日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究

目的 通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法 联合法培养虫龄分别为18d和24d的日本血吸虫童虫与成虫,将童虫细胞随机分成对照组和实验组,对照组细胞与成虫细胞使用常规培养基培养,实验组在常规培养基中加入50μmoL/L β-巯基乙醇和1mmoL/L丙酮酸钠。培养第5d,运用胶银法染色,使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数,测定银染颗粒面积与核面积的百分比和平均光密度。结果 日本童虫培养细胞(对照组)的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均高于成虫培养细胞。统计学分析显示,两者之间的AgNORs颗粒数日,银染颗粒面积与核面积百分比、平均光密度两两比较均有统计学差异(P<0.01或P<0.05);实验组培养细胞与对照组比较,AgNORs颗粒数目明显增多颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均显著升高。统计学分析可知,两组细胞三组参数之间均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论 AgNORs可作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的一个简便、敏感的指标。日本血吸虫童虫培养细胞较成虫培养细胞更具增殖潜能;

亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响

目的以日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(Argyrophilicnucleolarorganizerregionassociatedproteins,AgNORs)为评价指标,探讨亚精胺(Spermidine,Spd)对培养细胞的促增殖作用。方法采用联合法将虫龄为24d的日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上,培养于常规培养基中。接种后第3天,随机分为实验组和对照组。将实验组细胞用无血清培养基配制的终浓度为75μmol/L的Spd处理48h,对照组细胞则用不含Spd的无血清培养基处理,时间相同;PBS清洗3次后换用常规培养基继续培养。于第7、14、21、28、35天分别对培养细胞进行AgNORs染色。使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数及平均吸光值,并作统计分析。结果经Spd处理,各实验组培养细胞AgNORs着色明显深于对照组;但随着培养时间的延长,实验组与对照组细胞着色均逐渐变浅。各实验组细胞AgNORs颗粒数目与平均吸光值高于对照组,二者比较差异有统计学意义(u7=50.95、43.78;u14=55.23、43.54;u21=36.65、32.25;u28=31.6、32.95;u35=28.86、9.54;P<0.01)。各实验组AgNORs吸光值两两比较,除第7天与第14天之间差异无统计学意义外(q=0.008058,P>0.05),其余差异都有统计学意义(P<0.01)。结论Spd具有促进日本血吸虫培养细胞增殖的能力,每周用Spd处理培养细胞1次,能更大限度地促进血吸虫培养细胞的生长。

急性非淋巴细胞白血病细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究

目的研究核仁形成区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)对评估急性非淋巴细胞白血病(AML)细胞增殖分化水平的价值。方法用嗜银染色方法检测AML细胞的嗜银颗粒数目和形态,观察Ag-NORs形态与细胞形态学之间的关系,Ag-NORs分数与染色体、荧光分子原位杂交(FISH)检查以及AML预后的关系。结果不同Ag-NORs形状特征的细胞比例与细胞形态学的原幼稚细胞比例有显著相关性。Ag-NORs分数比较,染色体和FISH检查异常组高于正常组;治疗前未缓解组高于缓解组;持续缓解1年以上组高于1年内复发组;生存期1年以上组高于1年内死亡组(均P<0.01)。结论用嗜银染色方法检测AML细胞Ag-NORs分数和形态可观察白血病细胞的增殖状况,可作为白血病细胞动力学研究的一项指标,由于操作简便和易于普及,可为白血病的临床诊治提供快捷有效的实验依据。

核仁组成区相关嗜银蛋白染色革新法

核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲ）银染技术已广泛用以研究细胞生长活性，根据ＡｇＮＯＲ数目多少来判定肿瘤的良恶性和对肿瘤进行鉴别诊断。然而ＡｇＮＯＲ技术至今还存在背景非特异性银颗粒沉积问题而影响结果判定。本研究发现影响背景染色结果的主要因素是明胶的质量，采用Ｆａｒｍｅｒ’ｓ液可以清除背景染色，运用微波炉染色不仅可以缩短染色时间而且可以减少银用量。

核仁形成区相关嗜银蛋白法在病理性瘢痕诊断中的价值

目的研究核仁形成区相关嗜银蛋白(AgNORs)在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的水平,探讨病理性瘢痕的增殖特征。方法应用改良AgNORs染色方法检测47例增生性瘢痕、22例瘢痕疙瘩、16例正常皮肤组织AgNORs图像的积分光密度值(integrated optical density,IOD)。结果病理性瘢痕被染成棕褐色,核仁明显,瘢痕疙瘩中AgNORIOD值高于增生性瘢痕(P<0·05)。结论瘢痕疙瘩和增生性瘢痕增殖活性有显著差异,AgNORs染色方法在增生性瘢痕与瘢痕疙瘩的鉴别诊断中有一定意义。

