福建省嗜肺军团菌血清1型及血清6型菌株PFGE分型研究

目的研究福建省2008年至2010年公共场所空调冷却塔水及冷凝水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)及血清Ⅵ型(LP6)的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对57株LP1型军团菌及15株LP6军团菌进行电泳,并用BioNumerics(version 6.0,Applied Maths,Inc)软件包对其进行聚类分析。结果 57株LP1军团菌可分为40种PFGE型,菌株间相似性系数在24.107%～100.000%之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。不同地区分离的LP1军团菌既有差异较大的带型,也存在相同和相似的带型;相同地区,菌株间相似性系数存在差异,无优势菌株。15株LP6军团菌可分为12个不同的PFGE型别,菌株间相似性系数在27.87%～100.00%之间。结论 2008-2010年福建省公共场所空调冷却塔水及冷凝水中分离的LP1及LP6军团菌呈现基因多样性。

电影院空调系统冷却塔水中分离到1株嗜肺9型军团菌

目的 :对广州市某电影院中央空调冷却塔水进行细菌学调查。方法 :用分离培养法 ,依据菌落形态的符合和在缺乏 L -半胱氨酸的平板和血平板不生长初判军团菌 ,再用血清凝集进行分型 ,结合生化反应和 PCR实验进行确证。结果 :用本文方法成功检测出某电影院中央空调冷却塔水有军团菌存在。结论 :该市应改进空调系统冷却塔设计 ,经常进行水质消毒及检测。

四川省嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LP1)基因分型研究

目的为了解四川省嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)基因特征,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)和基因序列分型(SBT)两种方法对四川省1989—2016年分离到的42株嗜肺军团菌血清I型(LP1)进行基因分型研究。方法根据文献报道的军团菌8个VNTR位点和SBT 7个管家基因对42株嗜肺军团1型菌(LP1)分别进行PCR扩增。VNTR结果经毛细管电泳分析后,得到MLVA分型。SBT结果测序后上传至欧洲军团菌感染组(EWGLI)数据库得到ST分型。结果 42株嗜肺军团菌血清I型(LP1)分为8个MLVA型,优势型别为M08型(47.6%)和M07型(23.8%)。SBT分为12个ST型,其中有2个ST型(ST2359,ST2360)为首次发现。ST1(52.3%)、ST630(14.2%)为优势型别。12个ST型分为3个克隆群(Clonal Complex,CCs)和2个singleton。结论 MLVA方法和SBT方法均能用于LP1型分子流行病学监测及分子遗传学特征的研究。四川省LP1型具备较高的遗传多样性和地区特异性,有感染人的风险,应加强对公共卫生环境中军团菌的监测工作。

深圳市嗜肺军团菌血清Ⅰ型菌株PFGE分型指纹图谱研究

目的研究深圳市公共场所中央空调冷却塔水中分离的嗜肺军团菌血清Ⅰ型(LpⅠ)的基因特征。方法应用脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,PFGE)技术对30株LpⅠ型军团菌进行电泳,并经Bionumer-ics软件进行聚类分析。结果30株菌可分为28种PFGE型。不同地区间分离出部分菌株,经PFGE分型,相似性系数为100%,表明深圳市公共场所中央空调冷却塔水间可能存在交叉污染;同一地区,菌株间相似性系数存在差异,没有优势菌株;同一采样地点,存在两种以上PFGE型别。结论深圳市公共场所冷却塔水中分离的LpⅠ型菌株基因呈多样性。

嗜肺军团菌血清1型上海环境分离株的脂肪酸成分分析及其应用

目的分析上海不同地区和场所分离的嗜肺军团菌血清1型(LP1型)的菌体脂肪酸组成成分,并探讨利用脂肪酸组成分析对实验菌株进行鉴定和分型的可行性。方法应用气相色谱技术对36株LP1型上海环境分离株进行菌体脂肪酸成分分析,并利用MIDI公司的Sherlock软件系统对实验菌株进行鉴定和聚类分析。结果 36株LP1型上海环境分离株均被鉴定为嗜肺军团菌嗜肺亚种,其主要脂肪酸成分为异构16∶0酸、反异构15∶0酸、16∶0酸、2-羟基异构15∶0酸和w7c 16∶1酸。聚类分析结果为所有上海环境分离株的欧氏距离<10。结论气相色谱法简便、快速,结合Sherlock软件系统可用于嗜肺军团菌的脂肪酸检测分析和鉴定。不同地区和场所分离的各实验菌株的脂肪酸组成无明显区别。

延安市571例呼吸科患者嗜肺军团菌Ⅰ型感染调查

目的了解延安市呼吸科住院患者嗜肺军团菌的感染情况。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对2013年1月—2013年12月延安大学附属医院571例呼吸科住院患者的血清标本进行Ⅰ型嗜肺军团菌抗体（Lpl）测定。结果患者中Lp1抗体总阳性率为15．76％（90／571），其中男性感染率为17．61％（59／335），女性感染率为13．14％（31／236）。男女感染率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论延安市存在一定程度的嗜肺军团菌Ⅰ型的感染，还需进一步了解其它血清型在本地的感染情况和分布范围，同时提高军团菌血清学监测工作。

抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立

目的:制备针对嗜肺军团菌血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。方法:用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果:研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM(2株)、IgG3(1株)和IgG1(5株);利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2.6×105cfu/mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心ELISA检测方法。

小儿肺炎支原体、嗜肺军团菌Ⅰ型双重感染83例临床分析

目的探讨肺炎支原体、嗜肺军团菌I型双重感染临床特点,提高对肺炎支原体、嗜肺军团菌I型双重感染的诊治水平。方法对该院2010年1月—2012年9月诊断的83例肺炎支原体、嗜肺军团菌I型双重感染患儿的临床资料进行回顾性分析。结果肺炎支原体、嗜肺军团菌I型双重感染患儿热峰高、热程长,咳嗽剧烈,婴幼儿易伴喘息。83例患儿中49例患儿出现肺外表现,其中心血管系统损害16例,血液系统损害15例,消化系统损害11例,皮肤系统损害3例,神经系统损害3例,泌尿系统损害1例。采用大环内酯类抗生素及对症治疗,除1例以肝功能损害为首发症状的患儿治疗3d自动出院外,其余患儿疗效显著。结论小儿肺炎支原体、嗜肺军团菌I型混合感染时表现复杂多样,可致多脏器损伤的肺外合并症表现,应引起临床高度重视。

微量凝集试验与酶联免疫吸附试验检测军团菌抗体的比较

目的比较微量凝集试验(MAT)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中嗜肺型军团菌(Legionella pneumophila,Lp)抗体的优缺点。方法用MAT法和ELISA法检测400份南京地区公共场所从业人员的血清标本中嗜肺军团菌抗体,采用描述流行病学方法进行分析。结果 MAT法检出阳性标本51份,阳性率为12.75%,ELISA法共检出阳性标本47份,总阳性率为11.75%,差异无统计学意义(χ2=0.186,P>0.05),结果高度一致(k=0.930,u=32.75)。ELISA法检出LpIgM阳性标本28份,阳性率为7.00%,与MAT法检测结果差异有统计学意义(χ2=7.430,P<0.05);ELISA法检出Lp-IgG阳性42份,阳性率为10.50%,与MAT法检测结果差异无统计学意义(χ2=0.986,P>0.05);ELISA法检出Lp-IgM和LpIgG阳性率差异无统计学意义(χ2=3.188,P>0.05)。结论 ELISA法快速、操作简便,与MAT法检测嗜肺军团菌抗体结果高度一致,可应用于大批量标本检测。

2007年上海市部分嗜肺军团菌血清1型菌株PFGE分型研究

[目的]研究2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的嗜肺军团菌1型(Lp1)的基因特征。[方法]从空调冷却塔水中检测到26株Lp1嗜肺军团菌后,使用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术对酶切后的Lp1军团菌全染色体DNA进行电泳获得指纹图谱,并用BioNumerics软件对其进行聚类分析。[结果]26株Lp1军团菌可分为15个PFGE型。菌株间相似性系数在30.00%～100.00%之间不等,大部分菌株的PFGE型别差异明显,无优势型别。大部分PFGE型别的菌株来源场所单一;而大部分同一场所来源的军团菌菌株为相同的PFGE型。[结论]2007年上海市公共场所部分空调冷却塔水中分离出来的Lp1军团菌呈现基因多样性。

浙江省61株嗜肺军团菌血清1型菌株的SBT序列分型

目的了解浙江省空调冷却塔/冷凝水中嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的序列分型特征。方法选取2005～2011年间浙江省10个地区空调冷却塔/冷凝水中分离的61株Lp1型嗜肺军团菌菌株,采用欧盟军团菌感染工作组(EWGLI)军团菌序列分型(SBT)方法,PCR扩增7对管家基因,对扩增产物进行测序、比对、递交,以获取等位基因号以及SBT序列型,运用DNAsp 5.0软件对测序结果进行核苷酸多态性分析,采用SplitsTree及eBURST软件对分型结果进行聚类分析。结果 61株Lp1型嗜肺军团菌可分为11种SBT序列型,其中5株(5/61)均为新发现序列型;ST-1型在10个地区(市)的冷却塔/冷凝水中均有分布,该序列型菌株占81.9%(50/61)。7个管家基因的核苷酸多态性(Pi)范围为0.01095(mip)～0.05355(pilE)。聚类分析显示,浙江省Lp1型菌株分属多个克隆系,但主要分属ST-1序列群、ST-154序列群和ST-149三大序列群,另有1株为不属于任何序列群的单体。结论聚类分析表明浙江省空调冷却塔/冷凝水中分离的Lp1型嗜肺军团菌存在遗传多样性,序列群分布与国内部分省份的结果相似,以ST-1序列型为主。

