贲门癌与直肠癌组织嗜铬蛋白A及p53蛋白表达的比较

目的 :观察贲门癌与直肠癌组织嗜铬蛋白A(CGA)及p5 3蛋白表达的变化。方法 :采用免疫组化ABC法检测 76例贲门癌和 4 9例直肠癌组织中CGA及p5 3表达变化。结果 :贲门癌组织中 ,CGA和p5 3阳性率分别为 5 5 .3% (4 2 /76 )和 6 5 .8% (5 0 /76 ) ;直肠癌组织中 ,CGA和p5 3阳性率分别为 34.7% (17/49)和 6 7.3% (33/49) ;贲门癌组织中CGA阳性率明显高于直肠癌 (P <0 .0 2 5 ) ;有内分泌分化的贲门癌和直肠癌其p5 3阳性率均明显高于CGA阴性者 (P <0 .0 2 5 )。结论 :贲门癌与直肠癌组织中CGA阳性表达率存在明显差异 ;p5

人乳腺病变组织乳腺癌耐药蛋白及细胞角蛋白8和嗜铬蛋白A的表达 可能与多向分化潜能干细胞相关?

背景:多数学者认为正常乳腺组织中无神经内分泌细胞,乳腺病变后出现神经内分泌细胞是乳腺上皮干细胞分化过程中受局部微环境和激素水平影响所发生的突变、异常分化结果。目的:通过检测人乳腺病变组织中乳腺癌耐药蛋白、细胞角蛋白8及嗜铬蛋白A的表达,从干细胞多向分化的角度探讨人乳腺病变中出现神经内分泌细胞的可能机制。方法:用乳腺癌耐药蛋白作为SP干细胞标记物,用细胞角蛋白8作为腺上皮分化标记物,用嗜铬蛋白A作为神经内分泌分化指标标记物,采用免疫组化方法分别检测这3种蛋白在89例人乳腺组织中的表达情况,并分析3者间的相关性。结果与结论:乳腺癌耐药蛋白与细胞角蛋白8在正常乳腺组织、乳腺增生组织、乳腺病变组织中均有表达,乳腺癌耐药蛋白在病变组织中的表达呈上升趋势,细胞角蛋白8的表达则随乳腺组织异常分化程度的降低呈逐渐减少,嗜铬蛋白A只在乳腺病变组织中有表达。在正常乳腺组织、乳腺增生组织和乳腺病变组织中,乳腺癌耐药蛋白与嗜铬蛋白A的阳性表达呈显著相关(P<0.01),与细胞角蛋白8的阳性表达无明显相关(P=0.069)。上述结果表明正常及增生乳腺组织中未发现神经内分泌细胞,乳腺病变组织中发现神经内分泌细胞,其机制可能与多向分化潜能干细胞的分化有关。

贲门癌和大肠癌组织中嗜铬蛋白A、Rb蛋白和PCNA的表达

目的:探讨贲门癌和大肠癌组织内分泌分化与Rb蛋白和PCNA表达的关系。方法:采用免疫组化ABC法检测57例贲门癌和78例大肠癌组织中嗜铬蛋白A(CGA)、Rb蛋白及PCNA的表达。结果:贲门癌和大肠癌组织中CGA阳性表达率分别为52.6%(30/57)和35.9%(28/78),Rb蛋白表达率分别为31.6%(18/57)和33.3%(26/78)。CGA阳性大肠癌组织Rb蛋白表达率高于CGA阴性者(P<0.005),但在贲门癌组织中差异无统计学意义(P>0.05)。CGA阳性和阴性贲门癌和大肠癌组织中PCNA阳性细胞数差异均无统计学意义。结论:Rb蛋白的表达变化在大肠癌内分泌分化过程中可能发挥重要作用,但在贲门癌可能不起关键作用;内分泌分化对贲门癌和大肠癌组织的增殖无影响。

