嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的分离和致弱培育

利用鸡胚分离法从发生肾变病型传染性支气管炎的病鸡分离嗜肾型传染性支气管炎病毒X株,该病毒株能引起鸡胚发育受阻,鸡胚和雏鸡肾脏肿大、输尿管尿酸盐沉积,能被传染性支气管炎病毒M型血清部分中和,初步研究表明是一个新的毒株。通过SPF鸡胚连续传代,获得了嗜肾型传染性支气管炎弱毒疫苗毒株X 93。结果显示,X株经过鸡胚传代,对鸡胚的致死率由原代的0上升到90代的82%;在每0.1 mL鸡胚中的病毒含量由原代的105.0E ID50上升到90代的107.8E ID50;对3日龄SPF雏鸡的致病率和致死率分别由40代时的70.0%和40.0%下降到90代时的0值;与X 93接种鸡一同饲养的实验鸡全部健康存活;X 93回归雏鸡连传5代,未见毒力返强现象。

禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株(X株)核衣壳基因的克隆和序列分析

根据已发表的禽传染性支气管炎病毒 (IBV) Beaudette株核衣壳基因序列 ,设计了 1对特异性引物 ,采用 RT-PCR方法 ,克隆了禽传染性支气管炎病毒嗜肾毒株 (X株 )的核衣壳基因 ,并测定了其序列。 X株 IBV与来自 Gen Bank的其他 10株 IBV相比 ,共存在 136个点突变 ,其中有 15处是连续突变区域 ,这些点突变总体呈散在分布。X株与其他毒株的核衣壳蛋白同源性在 90 .2 %～ 99.0 %之间 ,X株 IBV与同为肾型的 N株同源性最高。

鸡传染性支气管炎(嗜肾型)活疫苗(W93株)的研究

从国内发病鸡群中分离到鸡传染性支气管炎 (嗜肾型 )病毒 (NIBV) ,并培育成弱毒W93株。自 1994年 ,我们对该毒株进行了鉴定和活疫苗的研制 ,结果证明W93株具有特异性强、良好的安全性和免疫原性 ,病毒含量不低于 10 8.0 EID50 / 0 .1ml。通过实验室试验和现场应用证明 。

肾型鸡传染性支气管炎病毒X株S1基因序列的测定及同源性分析

根据国外已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV) S1基因序列 ,设计了 2对引物并以 RT- PCR特异性扩增出IBV X株的 S1基因 ,基因产物大小为 1.6 4kb,与设计相符 ,对其进行序列测定后 ,与标准毒株 H5 2、H12 0、M41、BEAU和澳大利亚 T株的 S1基因进行同源性比较。结果表明 ,X株与 H5 2、H12 0、M41、BEAU和澳大利亚 T株的核苷酸序列的同源性分别为 75 .8%、76 .1%、76 .3%、75 .5 %和 76 .9%,由此可以看出 ,IBV X株与标准毒株在 S1基因上存在较大差异。

嗜肾型鸡传染性支气管炎W_(93)株活疫苗的研究及其S1基因的克隆与序列测定

利用鸡胚分离法由发生肾病变型传染性支气管炎 (IB)的病鸡分离到嗜肾型传染性支气管炎病毒 (NIBV)W株 ;再通过SPF鸡胚连续传代 ,获得了NIBV疫苗毒株W93;继而借助RT PCR法扩增了其S1基因 ,并测定了S1基因的核苷酸序列 ,分析了与相关毒株间的同源性。结果显示 ,W93株在鸡胚中的病毒产量达 10 7.8EID50 /0 .1mL ,适用于所有日龄的雏鸡 ;W93S1基因的核苷酸序列与马萨诸塞型的M4 1株、H52 株和H12 0 株的同源性很高 ,分别为 96 .9%、96 .8%和 97.1%。表明 。

嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒W93疫苗株S1基因的克隆与序列测定

根据国外已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)S1基因序列 ,设计了两对引物并以RT_PCR特异性扩增出嗜肾型IBVW93疫苗株的S1基因 ,基因产物大小为 1.6 2kb ,与设计相符 ,对其进行序列测定后 ,与标准毒株H5 2、H12 0、M41、BEAU株的S1基因进行同源性比较 ,结果表明 ,W93株与H5 2、H12 0、M41和BEAU株的核苷酸序列的同源性分别为 96 .8%、97.1%、96 .9%和 96 .8% 。

鸡肾型传染性支气管炎病毒FX株的分离和鉴定

从自然发生的鸡肾病变型传染性支气管炎病例采集病死鸡肾脏为材料 ,通过接种 9～ 11日龄SPF鸡胚尿囊腔 ,进行病毒的分离和传代 ,分离到 1株病毒 (FX)。敏感鸡人工感染后出现呼吸症状 ,剖检病鸡时大多鸡肾肿大并有尿酸盐沉积 ;病毒能致死鸡胚和产生侏儒胚 ;病毒能干扰鸡新城疫病毒LaSota株在鸡胚中增殖 ;病毒经电镜观察 ,其大小在 80～ 12 0nm之间 ,囊膜外有纤突 ;病毒经IBV单抗ELISA检测呈强阳性反应。研究结果初步表明 ,FX毒株为肾型IBV。

肾型禽传染性支气管炎病毒(IBV)Z株S1基因的结构与变异

利用 1对 p UC质粒通用测序引物和 3条合成引物 ,通过步移法完成了肾型 IBV Z株 S1基因全部序列测定。所测序列已被 GENBANK收录 ,收入号为 AF1 4 0 352。该片段全长 1 74 7bp,含有 1个无终止子的阅读框架 ,编码 558个氨基酸。与 IBV-Beaudette株 S1基因序列比较 ,同源性为 77% ,并出现部分碱基的缺失与重组。无 Bam H 、Eco R 酶切位点 ,Pst 位点也未出现 ;氨基酸同源性为 74 %。

鸡肾型传染性支气管炎病毒组织嗜性的研究

本研究用鸡肾型传染性支气管炎病毒 (肾型 IBV) C90 0 1株人工感染 14日龄 SPF鸡 ,于接种后定期采集病鸡的各组织器官制备成石蜡切片 ,用建立的检测石蜡切片中肾型 IB病毒的免疫酶组化染色技术 ,对人工感染肾型传染性支气管炎 (肾型 IB)鸡发病后病毒的组织器官亲嗜性和动态分布规律进行了研究。结果表明 ,肾型 IBV在胞浆内复制 ,主要亲嗜气管黏膜的上皮细胞和固有层腺体细胞、肺各级支气管上皮细胞以及肺房和呼吸性毛细管上皮细胞、气囊上皮细胞、肾和输尿管上皮细胞、消化道上皮和固有层腺体细胞、肝小叶间胆管上皮细胞、胰腺导管上皮细胞和腺泡上皮细胞、法氏囊淋巴滤泡髓质区淋巴细胞和网状细胞、胸腺小叶髓质区淋巴细胞和网状细胞、脾小体淋巴细胞、盲肠扁桃体弥散性淋巴组织的淋巴细胞以及心肌细胞 ,病毒出现的先后顺序为气管、肺脏、肾脏、输尿管 ,消化道、法氏囊、肝脏、胰脏、胸腺和气囊 ,盲肠扁桃体 ,脾脏 ,心肌。病毒在肾脏和输尿管持续 2 0天 ,气管为 13天 ,消化道和法氏囊为 11天 ,肝脏、胰脏和肺为 10天 ,胸腺为 6天 ,气囊为 5天 ,盲肠扁桃体、脾脏。