广东省珠三角某市集中空调系统嗜肺军团菌1型检测及分子分型研究

目的研究广东省珠三角某市2014年公共场所集中空调系统嗜肺军团菌1型（Lp1）的基因特征。方法对该市公共场所集中空调系统的192份水样进行Lp1检测,对检出的18株Lp1采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行分子分型,并经Bio Numerics 6.6软件进行聚类分析。结果 192份水样检出18株Lp1,检出率为9.38%;18株Lp1图谱分为10种PFGE型别,不同地区Lp1存在同样的酶切图谱,同一采样点存在2种PFGE型别。菌株间相似性系数在39.84%~100.00%之间。结论广东省珠三角某市2014年公共场所集中空调系统存在一定程度的军团菌污染,Lp1基因型存在多样性。

1型嗜肺军团菌的光纤倏逝波生物传感器快速测定法

目的利用光纤倏逝波生物传感器适合现场快速检测的优势,初步建立1型嗜肺军团菌的快速检测平台。方法优化最佳检测条件,并在此条件下确定检测Lp1的灵敏度和特异性,同时通过检测人工模拟样品确认该方法检测实际样本的灵敏度和特异性。结果该方法 40 min之内自动完成检测。捕获抗体与目标物最佳反应时间、反应体系与检测抗体的最佳反应时间均为10 min,捕获抗体最佳使用浓度是100μg/ml,检测抗体最佳使用浓度为20μg/ml。在此条件下得到该方法检测Lp1的灵敏度为1.8×103cfu/ml,检测的特异性强。结论光纤倏逝波生物传感器快速检测方法为大样本量Lp1污染严重水样的现场快速筛查提供一种新途径。

嗜肺军团菌血清1型荧光PCR检测方法的研究

本研究利用嗜肺军团菌O抗原基因簇wzt基因为靶基因,设计并筛选出一对实时荧光PCR引物和TaqMan探针,建立了嗜肺军团菌血清1型(Lp1)实时荧光PCR检测方法。特异性试验显示,3株Lp1出现了典型的扩增曲线,23株近源参考菌株没有扩增。灵敏度试验显示,水中Lp1的检测底线可达到1.1×10^(2) CFU/mL。重复性试验结果显示,高、中、低浓度扩增Ct值相对标准偏差分别为0.51%、0.42%、0.31%。结果表明,该方法特异性好、灵敏度高、重复性好、检测流程短,适于水环境污染状况调查及应急事件快速检测。

特定人群军团菌抗体水平的调查研究

本文报道了应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测秦皇岛371人特定人群和221人健康人群的嗜肺军团菌1和6型抗体水平。结果表明:环境卫生工人,城市粪便管理人员和污水处理工人的EMT分别员1∶17.84(LP_1)1∶16.85(LP_6),1∶22.87(LP_1)1∶20.45(LP_6),1∶21.19(LP_1)1∶27.50(LP_6)。健康人群的GMT是1∶14.48(LP_1)1∶15.32(LP_6)。这些特定人群与健康人群LP_1型抗体的GMT有显著性差异;LP_6型抗体GMT除环卫工人外所有的特定人群与健康人群有显著性差异。本文还证实嗜肺军团菌1和6型抗体之间有明显的交叉反应。

昆明地区儿童非典型病原体感染病原学回顾性分析

【目的】了解昆明地区儿童呼吸道非典型病原体病原感染情况、对阳性患儿临床特点进行分析。【方法】对2005～2006年临床诊断为急性下呼吸道感染（acute lower reft respiratory infection，ALRI）的890例患儿，应用间接免疫荧光法进行4种非典型病原体：肺炎支原体（mycoplasma pneumonia，MP）、嗜肺军团菌1型（1egionella pneu mophilal，Lp1）、肺炎衣原体（chlamydia pneumonia，CPn）、Q热立克次体（Q fever rickettsia，QFR）血清IgM抗体联合检测，对阳性病例进行回顾性临床分析。【结果】890例ALRI患儿中检出阳性病例309例（其中混合感染13例），总阳性率34．7％。结果显示：MP感染率最高（17．0％），其它依次为LP1（12．9％）、CPn（1．8％）、QFR（1．6％）。MP年龄组间感染率比较差异无显著性（P〉0．05）；LP1随年龄增长感染率增高，年龄组间差异有显著性（χ2=29．3923，P〈0．01）；～1岁组未检出CPn；～14岁组未检出QFR。临床可表现低热无痰咳嗽，干咳气促可伴胸痛或消化道症状，肺部体征不明显，胸片可见不同程度浸润等，部分患儿可出现肺外合并症。【结论】MP、LP1是昆明地区儿童非典型病原体感染的主要病原，临床表现无特异性，应重视非典型病原体的实验室依据，合理诊治。