嗜麦芽窄食单胞菌42-2降解黄曲霉毒素B1的效果研究

黄曲霉毒素B1(AFB1)对人类和家畜的健康危害很大。本文以嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas sp.42-2)为研究菌株,对其进行了急性毒理实验,并利用该菌的上清液、发酵液和胞外蛋白粗提取液分别进行了发霉玉米、饲料、生大黄、柏子仁和怀山药的黄曲霉毒素B1降解实验。结果表明:活菌制剂在2.56×1010 CFU个/m L剂量以下不会引起急性毒性反应。在菌株42-2的上清液、发酵液和胞外蛋白粗提取液的毒素降解实验中,三者对发霉玉米中AFB1的降解率分别为:74.90%、82.60%和65.40%;对饲料中AFB1的降解率分别为:77.60%、82.50%和71.20%;对生大黄中AFB1的降解率分别为:73%、78.10%和68.40%;对柏子仁中AFB1的降解率为:76%、79.50%和70.50%;对怀山药中AFB1的降解率分别为:65.30%、69.10%和61.10%。

323株嗜麦芽窄食单胞菌的临床分布及耐药情况分析

回顾性分析2001～2006年中国医科大学附属第一医院临床分离的323株嗜麦芽窄食单胞菌的临床分布及耐药情况。结果发现，该菌分离数量6a间由32株升至82株；菌株主要来自痰液及ICU室。6a间对头孢吡肟、头孢他啶、复方新诺明的耐药率分别下降了5．2％、26．0％、18．8％；而对阿米卡星、庆大霉素耐药率显著增加，分别增加了38．1％、35．6％。60株嗜麦芽窄食单胞菌金属酶的检出率为12．9％。认为临床医生应关注该菌的临床分布情况，以防院内感染暴发流行；对感染患者应根据药敏结果选择抗菌药物。

菌株C8和B4的分离鉴定及其耐盐促生效果和机制

土壤盐渍化是影响农业生产的主要环境因素,合理使用根际促生菌是改良修复盐渍化土壤的有效途径。本研究从东营地区盐渍化土壤中分离筛选到两株耐盐促生菌株C8和B4,经形态学特征、生理生化特性、16S rDNA和gyrB基因序列分析,分别鉴定为氧化微杆菌(Microbacterium oxydans)和嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。含盐LB培养基上检测结果显示,菌株C8耐6%NaCl,具有解钾、溶有机磷、溶无机磷和分泌生长素的功能;菌株B4耐8%NaCl,具有溶有机磷和分泌生长素的功能。C8和B4单独施用及配施对盐胁迫下番茄的促生作用及机制的试验结果表明,C8和B4单独施用及配施均显著促进盐胁迫下番茄种子萌发和幼苗生长,提高过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性,上调过氧化氢酶基因CAT1和CAT2表达量,增加植株K+含量,降低Na+含量和Na+/K+,上调液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1和NHX3的表达量。C8和B4配施具有增效作用。以上结果表明,C8和B4通过调节抗氧化酶及Na+转运蛋白基因表达,提高植株抗氧化能力,维持体内离子稳态,提高植株耐盐性。

嗜麦芽窄食单胞菌的药敏及最低抑菌浓度分布分析

目的 分析临床分离到的嗜麦芽窄食单胞菌的药敏试验结果及其对临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度 (MIC)分布情况。方法 用法国生物梅里埃公司新近推出的全自动微生物鉴定仪进行菌种鉴定及药敏分析。结果 嗜麦芽窄食单胞菌对磺胺甲唑 /甲氧苄啶复方制剂和喹诺酮类的左氧氟沙星敏感率分别达 79.31%和72 .4 1% ,对其他抗生素的敏感率相对较低。 79%菌株对磺胺甲唑 /甲氧苄啶复方制剂的MIC≤ 4 μg/ml;93%菌株对左氧氟沙星的MIC≤ 4 μg/ml。 结论 嗜麦芽窄食单胞菌主要引起呼吸系统的感染 ,多重耐药性情况十分严重。对其感染的治疗 ,应在抗生素敏感试验及其MIC的指导下进行。

