嗜热链球菌发酵剂的筛选及其发酵特性研究

嗜热链球菌作为发酵剂菌株,其发酵特性直接影响着酸奶质地和风味。本研究采用选择性平板、形态观察和16S rDNA基因序列分析,从发酵乳制品和植物制品样品中共鉴定出10株嗜热链球菌;并通过测定菌株生长曲线、pH值及乳酸产量,从中筛选出S.thermophilus ST-M-03和ST-P-07两株性能较好的菌株。培养14h发现,ST-M-03和ST-P-07的OD_(600)为1.75,pH值分别为4.44和4.47,乳酸含量为241.63和238.17μmol/mL;两株菌株在5h内均可使酸奶的pH值达到4.5;贮藏期结束S.thermophilus ST-M-03和ST-P-07发酵的酸度分别增加了7.64和10.13 T,活菌数为8.74和8.78 lg CFU/g,黏度为3602.78和20140.38mPa·s,离心沉淀率为57.18%和49.99%。表明S.thermophilus ST-M-03和ST-P-07菌株均具有良好的生产性能,其产酸能力、弱后酸、稳定性和低离心沉淀率均与商品化发酵剂菌株相当,是两株性能优良的酸奶发酵剂菌株。

兰州百合粗低聚糖对嗜热链球菌ATCC-14485和保加利亚乳杆菌ATCC-11842产酸及增殖的影响

益生元在促进益生菌生长、调节肠道微生态平衡方面发挥着重要作用。为探究兰州百合粗低聚糖(crude lily oligosaccharides,CLOs)的益生元特性,以兰州百合干为原料,提取、表征CLOs;以低聚果糖和菊粉作为阳性对照,测定CLOs在人工胃肠溶液的水解度,以及对嗜热链球菌ATCC-14485和保加利亚乳杆菌ATCC-11842的产酸、增殖作用的影响。结果表明:CLOs分子量为1194 Da,主要由甘露糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,摩尔比为1:3.57:16.40;CLOs经人工胃肠溶液消化后水解度是26.96%,显著低于菊粉(P<0.05);CLOs促进乳酸菌发酵产酸的效果显著优于菊粉和低聚果糖(P<0.05);当CLOs的添加量为1.0%(W/V)时,能有效促进嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的增殖,并减缓二者在货架期的死亡速率。研究结果说明CLOs具有益生元特性,可为新型共生发酵乳的研发提供理论依据。

养殖水体添加嗜酸小球菌对鳜发育过程肠道微生物构成的影响

从鳜（Siniperca chuatsi）出膜仔鱼阶段开始向养殖水体添加5×10~7CFU/L的嗜酸小球菌（Pediococcus acidilactici）,利用PCR-DGGE技术对鳜受精卵、出膜仔鱼、仔稚鱼和其开口饵料白鲢仔稚鱼的肠道微生物群落结构组成和多样性进行了分析。DGGE图谱的条带克隆测序结果显示,组成鳜鱼苗各阶段的细菌主要隶属于α-变形菌纲（Alphaproteobacteria）、β-变形菌纲（Betaproteobacteria）、γ-变形菌纲（Gammaproteobacteria）、异常球菌纲（Deinococci）、黄杆菌纲（Flavobacteria）。其中黄杆菌属（Flavobacterium）为鳜受精卵特有细菌;异常球菌属（Deinococcus）、红杆菌属（Rhodobacter）和菊苣假单胞菌（Pseudomonas cichorii）是受精卵和仔鱼共有优势细菌,但在仔稚鱼中没有或只有极少分布;肠杆菌属（Enterobacter）是鳜仔稚鱼和开口饵料白鲢仔稚鱼的共有优势细菌;类志贺邻单胞菌（Plesiomonas shigelloides）和豚鼠气单胞菌（Aeromonas caviae）在对照组仔稚鱼的分布明显比试验组丰富。