核仁组成区相关嗜银蛋白在大肠癌研究中的意义

随着人们对肿瘤的认识不断深入,对癌的发生、发展和预后的研究已有很大进展。传统的定性诊断由于缺乏客观指标和受主观因素的影响,使诊断的客观性和准确性在一定程度上受到限制。随着显微测量技术的发展和计算机的广泛应用,大肠癌病理研究从定性描述走向了定量分析,

乳腺肿瘤核仁组成区相关嗜银蛋白研究

本文应用核仁组成区相关嗜银蛋白（AgNOR）染色技术对100例乳腺活检标本进行研究。其中包括正常乳腺组织5例,乳腺良性肿瘤47例,乳腺交界性肿瘤6例,乳腺癌42例。结果表明:AgNOR颗粒数量及分型在乳腺良、恶性病变之间有显著性差异,特别是核内的AgNOR颗粒平均数改变更为明显。因此,该技术用于乳腺肿瘤良、恶性病变的鉴别诊断,具有重要意义。

细胞核仁组成区相关蛋白染色法改良

近几年来,国内外病理学家将细胞核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNoR)染色技术,应用于肿瘤病理学的诊断和研究。发现该技术对区分良、恶性病变及对肿瘤进行分类、分型和分级等均有很大的参考价值,因而此法迅速在国内外引起人们的极大兴趣。此染色法可用于石蜡切片,简便易行,故可望作为一种新的指标广泛应用于肿瘤的研究与诊断中。我们根据Aowell等的方法,进行了一些改良,效果较好,现报告如下。

MNNG诱导对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响

目的观察甲基硝基亚硝基胍（MNNG）诱导后日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白（Ag—NORs）含量的动态变化，探讨MNNG诱导后培养细胞的增殖能力。方法将日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上，置于含20％小牛血清附加常量抗生素的RPMI-1640常规培养基中培养；培养第4天，细胞随机分为实验组和对照组两组，实验组细胞以含3g／ml MNNG的常规培养基处理48h，对照组细胞则用不含MNNG的常规培养基作相同处理。细胞经彻底清洗后继续以常规培养基培养3周，然后换用含5％小牛血清的低血清培养基培养。MNNG处理后第1—9周，每周取实验组和对照组细胞采用略作修改的胶银法进行Ag—NORs染色，光镜下观察与拍照，HPIAS-2000图像分析仪测定代表培养细胞内Ag—NORs含量的吸光度（A）值，并进行统计学分析。结果培养过程中，对照组细胞着色逐渐变浅，MNNG组细胞除在第2周时着色变浅外，其余均逐渐加深，尤其在第6周（MNNG诱导后第5周），细胞核呈深棕色，可见粗大的银染颗粒，核仁呈黑色，并观察到分裂细胞。第7—9周，两组细胞着色均逐渐变浅。定量分析发现，对照组细胞在培养初期Ag—NORs含量最高，随后逐渐降低；MNNG组的Ag—NORs含量在培养第2周时稍有降低，随后逐渐升高；在培养第6周即MNNG诱导后第5周时达到高峰，然后又逐渐下降。结论MNNG诱导可显著增强培养细胞的rDNA转录活性，提高细胞的分裂增殖能力，在MNNG诱导后第5周细胞增殖能力最强。

核仁相关嗜银蛋白及增殖细胞核抗原在卵巢子宫内膜异位症癌变中的表达意义

目的探讨核仁相关嗜银蛋白(AgNOR)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达在卵巢子宫内膜异位症癌变过程中的意义。方法应用免疫组化法和AgNOR染色检测1986年1月至2006年8月浙江大学医学院附属妇产科医院收治的30例卵巢子宫内膜异位症患者的子宫内膜异位组织、15例卵巢异位子宫内膜腺上皮不典型增生组织、30例卵巢子宫内膜异位症癌变组织中PCNA的表达及AgNOR评分。结果癌变组及不典型增生组AgNOR评分和PCNA评分[分别为5.64±0.15和(49.22±3.97)%;4.37±0.20和(34.66±2.11)%]显著高于子宫内膜异位症组[1.04±0.26;(12.17±2.89)%];癌变组AgNOR和PCNA评分显著高于不典型增生组,P均<0.05。癌变组内AgNOR和PCNA评分比较结果显示:癌变区>移形区>子宫内膜异位症区;不典型增生组内结果显示:不典型区>子宫内膜异位症区(P<0.05)。AgNOR和PCNA评分与肿瘤期别显著相关(P<0.05)。AgNOR评分>5.64和PCNA评分>49.22%的患者预后明显差于AgNOR评分<5.64和PCNA评分<49.22%者(P<0.05)。结论AgNOR及PCNA评分在鉴别子宫内膜异位症良恶性肿瘤及在判定肿瘤期别中起一定的作用;细胞增殖参数可能有助于对子宫内膜异位症癌变预后的判断;部分子宫内膜异位症和不典型增生可能是卵巢癌的癌前病变。