嗜麦芽窄食单胞菌标准株的建立及评价

目的对1株嗜麦芽窄食单胞菌中国临床分离株进行系统性评价,建立嗜麦芽窄食单胞菌标准株。方法参照《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812-2022),对嗜麦芽窄食单胞菌中国分离株11066进行形态、运动性、培养条件、生化反应、药物敏感性、质谱等检测以及16S rRNA测序、多位点序列分型分析及全基因组测序等分子生物学检测,并对该菌株进行扩大培养,建立主代种子库及工作菌株库。结果菌株11066为革兰阴性杆菌,电镜下可见1~4根极端鞭毛;在血平板和其他营养琼脂上生长良好,生长条件为15~37℃、pH 5~10和0~5%盐浓度;动力阳性;硝酸盐还原试验阳性、水解七叶灵和明胶试验阳性;生长可利用葡萄糖、甘露糖、N-乙酰-葡萄糖胺、麦芽糖、柠檬酸和苹果酸为碳源;对阿米卡星、头孢西丁等18种革兰阴性菌常用抗生素耐药;主代种子库和工作菌株库菌株生物学性状稳定,传代等信息完整;菌株已保藏于中国疾病预防控制中心病原微生物菌(毒)种保藏中心并获得国家保藏编号。结论嗜麦芽窄食单胞菌中国临床分离株11066有明确的来源信息,具有典型的嗜麦芽窄食单胞菌生物学及遗传学特征,已按国家标准株评价标准进行评价并保存于公认的来源/保藏中心,可以作为标准株/参考株应用于临床病原微生物检测质控和基础科研。

黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定

【目的】筛选能降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的细菌,以期在该毒素的生物脱毒中得到应用。【方法】以香豆素为惟一碳源和能源进行AFB1降解菌株的初筛,之后将初筛的10株菌分别降解浓度为100μg·kg-1的AFB1。【结果】筛选出的NMO-3菌株降解AFB1能力达85.7%,显著高于其它菌株(P<0.01)。从形态、生理生化反应以及16SrDNA序列比对等方面分析,最终确定NMO-3菌株为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas sp.)。【结论】利用香豆素作为惟一碳源和能源筛选出了黄曲霉毒素降解菌株,后期试验证明活菌制剂在2.56×1010CFU/ml剂量以下不会引起急性毒性反应,用65%硫酸铵提取的蛋白(酶)具有AFB1降解能力。

嗜麦芽窄食单胞菌临床株的多重耐药外排泵的研究

目的 研究嗜麦芽窄食单胞菌临床株外排泵SmeDEF的表达与耐药的关系及其表达调控。方法 琼脂稀释法检测嗜麦芽窄食单胞菌对抗生素敏感性并检测泵抑制剂的作用 ,提取临床菌的RNA进行smeD的RT PCR扩增。提取DNA进行smeT片段的PCR扩增 ,扩增产物进行序列分析。结果 随机选取的 6株嗜麦芽窄食单胞菌均有扩增产物。SmeT的N端氨基酸序列相当保守 ,smeD smeT间区测序发现耐药且泵抑制阳性株基因序列与敏感株明显不同。推测与耐药有关的突变出现在smeT的 82～ 16 5区间。结论 嗜麦芽窄食单胞菌临床株SmeDEF外排泵的表达强弱与其耐药性有关。smeDEF基因的表达可能与调控基因间区的变化有关。

重症医学科嗜麦芽窄食单胞菌的分布及耐药性分析

目的分析泰安市中心医院重症医学科嗜麦芽窄食单胞菌的分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物及控制医院感染提供依据。方法采用Microscan Walk Away 96 Plus全自动微生物鉴定及药敏系统进行菌株鉴定和药敏试验,对2012年10月至2013年12月本院重症医学科分离的嗜麦芽窄食单胞菌分布情况及耐药性进行回顾性分析。结果临床标本共分离出嗜麦芽窄食单胞菌65株,其中50岁以上患者占60.0%(39/65);主要分离自痰液,占90.8%(59/65),其他依次为分泌物4.6%(3/65)、血液1.5%(1/65)、胸水1.5%(1/65)和尿液1.5%(1/65);对替卡西林/克拉维酸、头孢他啶、左氧氟沙星和磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率依次为61.5%(40/65)、87.7%(57/65)、7.7%(5/65)和0(0/65),敏感率依次为13.8%(9/65)、7.7%(5/65)、90.8%(59/65)和100%(65/65)。结论嗜麦芽窄食单胞菌主要引起呼吸道感染,对替卡西林/克拉维酸及头孢他啶耐药严重,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶最敏感,临床上应根据本地区的流行病学特点合理选用抗菌药物。