嗜酸小球菌对凡纳滨对虾体液免疫因子的影响

在饲料中添加不同剂量的嗜酸小球菌投喂凡纳滨对虾,并在投喂后的20、40和60d,分别测定凡纳滨对虾血清中的一氧化氮合酶(NOS)、溶菌活力(Bacteriolytic activity)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP),并分析了这5种酶之间的相关性。结果显示,嗜酸小球菌能有效提高凡纳滨对虾体内的NOS、溶菌活力、T-SOD、ACP、AKP的活性;NOS与溶菌活力存在显著正相关性(P<0.05),与SOD存在显著负相关性,溶菌活力与AKP存在显著负相关性。表明在饲料中添加适量的嗜酸小球菌(剂量10mg/kg)可使凡纳滨对虾体液免疫因子活力到达较高的水平;凡纳滨对虾血清中一氧化氮合酶对于嗜酸小球菌的添加量较为敏感,可作为评价嗜酸小球菌使用效果的指标之一。

嗜酸小球菌对日本鳗鲡生长和免疫的影响

在饲料中分别添加3.0×108kg-1(A组)、1.5×108kg-1(B组)、1.0×108kg-1(C组)的嗜酸小球菌,制成3种实验饲料,以不添加嗜酸小球菌(D组)作为对照,饲养日本鳗鲡60d,以研究嗜酸小球菌对日本鳗鲡生长和免疫的影响。测定了增重率、饵料系数、成活率、血清中一氧化氮含量以及人工感染后的死亡率,并通过电镜观察了小肠壁细胞的微绒毛结构。结果表明A、B、C组和对照组的相对增重率分别为42.31%、75.42%、89.65%和40.32%,饲料系数分别为1.93、1.12、0.98和1.58,C组的相对增重率显著高于其他组,饵料系数则显著低于其他组,成活率也显著提高。电镜观察发现C组和B组的鳗鲡小肠细胞微绒毛排列整齐、细而长,吸收面积增大,从而提高了对饲料利用率,D组鳗鲡小肠细胞的微绒毛稀疏、短,排列不均匀。血清中NO的含量A、B、C组分别比对照组提高了23%、42%和73%。C组人工感染后的死亡率显著低于其他组。实验结果表明,在鳗鲡饲料中添加嗜酸小球菌可以显著促进鳗鲡的生长,降低饵料系数,增强其免疫力。

嗜热链球菌产酸特性及其发酵乳中有机酸组分分析

选取实验室分离自自然发酵乳制品中的5株嗜热链球菌菌株为研究对象,进行单菌株发酵酸乳,在发酵期间和酸乳4℃贮藏504 h阶段,分别测定菌株发酵时间、滴定酸度、p H值、活菌数以及采用反相高效液相色谱法测定有机酸含量变化,研究嗜热链球菌发酵产酸特性及其酸乳贮藏期间后酸化及其有机酸组分的变化特性。结果表明：在42℃发酵期间,5株菌在发酵2 h后p H值迅速下降,达到发酵终点时间在5~9 h,发酵时间最短的是菌株IMAU10632和IMAU20772。在4℃贮藏504 h期间,5株菌的p H值下降幅度在0.5左右,最终p H值稳定在4.2左右,产酸速度均较缓慢,均表现出嗜热链球菌后酸化能力弱的特点,且酸度值均在90 oT以下。初步筛选出一株菌株IMAU10632,凝乳时间短、产酸速率快、后酸化能力较弱,在4℃贮藏期间活菌数维持在108 CFU/m L以上。

嗜酸热硫球菌染色质碱性蛋白的提取

组蛋白是典型真核细胞中普遍存在的染色质碱性蛋白.早已有证据表明它们是一组高度保守的蛋白,其中四种核心组蛋白有着共同的起源,来自于同一始祖性的蛋白(组蛋白H1则有另外的起源).这种始祖性的蛋白如何进化发展成现今的组蛋白,人们最易想到的是从原核生物中去寻找线索.然而,迄今在原核生物的真细菌类(eubacteria)中所发现的染色质碱性蛋白无一与组蛋白有显著的同源性.70年代末以来,原核生物的另一类群——古细菌(Archaebacteria)类的陆续发现为这个问题的探明带来了希望.因为一系列的分子生物学证据表明,在亲缘关系上,古细菌类远比真细菌类更接近真核生物.目前在我国已发现几种古细菌,嗜酸热硫球菌(Sulfosphaerellus thermoacidophilum)即是其中之一.本工作利用我们建立的先用甲醇固定、后用稀盐酸抽提的方法对此古细菌的染色质碱性蛋白进行了提取,并将它与小牛胸腺组蛋白进行了比较研究.

