)的菌体脂肪酸组成成分,并探讨利用脂肪酸组成分析对实验菌株进行鉴定和分型的可行性。方法应用气相色谱技术对36株LP1型上海环境分离株进行菌体脂肪酸成分分析,并利用MIDI公司的Sherlock软件系统对实验菌株进行鉴定和聚类分析。结果 36株LP1型上海环境分离株均被鉴定为嗜肺军团菌嗜肺亚种,其主要脂肪酸成分为异构16∶0酸、反异构15∶0酸、16∶0酸、2-羟基异构15∶0酸和w7c 16∶1酸。聚类分析结果为所有上海环境分离株的欧氏距离<10。结论气相色谱法简便、快速,结合Sherlock软件系统可用于嗜肺军团菌的脂肪酸检测分析和鉴定。不同地区和场所分离的各实验菌株的脂肪酸组成无明显区别。

2007年上海市部分嗜肺军团菌血清1型菌株PFGE分型研究

[目的]研究2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的嗜肺军团菌1型(Lp1)的基因特征。[方法]从空调冷却塔水中检测到26株Lp1嗜肺军团菌后,使用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对酶切后的Lp1军团菌全染色体DNA进行电泳获得指纹图谱,并用BioNumerics软件对其进行聚类分析。[结果]26株Lp1军团菌可分为15个PFGE型。菌株间相似性系数在30.00%～100.00%之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。大部分PFGE型别的菌株来源场所单一;而大部分同一场所来源的军团菌菌株为相同的PFGE型。[结论]2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的Lp1军团菌呈现基因多样性。

嗜肺军团菌血清1型荧光PCR检测方法的研究

本研究利用嗜肺军团菌O抗原基因簇wzt基因为靶基因,设计并筛选出一对实时荧光PCR引物和TaqMan探针,建立了嗜肺军团菌血清1型(Lp1)实时荧光PCR检测方法。特异性试验显示,3株Lp1出现了典型的扩增曲线,23株近源参考菌株没有扩增。灵敏度试验显示,水中Lp1的检测底线可达到1.1×10^(2) CFU/mL。重复性试验结果显示,高、中、低浓度扩增Ct值相对标准偏差分别为0.51%、0.42%、0.31%。结果表明,该方法特异性好、灵敏度高、重复性好、检测流程短,适于水环境污染状况调查及应急事件快速检测。

浙江省61株嗜肺军团菌血清1型菌株的SBT序列分型

目的了解浙江省空调冷却塔/冷凝水中嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的序列分型特征。方法选取2005～2011年间浙江省10个地区空调冷却塔/冷凝水中分离的61株Lp1型嗜肺军团菌菌株,采用欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)军团菌序列分型(SBT)方法,PCR扩增7对管家基因,对扩增产物进行测序、比对、递交,以获取等位基因号以及SBT序列型,运用DNAsp 5.0软件对测序结果进行核苷酸多态性分析,采用SplitsTree及eBURST软件对分型结果进行聚类分析。结果 61株Lp1型嗜肺军团菌可分为11种SBT序列型,其中5株(5/61)均为新发现序列型;ST-1型在10个地区(市)的冷却塔/冷凝水中均有分布,该序列型菌株占81.9%(50/61)。7个管家基因的核苷酸多态性(Pi)范围为0.01095(mip)～0.05355(pilE)。聚类分析显示,浙江省Lp1型菌株分属多个克隆系,但主要分属ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149三大序列群,另有1株为不属于任何序列群的单体。结论聚类分析表明浙江省空调冷却塔/冷凝水中分离的Lp1型嗜肺军团菌存在遗传多样性,序列群分布与国内部分省份的结果相似,以ST-1序列型为主。

1型嗜肺军团菌的光纤倏逝波生物传感器快速测定法

目的利用光纤倏逝波生物传感器适合现场快速检测的优势,初步建立1型嗜肺军团菌的快速检测平台。方法优化最佳检测条件,并在此条件下确定检测Lp1的灵敏度和特异性,同时通过检测人工模拟样品确认该方法检测实际样本的灵敏度和特异性。结果该方法 40 min之内自动完成检测。捕获抗体与目标物最佳反应时间、反应体系与检测抗体的最佳反应时间均为10 min,捕获抗体最佳使用浓度是100μg/ml,检测抗体最佳使用浓度为20μg/ml。在此条件下得到该方法检测Lp1的灵敏度为1.8×103cfu/ml,检测的特异性强。结论光纤倏逝波生物传感器快速检测方法为大样本量Lp1污染严重水样的现场快速筛查提供一种新途径。

特定人群军团菌抗体水平的调查研究

本文报道了应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测秦皇岛371人特定人群和221人健康人群的嗜肺军团菌1和6型抗体水平。结果表明:环境卫生工人,城市粪便管理人员和污水处理工人的EMT分别员1∶17.84(LP_1)1∶16.85(LP_6),1∶22.87(LP_1)1∶20.45(LP_6),1∶21.19(LP_1)1∶27.50(LP_6)。健康人群的GMT是1∶14.48(LP_1)1∶15.32(LP_6)。这些特定人群与健康人群LP_1型抗体的GMT有显著性差异;LP_6型抗体GMT除环卫工人外所有的特定人群与健康人群有显著性差异。本文还证实嗜肺军团菌1和6型抗体之间有明显的交叉反应。

昆明地区儿童非典型病原体感染病原学回顾性分析

【目的】了解昆明地区儿童呼吸道非典型病原体病原感染情况、对阳性患儿临床特点进行分析。【方法】对2005～2006年临床诊断为急性下呼吸道感染（acute lower reft respiratory infection，ALRI）的890例患儿，应用间接免疫荧光法进行4种非典型病原体：肺炎支原体（mycoplasma pneumonia，MP）、嗜肺军团菌1型（1egionella pneu mophilal，Lp1）、肺炎衣原体（chlamydia pneumonia，CPn）、Q热立克次体（Q fever rickettsia，QFR）血清IgM抗体联合检测，对阳性病例进行回顾性临床分析。【结果】890例ALRI患儿中检出阳性病例309例（其中混合感染13例），总阳性率34．7％。结果显示：MP感染率最高（17．0％），其它依次为LP1（12．9％）、CPn（1．8％）、QFR（1．6％）。MP年龄组间感染率比较差异无显著性（P〉0．05）；LP1随年龄增长感染率增高，年龄组间差异有显著性（χ2=29．3923，P〈0．01）；～1岁组未检出CPn；～14岁组未检出QFR。临床可表现低热无痰咳嗽，干咳气促可伴胸痛或消化道症状，肺部体征不明显，胸片可见不同程度浸润等，部分患儿可出现肺外合并症。【结论】MP、LP1是昆明地区儿童非典型病原体感染的主要病原，临床表现无特异性，应重视非典型病原体的实验室依据，合理诊治。