嗜铬蛋白A和神经特异性烯醇化酶及突触素在肾上腺皮质中的分布特点

目的:通过免疫组化方法,研究肾上腺皮质分泌物嗜铬蛋白A(CgA)、神经特异性烯醇化酶(NSE)和突触素(SYN)在肾上腺皮质的分布特点,为进一步深入研究皮髓质之间的相互作用奠定基础。方法:运用免疫组化方法对肾上腺髓质增生、嗜铬细胞瘤和嗜铬细胞癌56份组织标本进行CgA、NSE和SYN染色,以正常肾上腺作为对照,观察其在皮质中的分布特点。结果:肾上腺嗜铬细胞瘤和嗜铬细胞癌的皮质中均可见CgA染色阳性细胞,髓质增生和正常肾上腺病例皮质CgA染色阴性;肾上腺髓质增生和嗜铬细胞癌皮质NSE染色呈阳性,嗜铬细胞瘤和正常肾上腺皮质NSE染色呈阴性;肾上腺髓质增生、嗜铬细胞瘤的皮质中SYN染色呈阳性,正常肾上腺嗜铬细胞癌皮质SYN染色呈阴性。结论:①肾上腺皮质CgA、NSE和SYN分布特点可以帮助鉴别肾上腺髓质增生、嗜铬细胞瘤和嗜铬细胞癌的异同;②肾上腺皮髓质之间联系紧密,受共同机制所调控,除经典的下丘脑-垂体-肾上腺轴和肾素-血管紧张素-醛固酮系统外,肾上腺皮髓质之间存在相互调节的解剖学和内分泌学基础。

老年及青年人大肠癌组织嗜铬蛋白A和P53蛋白聚集的变化

为了解老年及青年人大肠癌组织嗜铬蛋白Ａ（ＣｈｒｏｍｏｇｒａｎｉｎＡ，ＣＧＡ）和Ｐ５３蛋白聚集变化特征及意义。采用免疫组织化学ＡＢＣ法，检测术前未经化疗和放疗的２５例老年（≥６０岁）及１５例青年人（≤４０岁）大肠癌患者癌组织中ＣＧＡ及Ｐ５３蛋白的变化。结果：老年组患者ＣＧＡ阳性表达５例，占２０％，青年组患者阳性表达１０例，占６７％，老年组ＣＧＡ阳性表达率明显低于青年组（Ｐ＜０．００５，χ２检验）；Ｐ５３免疫阳性细胞定量分析发现：老年组患者癌组织切片Ｐ５３阳性细胞数为（６６２±５６８）ｍｍ－２，青年组为（１２０８±７６１）ｍｍ－２，老年组明显低于青年组（Ｐ＜０．０５）。提示：青年和老年大肠癌可能有不同的发病学基础，这种不同的发病学基础是影响其临床特征的重要因素之一。

ELISA双抗体夹心法检测嗜铬蛋白A的性能评价及临床应用

目的验证酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测嗜铬蛋白A(Cg A)的性能,评价其初步的临床应用价值。方法方法学验证参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP15-A、EP6-A和EP17-A文件,对项目的精密度、线性和定量检测下限进行验证。采用厂商提供的质控品验证正确度。检测66例神经内分泌肿瘤患者、41名健康对照者和65例疾病对照患者的Cg A水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估Cg A对神经内分泌肿瘤患者的诊断能力。结果 ELISA双抗体夹心法检测血清Cg A的批内变异系数(CV)<14.00%、批间CV<8.00%;正确度验证测定值的均值在标示浓度范围内,相对偏移为4.51%;在8~740 ng/m L的范围内线性良好(Y=0.793X-3.791,r2=0.988);定量检测下限为7.93 ng/m L。神经内分泌肿瘤组、健康对照组和疾病对照组之间血清Cg A水平差异均有统计学意义(P<0.000 1);Cg A鉴别正常人与神经内分泌肿瘤患者的ROC曲线下面积(AUC)为0.741,最佳诊断界值为47.18 ng/m L,诊断敏感性为78.8%,特异性为68.3%。结论 ELISA双抗体夹心法检测Cg A试剂盒具有良好的精密度、正确度、线性范围和定量检测下限,检测性能符合临床要求。血清Cg A水平在神经内分泌肿瘤患者中显著升高,因此可用于鉴别健康人和神经内分泌肿瘤患者。