嗜盐四联球菌的分离及其精氨酸代谢

嗜盐四联球菌是存在于酱醪发酵中后期的嗜盐乳酸菌,其代谢精氨酸的特性与氨基甲酸乙酯前体物瓜氨酸的积累存在密切关系。为了降低酱油发酵过程中氨基甲酸乙酯前体物瓜氨酸的积累,研究采用选择性培养基以及gro EL基因特异性对嗜盐四联球菌进行了分离和筛选,得到一株Tetragenococcus halophilus R23。对该菌株在不同培养温度和盐浓度下的精氨酸代谢特性进行了考察。结果表明:在30℃,180 g/L Na Cl培养条件下,嗜盐四联球菌R23消耗精氨酸和瓜氨酸能力最强,消耗量分别为100.0%和64.3%。其中,代谢精氨酸的培养基中未检测到瓜氨酸的积累。这一特性对降低酱油发酵过程中氨基甲酸乙酯前体物瓜氨酸的积累具有重要意义。

诱变育种提高嗜盐四联球菌精氨酸和瓜氨酸利用能力

以1株分离自酱醪的嗜盐四联球菌R23为出发菌株,采用紫外和等离子诱变的方法并通过高通量筛选获得了1株能够减少氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)前体瓜氨酸并能高效利用精氨酸的突变株3-H9。与野生菌株R23相比,突变株3-H9在不利于EC前体代谢的条件下,利用精氨酸和瓜氨酸的能力均有显著提高。通过基因转录水平分析和对相关酶活测定发现,突变株3-H9精氨酸代谢途径中各基因转录水平和相应酶活性均高于野生菌R23。

饲用嗜酸小球菌液体生料发酵工艺研究

为提高嗜酸小球菌液体发酵的活菌数,本试验采用生料发酵技术和单因素试验法研究了发酵培养基组成以及发酵条件对嗜酸小球菌活菌数的影响,并采用正交试验法对发酵条件进行优化。结果表明:适宜的发酵培养基配方和条件为葡萄糖2.5%、酵母抽提粉0.3%、蛋白胨0.6%、K_2HPO_40.1%、CH_3COONa 0.6%、NaCl 3%、发酵温度40℃、种龄60 h、接种量20%。在上述优化条件下发酵36 h,嗜酸小球菌的活菌数对数值为11.258 lg cfu/m L。研究结果显示了液体生料发酵技术适合于饲用嗜酸小球菌的生产。

嗜热链球菌对瑞士乳杆菌发酵乳后酸化的影响

瑞士乳杆菌是潜在的功能发酵乳发酵剂,为改善瑞士乳杆菌的发酵特性,使用嗜热链球菌配合瑞士乳杆菌用于发酵乳制备。结果表明:嗜热链球菌与瑞士乳杆菌混合发酵将凝乳时间缩短了3.5 h,黏度提高了1.8倍,改善了乳清析出和质构;嗜热链球菌的使用有效减弱了发酵乳的后酸化,贮藏20 d发酵乳的pH值仍大于4.2。为研究这一现象的原因,测定发酵乳中的活菌数、乳糖消耗量、谷氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶活性,结果表明,混合发酵乳贮藏期间具有较低的谷氨酸脱羧酶和β-半乳糖苷酶活性,乳糖利用量较低,这是后酸化减弱的主要原因。与嗜热链球菌混合发酵是提高瑞士乳杆菌发酵特性的有效手段。