鸡传染性支气管炎病毒肾型毒株血凝特性的研究

本文对鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）澳大利亚Ｔ株和分离的四株肾型毒株（ＢＪ＿（９３０１）、ＢＪ＿（９３０２）、ＴＪ＿（９３０１）、ＨＮ＿（９３０１）株）的血凝特性进行了系统研究。结果表明ＩＢＶ供试毒株经１～２％胰蛋白酶处理后，能凝集鸡和小鼠红细胞，同一毒株对两种红细胞的凝集价相近，且均能被ＩＢＶ澳大利亚Ｔ株血清所抑制。处理后的ＩＢＶ对鸡红细胞的血凝以缓冲液浓度０．０１～０．０５ＭｐＨ６．０～８．４为宜，对反应温度及稀释液种类无严格要求。ＩＢＶ的血凝活性能耐受３７℃２３天、５６℃１２小时、８０℃１．５小时，但在－３０℃、４℃和室温下保存２个月后，绝大部分丧失血凝活性。ＩＢＶ经０．２％甲醛、０．２％脱氧胆酸钠、２％硼氢化钠、０．０１Ｍ高碘酸钠３７℃灭活２４小时，仍能保持其血凝活性。从ＩＢＶ的血凝活性可被过量胰蛋白酶破坏和氯仿灭活，推断该血凝素可能是由脂质和蛋白质组成。

鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西地方株的分离与鉴定

对陕北(榆林)、关中(宝鸡市、扶风县)、陕南(洋县)等地鸡场疑似肾型传染性支气管炎病鸡,进行了病毒分离和鉴定。结果分离到4株IBV(定名为YL-04、BJ-04、FF-04、YX-04),并对分离病毒进行了血凝性、血凝抑制性、致病性、鸡胚矮小化等生物学特性鉴定。结果发现,分离的4株病毒经1%胰酶处理后的各代病毒尿囊收集液均可凝集鸡红细胞;IBV标准阳性血清可特异性的抑制其凝集性;回归试验可复制出与自然发病相同的病例;病毒传代物有明显的致鸡胚矮小化作用。以上研究结果表明,我们分离到的是鸡传染性支气管炎病毒,临床表现为致肾脏病变的组织嗜性,证明以上地区鸡群发病与肾型传染性支气管炎病毒感染有关。

鸡肾型传染性支气管炎地方株分离鉴定

自黑龙江省牡丹江、密山两地自然发病鸡场分离到 2株病毒。经鸡胚连续盲传至第 5代时出现胚体蜷缩成团状、暗淡无光 ,头、翅、肢有出血点。经理化测定试验、气管环感染试验、回归试验等检测 ,鉴定分离的 2株病毒为鸡肾型传染性支气管炎病毒株 ,暂定名为MK、M2 。

鸡传染性支气管炎肾型毒株的分离与鉴定

山东某些大型鸡场近年连续暴发一种传染快、发病急、死亡率高的呼吸道疾病，主要是肾脏病变，从死亡率较高的几批雏鸡分离到两株病毒19401，H9402．接种鸡雏可使其发病、死亡。通过鸡胚接种、血凝试验、电镜形态观察，分离物为传染性支气管炎病毒。经血清中和试验鉴定这两株病毒为肾型IBV株。

鸡传染性支气管炎肾型弱毒株J9的免疫原性试验

以不同剂量 (1 0 3 .8～ 1 0 4 .9TOCID50 /只 )的IB肾型弱毒株J9免疫接种 1 5～ 70日龄SPF鸡 ,然后用部分国内分离的IBV肾型强毒株HV、NB90、L_1、TJ和国外肾型标准强毒株T攻击。三次试验初步表明 ,J9株具有对这些强毒株攻击的不同程度的免疫保护作用。

鸡传染性支气管炎嗜肾性W93株活疫苗研究Ⅱ.NIBVW93株的培育

将 NIBV X株病毒 ,在 SPF鸡胚中连续传至 80代 ,雏鸡发病率及死亡率均明显降低 ,传至 90代 ,对易感鸡接种后无不良反应 ,不影响增重 。

鸡肾型传染性支气管炎(HK株)活疫苗生产条件的探讨

采取不同浓度的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)接种不同日龄的鸡胚,在不同时间内收获鸡胚液.根据收获时鸡胚的死亡情况、胚液的收获量及胚液的病毒含量,优选IBV活疫苗生产的最佳条件.结果表明,将mV调整为102.0～103.0ED50/0.1ml,尿囊内接种于12日龄鸡胚中,每胚0.1ml,37℃孵育33h收获,胚液的产毒量和收获量最高.