^(68)Ga-DOTATATE PET/CT显像联合人嗜铬蛋白A对神经内分泌肿瘤疗效监测及相关性分析

目的:探讨^(68)Ga-DOTATATE PET/CT显像联合人嗜铬蛋白A (CgA)对神经内分泌肿瘤(NET)患者的疗效监测作用。方法:2018年6月—2019年6月,选取西南医科大学附属医院经病理确诊的80例NET患者,均进行^(68)Ga-DOTATATE PET/CT检测并采用免疫放射法检测血清中CgA水平,观察患者疾病诊断及预后、疗效分析。结果:NET患者的血清CgA水平平均值为222.35ng/mL,T1期患者的CgA水平低于T2患者(P<0.05),与T2分期相比,T3分期患者血清CgA水平升高(P<0.05),与T3分期相比,T4分期患者血清CgA水平升高(P<0.05)。NET患者中26例患者合并淋巴结转移,54例未淋巴结转移,合并淋巴结转移患者中血清中的CgA水平高于未淋巴结转移患者(P<0.05);CgA阳性患者48例,随访2年有22例(45.83%)存活,CgA阴性患者32例,随访2年有24例(75.00%)存活,CgA阳性患者存活率低于阴性患者(P=0.009);2年期间CgA阳性患者中14例(29.16%)复发,CgA阴性患者有2例(6.25%)复发,CgA阳性及阴性复发率比较存在显著差异(P=0.012);NET患者T/Lratio水平与CgA水平呈正相关性(r=0.412,P<0.05)。结论:^(68)Ga-DOTATATE PET/CT显像能够提高NET诊断效果,CgA水平会随着疾病病理分期及淋巴结转移而升高,两者均对NET患者分期及预后有较好的诊断效果。

嗜铬粒蛋白A与脓毒症心肌损伤标志物的相关性分析

目的：通过探讨脓毒症患者嗜铬粒蛋白A（ CHGA）与心肌损伤标志物的相关性,探讨CHGA与重症患者预后相关的潜在机制。方法以2010-03~2010-12入住重症医学科的143例脓毒症患者为研究对象,分为脓毒症组、严重脓毒症组及感染性休克组,记录和分析各组血浆CHGA浓度、APACHEⅡ评分及28 d死亡率,分析脓毒症患者CHGA与心肌损伤标志物肌红蛋白（myohemoglobin,Mb）,肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB,CK-MB）、肌钙蛋白（cardiac troponin,cTnI）和B型脑钠肽前体（ pro-B-type natriuretic peptide,NT-proBNP）的相关性,进一步比较生存组与死亡组心肌损伤标志物、NT -proBNP 及 CHGA。结果感染性休克组血浆CHGA显著高于脓毒症组和严重脓毒症组,严重脓毒症组显著高于脓毒症组（P〈0.05）；脓毒症患者血浆CHGA与APACHEⅡ评分、Mb、cTnI以及NT-proBNP具有一定的相关性,其相关系数r分别为：0.270、0.48、0.294和0.348（P〈0.05）。死亡组（共37例）心肌损伤标志物Mb、BNP、血浆CHGA以及APACHEⅡ评分与生存组相比显著增高（P〈0.05）。结论血浆CHGA水平与脓毒症患者严重程度和不良预后有关,且血浆CHGA水平与心肌损伤标志物呈一定相关性。

哮喘大鼠嗜铬蛋白A表达的检测及意义

目的探讨嗜铬蛋白A在哮喘发病机制中的作用。方法通过哮喘大鼠模型,分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测肺组织和血中性粒细胞(PMN)嗜铬蛋白A或mRNA的表达。结果哮喘组肺组织嗜铬蛋白A及mRNA的表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);布地奈德组嗜铬蛋白A及mRNA的表达水平显著低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.01)。哮喘组血PMN嗜铬蛋白A mRNA的表达量显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),布地奈德组嗜铬蛋白A mRNA的表达量与哮喘组差异无统计学意义(P>0.05)。结论哮喘大鼠嗜铬蛋白A的表达升高,嗜铬蛋白A可能参与了哮喘的炎症机制,其表达能被布地奈德所抑制。