嗜酸热硫球菌表面层(S-层)的两维结构重建

嗜酸热硫球菌(Shlfosphaerellus thermoacidophilum)S-5菌株是从酸性热泉地区分离出的比较少见的无机化性自养古细菌,被鉴为新属新种,其细胞外壁属于第Ⅲ类型,代表了典型的革兰氏阴性古细菌特征。作者曾通过切片技术初步鉴定细胞外被具有唯一的S-层,由规则排列的六边形亚单位构成。在此基础上,我们进一步对S-层进行了高分辨率图象观察和计算机过滤处理,得到了高有序六角型晶格排列图像。精确测量得到亚单位中心间距为120A,中心体直径56A,轻小体直径32A。S-层厚度为150A。材料和方法:①菌种和培养条件:S-5菌株静置培养在钟慧芳等改进的培养基中,PH2.5,温度70℃。

嗜酸乳杆菌和乳酸乳球菌混合发酵菊芋泡菜的研究

文章主要对嗜酸乳杆菌LA和乳酸乳球菌LL在菊芋泡菜中的应用进行了研究。以亚硝酸盐含量、总酸含量、氨基酸态氮含量为指标,以具有抑菌活性的嗜酸乳杆菌LA和乳酸乳球菌LL为发酵菌种,研究发酵时间、接种量、加糖量、甜味剂用量、加盐量等因素对乳酸菌混合发酵菊芋泡菜的影响。结果表明,低盐发酵时总酸含量、氨基酸态氮含量主要与发酵时间有关,加盐发酵对产酸速度有显著影响,盐浓度在90 g/L时,对乳酸菌发酵产酸有明显抑制作用。嗜酸乳杆菌LA、乳酸乳球菌LL混合发酵有利于控制亚硝酸盐含量,发酵菊芋中的亚硝酸盐含量在发酵1 d或3 d时相对较高,发酵过程中无明显亚硝酸盐高峰。甜菊糖苷的添加量对总酸、氨基酸态氮、亚硝酸盐的变化趋势无明显影响。嗜酸乳杆菌LA和乳酸乳球菌LL混合发酵有利于菊芋泡菜的安全生产。

嗜酸乳杆菌和乳酸乳球菌单独发酵对菊芋泡菜的影响

主要对抗菌性嗜酸乳杆菌LA和乳酸乳球菌LL在菊芋泡菜中的应用进行了研究。以亚硝酸盐含量、总酸含量、氨基酸态氮含量为指标,研究发酵温度、接种量、加糖量、发酵时间等因素对嗜酸乳杆菌LA和乳酸乳球菌LL分别单独发酵菊芋的影响。结果表明,嗜酸乳杆菌LA和乳酸乳球菌LL对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有抑菌性。发酵7d,嗜酸乳杆菌LA产酸较快且亚硝酸盐含量较低的发酵温度为34℃,接种量5%;发酵7~14d,乳酸乳球菌LL产酸较快且亚硝酸盐含量较低的适宜温度为37℃,接种量5%。采用嗜酸乳杆菌LA和乳酸乳球菌LL分别发酵,白砂糖的添加量对菊芋发酵液中总酸含量的变化均无显著影响,白砂糖添加量为5g/kg时,亚硝酸盐含量最低。采用嗜酸乳杆菌LA发酵,发酵液中氨基酸态氮含量要高于乳酸乳球菌LL发酵。发酵过程中菊芋的总酸含量、亚硝酸盐含量、氨基酸态氮含量等各项指标主要受发酵时间的影响,随着发酵时间延长,各指标值趋于稳定。发酵14d时,不同条件发酵,亚硝酸盐含量均降低至5mg/kg以下。抗菌性乳酸菌发酵有利于菊芋泡菜的安全生产。

嗜热链球菌胞外多糖EPS333对酸乳品质的影响

本研究以酸乳为基质,通过测试酸乳酸化速率曲线、脱水收缩敏感性、持水力、水分迁移、质构及流变特性等参数,研究了嗜热链球菌胞外多糖与市场常规应用多糖对酸乳品质的影响。研究结果表明:嗜热链球菌胞外多糖EPS333在酸乳凝胶过程中较其他几种多糖能明显减缓酸化趋势,后熟及储藏阶段减少"自由水"含量,降低流动性,改善其流变特性。