肾型鸡传染性支气管炎病毒DQ株S_1基因结构分析

选用Trizol试剂抽提肾型鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)DQ株基因组RNA ,采用特异性引物通过RT -PCR扩增其S1基因cDNA ,克隆入pBluescript质粒载体中 ,作测序分析。结果表明 ,DQ株S1基因全长为 1731nt ,编码一条 5 76个氨基酸组成的多肽 ,其核苷酸与IBV - 4 / 91,Gray ,D4 1,Bei jing ,ZJ971,Beaudette ,H12 0 ,M4 1毒株的同源性为 78.4 %～ 82 .73% ,氨基酸同源性为 74 .4 1%～ 78.96 %。DQ株不同于其它血清型IBV的主要特征为 :在S1基因核苷酸序列上 ,第 2 78- 2 99位之间插入了一段新的序列 ,第 4 2 3- 4 31位碱基缺失 ,有许多点突变 ;二级结构上表现为第 2 - 2 2位氨基酸区域、第 92 - 98位氨基酸区域亲水性增强 ,第 74 - 76位氨基酸区域疏水性增强 ,最大亲水峰改变。S1分子进化系统分析显示 ,DQ株与其它各毒株的亲缘关系较远。

鸡肾型传染性支气管炎病毒弱毒株的选育

从南京地区分离的肾病变型传染性支气管炎病毒(IBV)经SPF鸡胚连续传代至65代时 ,对雏鸡无致病性 ,命名为IBV -AT65,感染鸡胚的EID50 为10 -7.66/0.2mL ,鸡胚于接种后51h开始死亡 ,存活鸡胚表现为发育受阻、卷缩 ,肾脏有尿酸盐沉积 ,其尿囊液对1 %鸡红细胞凝集反应为阴性。用AT65 原液0.2mL分别于气管内接种10日龄AA鸡(攻毒前经血凝抑制试验检测IBV抗体为阴性),以及攻毒后将鸡舍降温到20℃12h ,观察20d ,均未发现有临床症状。剖杀攻毒鸡 ,肾脏无肿大及尿酸盐沉积现象 ,做病理切片未出现病理变化 ,表明该毒株确已致弱。将AT65 经10日龄SPF鸡盲传10代 ,无毒力返强现象 。

一株鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定

2004年从贵阳市某鸡场发生的以呼吸道症状、肾肿大、输尿管有尿酸盐沉积为特征的病鸡群采集样品(肝、脾、肾),接种鸡胚,盲传3代,进行病原分离并将分离病毒命名为IB2。分离病原经过鸡胚传代可见胚体卷曲、发育阻滞、肾肿大、肾小管和输尿管有尿酸盐沉积的典型胚胎病变特征,经血凝性检测、对新城疫增殖的干扰试验证明该分离毒株为肾型传染性支气管炎病毒。

鸡传染性支气管炎肾型弱毒株J_9的安全性试验

以不同剂量 (10 3.3～ 10 5.5TOCID50 )IB肾型弱毒J9株 ,经眼、鼻途径接种 1～ 6 7日龄不同品种的鸡、接种后 2周内无任何临床不良反应 ,表明了J9株的临床安全性。将J9株用SPF雏鸡在负压隔离器内连续 7次传代 ,均无临床不良反应 ,并回收到病毒株 ,该毒株的临床安全性和遗传稳定性得到进一步证明。