孟鲁司特对哮喘大鼠肺组织嗜铬蛋白A表达的影响

目的研究嗜铬蛋白A在哮喘发病中的表达及孟鲁司特的调控作用。方法将SD大鼠随机分为哮喘组、对照组和孟鲁司特组,采用卵白蛋白复制哮喘模型,分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测大鼠肺组织嗜铬蛋白A及其mRNA表达情况,测定嗜铬蛋白A表达的光密度(OD)值强度,分析嗜铬蛋白A与其mRNA表达的相关性。结果哮喘组大鼠嗜铬蛋白A的表达水平(OD值0.34±0.05)高于对照组(OD值0.21±0.06)(P<0.01),嗜铬蛋白A mRNA表达水平(RQ值4.02±0.95)高于对照组(P<0.01);孟鲁司特组嗜铬蛋白A的表达水平(OD值0.28±0.04)低于哮喘组(P<0.05),嗜铬蛋白A mRNA表达水平(RQ值3.67±0.78)与哮喘组,差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠肺组织嗜铬蛋白A与其mRNA的表达水平呈直线正相关(r=0.635,P<0.01)。结论嗜铬蛋白A可能参与哮喘的炎症机制,孟鲁司特能下调嗜铬蛋白A的表达。

胃癌嗜铬蛋白A与表皮生长因子受体表达的关系及意义

目的探讨胃癌嗜铬蛋白A(CGA)与表皮生长因子受体(EGFR)表达的关系及意义。方法应用免疫组织化学ABC法检测103例手术切除的标本中胃癌组织及癌旁正常组织CGA和EGFR的表达。结果胃癌组织中CGA及EGFR表达率分别为39.8%和41.7%,均明显高于癌旁正常组织的2.9%和0(P<0.01)。CGA与EGFR表达均与肿瘤组织学类型、浸润深度、TNM分期、分化程度、有无淋巴结转移及远处转移相关。胃癌组织中,CGA阳性组EGFR的表达率明显高于CGA阴性组(65.9%vs.25.8%)。CGA与EGFR表达呈正相关(r=0.498,P<0.05)。结论 CGA、EGFR在胃癌组织中高表达,两者表达相关且与胃癌的侵袭、转移有关。

嗜铬颗粒蛋白A研究进展

嗜铬颗粒蛋白A(Chromogranin A,CGA)属于独特的酸性可溶性蛋白质家族,遍布于动物内分泌系统、神经系统和免疫系统,与其他激素和多肽共贮存、共分泌.在CGA上有许多碱性氨基酸对,成为潜在的激素原转化酶切割位点.很多切割产物已经被鉴定,其中有些具有生物学功能.近年的研究表明,在多种病理、生理状态下,CGA及其衍生片段在组织中含量升高,发挥抑制性生理功能或作为疾病诊断指标.嗜铬颗粒蛋白A的N端衍生片段在机体防御系统中的抗菌功能、在心血管系统中的抗血管收缩功能已被阐明,使其作为临床候选药物具有巨大潜力;CGA完整片段在内分泌肿瘤和神经内分泌肿瘤中含量升高,可作为内分泌肿瘤和神经内分泌肿瘤诊断指标,但其在肿瘤发生过程中的作用还未见报道.