滋养细胞增生与病变恶性程度相关性研究进展

妊娠滋养细胞肿瘤是一组早期即可出现转移的肿瘤,如何及早、准确的预测此类疾病发展预后受到很多学者的关注。目前,增殖标记物在肿瘤预后的预测方面的意义受到越来越多的重视。该文分析了近几年对K i-67、增殖细胞核抗原、核仁组成区相关嗜银蛋白等3种细胞增殖标记物在滋养细胞疾病中的研究成果,综述其在滋养细胞疾病中增殖程度与病变恶性程度的关系。

核仁组成区相关嗜银蛋白与头颈部肿瘤

核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)的检测,被认为是肿瘤研究的新手段。本文就有关基本概念,AgNORs染色和观察方法及AgNORs染色技术在头颈部肿瘤的诊断、鉴别诊断、恶性程度的评价及预后的估计等方面的研究概况做简要综述。

AgNOR胶银染色法及体会

细胞的核仁中有一种参与线粒体及蛋白质合成的酸性蛋白,具有嗜银性,称为核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs),可以通过胶银染色法显示出来,从而反映细胞增殖、分化情况,对良、恶性肿瘤的鉴别、分型分级、癌前病变的研究具有一定价值。现将此法介绍如下。

骨髓细胞嗜银蛋白染色的临床意义

对８８例病人的骨髓细胞进行Ａｇ－ＮＯＲ染色，结果表明非肿瘤性疾病与白血病未缓解两组间；白血病未缓解组与白血病缓解组间；淋巴瘤组与非肿瘤性疾病组间均有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。提示Ａｇ－ＮＯＲ染色对骨髓细胞良、恶性疾病具有鉴别价值。

晶体上皮细胞经辐射后AgNORs的形态定量研究

利用银染和图像分析技术对受照不同剂量６０Ｃｏγ线（０、１０、２０、３０和５０Ｇｙ）和照后不同培养时间（３、５和７天）的兔晶体上皮细胞的ＡｇＮＯＲｓ进行了定量分析。结果表明，各剂量组ＡｇＮＯＲｓ颗粒的面积、面积百分比、平均光密度和积分光密度降低，与对照组相比均有明显的差异（Ｐ＜００１）。随照射剂量和照后培养时间的增加，ＡｇＮＯＲｓ颗粒面积进行性减小（Ｐ＜００１），尤其５０Ｇｙ组比对照组降低了７９８２％，表明晶体上皮细胞的增生明显受到抑制。辐射剂量在２０Ｇｙ以下时，ＡｇＮＲＯｓ颗粒的平均光密度随培养时间的延长而增加（Ｐ＜００５）；在３０Ｇｙ以上时，结果与此相反。细胞核随照射剂量的增加而增大，２０Ｇｙ达到高峰。上述结果为探索放射性白内障的发生机理提供了客观指标。

外源性雌二醇对大鼠再生肝细胞转录活性的调节

目的 探讨雌激素对大鼠再生肝细胞转录活性的影响。 方法 放射免疫法测定血清中雌二醇(E2 )含量 ;核仁组成区相关嗜银蛋白 (AgNORs)染色法 ,测定AgNORs颗粒数。 结果 去卵巢后大鼠血清中E2 含量随去卵巢天数的增加而逐渐降低 ,至去卵巢后第 15d已测不出血清中有E2 存在 ;去卵巢大鼠部分肝切除 (PH)后0～ 2 4h ,外源E2 有促进肝细胞转录的作用 ,且AgNORs颗粒数的增加幅度与外源E2 剂量呈正相关 ;去卵巢大鼠PH后 2 4～ 36h ,外源E2 剂量越高 ,AgNORs颗粒数增加量越小 ,但均高于对照组。 结论 雌激素对再生肝细胞转录活性有调节作用。