降解黄曲霉毒素B_1酶的提取及降解作用研究

目的:从能够降解黄曲霉毒素B1的嗜麦芽窄食单胞菌中提取主要降解成分,并对其降解作用进行研究。方法:采用硫酸铵沉淀法对发酵液进行酶的提取,并对酶的提取条件进行优化实验。结果:确定种子培养基培养12h,发酵24h后,采用65%硫酸铵沉淀后的酶活性最大,对黄曲霉毒素B1的降解率达到80.25%。结论:降解黄曲霉毒素B1的菌株于40℃下种子培养12h,发酵24h,经过65%硫酸铵沉淀得到粗酶提取液,其蛋白含量为532.9μg/mL,与黄曲霉毒素B1反应72h后酶活最大,对毒素的降解率可达到81.23%,并且经过全波长扫描得到此酶在240～267nm有最大吸收峰。

煤矸石原生菌溶磷效果分析及产酸性能优化

煤矸石是采煤和洗煤过程产生的固体废物,占用大量土地且严重污染环境,因此对煤矸石的综合处理和利用已刻不容缓。目前,利用微生物降解煤矸石制备矿物肥料是实现煤矸石减量化、无害化和资源化处理最具前景的技术之一。本文研究了煤矸石原生菌株嗜麦芽窄食单胞菌(SM1菌株)的解磷特性及其机制,优化了SM1菌株的产酸性能。利用高效液相色谱、X射线衍射仪(XRD)及X射线荧光光谱(XRF)分别对细菌代谢产物、溶磷前后矿渣物相组成及原矿化学组成进行分析,揭示了SM1菌株的解磷机理。正交试验结果表明,SM1菌株的最佳解磷条件为:煤矸石粒度为115μm,pH为9,菌液浓度为2.85×10^(12) CFU/mL,液固质量比6∶1,处理时长为4 d,在该条件下有效磷溶出量相对于单因素条件试验的最好结果可增加约19%。最优产酸条件体系温度30℃、pH=8、质量浓度8 g/L的蔗糖(碳源)、1 g/L的氯化铵(氮源)、0.3 g/L的氯化镁和0.3 g/L的磷酸二氢钾(无机盐)时体系中酸含量(以H^(+)计)增加了0.014 mol/L。高效液相色谱结果表明代谢产物中含有大量有机酸,溶磷前后矿渣的XRD结果表明菌株溶解的含磷矿相为三斜磷钙石,结合有机酸溶解三斜磷钙石的试验,进一步验证了SM1菌株的解磷机制为其代谢产物有机酸溶解了煤矸石中三斜磷钙石,优化产酸后的有效磷含量相比于正交试验结果提高了12.7%。

常见感染致病菌的耐药机制及防治对策

随着抗菌药物的广泛应用,细菌对抗菌药物的耐药性逐年增加,其中金黄色葡萄球菌(金葡萄)、绿脓杆菌、克雷伯杆菌、大肠杆菌、肠球菌、不动杆菌、变形杆菌、结核杆菌和念珠菌的耐药问题尤为严重,耐青霉素的肺炎链球菌也在逐渐增加.耐药致病菌通常出现于医院内,尤其是重症监护病房(ICU)中.促使耐药菌发生、发展、在人体中定植和感染的危险因素有:广谱抗生素(尤其是第三代头孢菌素)的广泛应用,有创性检查和操作(如气管插管、中心静脉导管、导尿管插入并留置等)、血液透析、住院或住ICU时间延长以及合并某些基础疾病等(表1).