嗜铬颗粒蛋白B-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建小鼠嗜铬颗粒蛋白B(chromogranin B,CgB)重组原核表达载体。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出CgB基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在140处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX-CgB,在原核细胞中成功表达出小鼠CgB-GST融合蛋白。

注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞增殖与氧化损伤的影响

目的:探讨注射用脑蛋白水解物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞的增殖与过氧化氢氧化损伤的影响。方法:采用MTT法,观察不同浓度的注射用脑蛋白水解物对体外培养的大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12)生长及过氧化氢损伤保护的作用。结果:注射用脑蛋白水解物对PC12细胞的增殖及氧化损伤的保护作用存在量效关系。结论:注射用脑蛋白水解物可促进PC12细胞生长,并可保护细胞减轻过氧化氢的损伤。

嗜铬颗粒蛋白B与热休克同源蛋白70相互作用的研究

目的分离和鉴别在肾上腺髓质嗜铬颗粒细胞分泌囊泡中,与嗜铬颗粒蛋白B(CgB)相互作用的蛋白质。方法采用蛋白质捕获、免疫共沉淀和质谱等技术进行研究。结果在嗜铬颗粒细胞内,CgB与热休克同源蛋白70(Hsc70)相互作用。一个Hsc70结合序列定位在CgB的羧基末端区(Ser586-Arg602,SR-17),而且SR-17内的Ser595磷酸化可增强其与Hsc70结合。磷酸化修饰的SR-17可从ATP-Sepharose上洗脱Hsc70。用免疫印迹和免疫组化方法可证实CgB和Hsc70均存在于嗜铬颗粒细胞的胞质和细胞核中。结论Hsc70可能参与CgB的细胞核转位过程。

嗜铬颗粒蛋白A基因的反义转基因小鼠模型的建立及该基因启动子的组织特异性

构建小鼠嗜铬颗粒蛋白Ａ（Ｃｈｒｏｍｏｇｒａｎｉｎ Ａ，ＣＧＡ）基因的反义ＤＮＡ载体ｐＧＡＳ１Ｃ－ｌａｃＺ。 用电穿孔的方法将该载体转化大鼠肾上腺髓质细胞瘤细胞系ＰＣ－１２，Ｘ－Ｇａｌ染色后证明位于 ＣＧＡ基因启动子下游的报告基因ｌａｃＺ已经表达。用限制性内切酶除去载体的质粒骨架后，显 微注射入供体昆明小鼠的受精卵中，随后将注射过ＤＮＡ的受精卵移植入假母的输卵管中，完 成正常的胚胎发育。用ＰＣＲ的方法筛选假母产下的小鼠，得到ＣＧＡ基因反义ＲＮＡ转基因首 建鼠１４只。将首建鼠分别与正常昆明鼠交配，产生后代。取首建鼠的肾上腺进行Ｘ－Ｇａｌ染色， 组织用于石蜡切片，根据各鼠肾上腺切片的蓝色深浅判定转入基因表达量的高低，筛选到两 只表达量高的首建鼠，留下它们的后代。取转基因鼠的各种组织用于Ｘ－Ｇａｌ染色，发现报告基 因在肾上腺、胰腺的胰岛中有表达，而在肌肉、脂肪组织中无表达，说明ＣＧＡ基因的启动子具 有神经内分泌组织特异性。

肝癌内分泌型癌细胞的分泌与p53蛋白表达的关系

目的:探讨肝癌内分泌型癌细胞分化的可能起源及p53的作用。方法:采用免疫组化法检测68例原发型肝癌组织中嗜铬蛋白A(CGA)、胃泌素(G)、生长抑素(D)和p53蛋白的表达。结果:CGA、G、D和p53的阳性表达率分别为11.76％、4.41％、0％和61.76％。

一种抑制蛋白激酶CK_2活性的新多肽的分离和鉴别

从猪肾上腺髓质嗜铬细胞分泌颗粒裂解物中纯化出 3种新多肽 ,经N 末端降解分析和质谱测定 ,它们分别位于猪嗜铬颗粒蛋白A(CgA) 3 0 8— 3 2 4、3 0 8— 3 2 8及 3 0 8— 3 2 9肽段 ,具有相同N 端区 ,而C 端长度不同。合成的CgA 3 0 8— 3 2 4肽段 ,即GN 1 7在浓度低于 6μmol/L时即可竞争性抑制CK2 活性 ,IC50 为 5 0 μmol/L。