中度嗜酸放线菌YY21液体发酵产纤溶酶条件的研究

为了提高中度嗜酸放线菌YY21产纤溶酶的产量,本文通过单因素实验对其液体发酵培养基和培养条件进行了研究。结果表明:发酵培养基组成为小米粉1.7%,葡萄糖2%,碳酸钙0.2%,氯化钠0.5%,蛋白胨0.6%;发酵条件为250 m L三角瓶装培养基50 m L,接种量5%,在22℃、转速160 r/min的条件下振荡培养4 d。在最适条件下,放线菌YY21液体发酵产物在血纤维蛋白平板上形成溶圈面积可达到164.38 mm^2,较初始产酶活力(溶圈面积87.58 mm^2)提高了88%,发酵时间缩短了3 d。通过对液体发酵培养基和培养条件的研究有效地提高了中度嗜酸放线菌YY21产纤溶酶的产量。

响应面法优化嗜酸放线菌701产纤溶酶液体发酵培养条件

以嗜酸放线菌701产纤溶酶活力为指标,采用响应面分析法对放线菌产纤溶酶的液体发酵培养基组分及工艺条件进行优化研究。通过单因子试验确定最优碳源为葡萄糖、氮源为牛肉膏、金属离子为CaCO3、NaCl,最适小米粉浓度1%、装液量30 mL/250 mL;通过Plackett-Burman设计试验对影响产酶活性的8个相关因子进行评价并筛选出具有显著效应的4个因子:pH、牛肉膏、接种量和装液量;最后采用Box-Behnken响应面分析法确定了四个因子的最佳水平分别为pH 5.32、牛肉膏1.13%、接种量7.1%、装液量20 mL/250 mL,响应面优化后放线菌产纤溶酶活力可达228.17 mm2/10μL,较优化前提高41.02%。

嗜酸放线菌701深层发酵产纤溶酶动力学研究

以嗜酸放线菌701为菌株,在摇瓶培养条件下,研究嗜酸放线菌701产纤溶酶发酵过程中菌丝体生物量、纤溶酶生成量及残糖含量随时间的变化情况。采用Logistic和Luedekin_Piret方程,得到嗜酸放线菌701产纤溶酶的分批发酵动力学模型及模型参数,将实验数据与所得动力学模型进行验证比较,结果表明模型值与实验数据拟合性良好,模型基本可以反映嗜酸放线菌701分批发酵产纤溶酶的发酵动力学特征。

酸性土壤中嗜酸稀有放线菌的多样性研究

从江西、云南、北京采集的 10份酸性土样中分离出嗜酸放线菌 2 5 2株 ,其绝大部分为链霉菌。通过形态观察、pH梯度生长实验和细胞壁化学组分分析筛选出稀有放线菌代表菌株 2 0株。ARDRA分析表明 ,它们呈 11种不同的图谱类型 ,其中 9株的图谱相同 ,另外 4株的图谱与之差异不大 ,而其余 7株的图谱与之差异很大且各不相同。16SrDNA序列分析表明 ,2 0株稀有放线菌中的 18株分别属于 6个已知属 ,其中 13株属于诺卡氏菌属 (Nocardia) ,它们在系统发育树上处于多个进化分枝 ;各有 1株分别属于壤球菌属 (Agrococcus)、节杆菌属 (Arthrobacter)、北里孢菌属 (Kitasatospora)、考克斯菌属 (Kocuria)和嗜酸链霉菌属 (Streptacidiphilus) ;其余 2株是迄今尚未定名的一个新科 (“Ellin5 0 34group”)中的成员。实验结果显示 ,酸性土壤中的嗜酸稀有放线菌具有较丰富的种属多样性 ,其中诺卡氏菌属 (Nocardia)是一优势菌群。

酸性和碱性土壤新分离的放线菌中线型和环型质粒的检测

从湖南、云南采集的19份酸性土壤样品分离到50株放线菌,在pH4.5和pH7.0的培养基上都能生长。从新疆、青海、云南的14份碱性土壤样品中分离到38株放线菌,在pH10.0和pH7.0的培养基上均能生长。因此,这些菌株属于中度嗜酸或中度嗜碱放线菌。利用脉冲电泳技术和普通凝胶电泳在其中12株放线菌中检测到线型质粒,其中3株放线菌中检测到环型质粒。这是首次在中度嗜酸和中度嗜碱的放线菌中报道线型和环型质粒。

放线菌701生物学特性及与6株菌拮抗性试验

通过形态观察、生理生化试验、pH梯度生长试验以及拮抗性试验,对一株具有较强纤溶酶活力的放线菌701展开研究。初步鉴定为中度嗜酸放线菌,最优固体培养基为GYM固体培养基,最佳培养时间为5 d,最佳生长pH为5.5。最优发酵培养基成分为大豆粉2%,蛋白胨0.2%,葡萄糖2%,淀粉0.5%,酵母膏0.52%,CaCl_20.4%,K_2HPO_40.05%,MgSO_4·7H_2O 0.05%,CaCO_30.2%,最佳pH为7.8,最佳培养时间为5 d。拮抗性试验表明:该菌株本身对细菌、酵母及黑曲霉没有抑制作用,其发酵液除对大肠杆菌有抑制作用外,对其他细菌均无抑菌作用,相对最大抑菌环直径为第5天发酵液所得,抑菌环直径为36.2 mm。

嗜酸丝状放线菌的选择性分离与多样性

【目的】针对酸性土壤中的嗜酸丝状放线菌,建立有效的选择性分离方法,并了解其多样性。【方法】用不同的样品预处理方式和分离培养基,并添加不同的抑制剂进行分离;根据放线菌的菌落数和出菌率确定最佳分离方法组合。采用最佳分离方法对从江西采集的17份酸性土壤样品进行分离;根据培养特征对分离菌株进行分群,进一步通过对各类群的显微形态观察和pH梯度生长实验确定代表菌株;对代表菌株进行16SrRNA基因序列分析研究其多样性。【结果】嗜酸丝状放线菌的最佳分离方法为:土壤样品经分散差速离心预处理后,涂布添加了放线菌酮、制霉菌素和萘啶酮酸(各50mg/L)的GTV培养基。用此方法共分离到放线菌369株,归为10个不同的颜色类群,其中6.6%为严格嗜酸放线菌,72.4%为中度嗜酸放线菌,21.0%为耐酸放线菌。52株嗜酸放线菌代表菌株分布于放线菌目中的12个属:链霉菌属(Streptomyces)、小单孢菌属(Micromonospora)、诺卡氏菌属(Nocardia)、野野村菌属(Nonomuraea)、韩国生工属(Kribbella)、小双孢菌属(Microbispora)、马杜拉菌属(Actinomadura)、拟无枝菌酸菌属(Amycolatopsis)、指孢囊菌属(Dactylosporangium)、伦茨氏菌属(Lentzea)、游动四孢菌属(Planotetraspora)和链嗜酸菌属(Streptacidiphilus),其中链霉菌分离菌株在系统发育树上形成12个不同的进化类群。【结论】所建立的选择性分离方法可用于土壤嗜酸丝状放线菌的高效分离;江西酸性土壤含有丰富多样的嗜酸丝状放线菌种属。