美沙拉秦联合双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌治疗溃疡性结肠炎效果及对患者血清sRAGE、Vaspin、炎性因子等影响

目的观察美沙拉秦联合双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)的效果及对血清可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)、内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)、炎性因子等影响。方法选取UC 96例,根据治疗方法不同将其分为研究组(51例)和对照组(45例)两组。研究组在常规治疗基础上采用美沙拉秦联合双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌进行治疗,对照组在常规治疗基础上仅采用美沙拉秦进行治疗。比较两组治疗2个月后临床效果,治疗前及治疗2个月后血清sRAGE、Vaspin、炎性因子[白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]、氧化应激指标[一氧化氮(NO)、过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)]及便基质金属蛋白酶9(MMP-9)、钙卫蛋白(Cal)、髓过氧化物酶(MPO)水平,以及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗2个月后,研究组总有效率为92.16%高于对照组总有效率75.56%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组血清sRAGE、Vaspin、炎性因子、氧化应激指标及便MMP-9、Cal、MPO水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗2个月后,两组血清sRAGE、Vaspin、IL-6、IL-8、TNF-α、NO、LPO及便MMP-9、Cal、MPO水平均较治疗前降低,血清SOD水平均较治疗前升高;研究组血清sRAGE、Vaspin、IL-6、IL-8、TNF-α、NO、LPO及便MMP-9、Cal、MPO水平均低于对照组,血清SOD水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗期间,研究组出现恶心2例,腹胀加重1例;对照组出现恶心2例。两组出现不良反应者症状均较轻微,未对治疗产生影响,后皆自行缓解。结论美沙拉秦联合双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌治疗UC效果显著,可减轻患者肠道炎症反应,改善患者免疫功能和肠道黏膜损伤,且安全性良好。

嗜热链球菌M5-5冻干保护剂配方的优化

为了研究不同冻干保护剂在真空冷冻干燥过程中对嗜热链球菌M5-5菌体细胞的保护效果,采用单因素试验和正交试验,以冻干后的菌体存活率为评价指标,考察9种冻干保护剂在冷冻干燥过程中对M5-5菌体的保护效果,以期获得最优保护剂配方。结果表明,海藻糖、甘油和脱脂乳作为单一冻干保护剂时,菌体细胞存活率分别为43.85%、47.51%和40.86%,显著高于其他6种保护剂(P<0.05);通过正交试验确定冻干保护剂的最优配方为海藻糖60 g/L、谷氨酸钠20 g/L、甘油20 g/L、脱脂乳150 g/L,此时嗜热链球菌M5-5的冻干存活率可达88.41%。扫描电镜结果显示,添加保护剂配方组菌体细胞完整,表面光滑,说明该保护剂配方能有效减少冷冻干燥过程对菌体细胞的损伤。

嗜热链球菌KLDSSM胞外多糖生物合成途径的分析

为了从遗传水平上探究嗜热链球菌KLDS SM合成胞外多糖(EPS)的能力,本研究从糖被转运进入胞内、糖核苷酸合成及EPS基因簇三方面所涉及的基因进行了相关分析。结果发现,该菌能够转运葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖及甘露糖5种糖,具有代谢葡萄糖、乳糖、果糖、蔗糖、海藻糖与甘露糖形成糖酵解中间代谢产物的酶类,拥有合成EPS前体物质UDP-葡萄糖、UDP-半乳糖、UDP-N-乙酰基葡糖胺、UDP-呋喃半乳糖与d TDP-鼠李糖的潜力。同时序列比对分析发现该菌具有一个与高产EPS的菌株ASCC 1275一致性极高的EPS基因簇,且EPS初步产量测定约为331 mg/m L,表明该菌是一株高产EPS潜力菌株,具有较大的应用潜能。