嗜人类T淋巴细胞病毒Ⅰ型核心蛋白P24基因的克隆与表达

目的 从感染HTLV-1的中国患者外周血单核细胞（PBMCs）中扩增编码HTLV-1核心蛋白P24的cDNA,并在大肠杆菌中进行表达。方法 提取感染者PBMCs基因组DNA,应用巢式PCR方法扩增出HTLV-1核心蛋白P24的cDNA并测序,与pGEX-20T载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21中表达,采用ELISA和Westernblot分析重组蛋白活性。结果HTLV-1核心蛋白P24基因序列高度保守,构建重组载体后,在大肠杆菌中表达的重组蛋白,经检测具有较强的抗原活性。结论 成功地表达了HTLV-1型病毒的核心蛋白P24基因,为国产诊断试剂和疫苗的研发打下了基础。

人嗜T淋巴细胞白血病病毒I型(HTLV-Ⅰ)核心蛋白(p24)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

人嗜Ｔ淋巴细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ⅰ）核心蛋白（ｐ２４）基因的克隆及在大肠杆菌中的表达段震峰，滕志平，纪志武，陈国敏，张永利，曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词人嗜Ｔ淋巴细胞白血病病毒Ｉ型（ＨＴＬＶ－Ｉ），聚合酶链反...

嗜人T淋巴细胞病毒Ⅰ型(HTLV-Ⅰ)与神经系统疾病相关性的初步研究

本文报道从粤东地区57例神经系统疾病患者血清中，检测出HTLV－Ⅰ抗体阳性者3例，阳性率为5．26％。并介绍了HTLV－Ⅰ抗体阳性者的主要临床表现和实验室检测结果。我们认为，进一步开展HTLV－Ⅰ与神经系统疾病的相关性研究，是非常有意义的。

猴嗜T淋巴细胞病毒l型核酸快速检测方法的建立

猴嗜T淋巴细胞病毒l型(Simian T-cell lymphotropic virus type 1,STLV-1)是无特定病原体(SPF)猴必须排除的病毒之一,其潜伏期较长,主要侵害猴的免疫系统。为强化口岸对进出境野生及实验用灵长类动物STLV-1感染情况的监测和流行病学调查,本研究建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR检测STLV-1的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了确认。

人类T淋巴细胞白血病Ⅰ型病毒和疾病

人类Ｔ淋巴细胞白血病Ⅰ型病毒是人类逆转录病毒家族中最早发现的一种。本文对其生物学特征、基因的分子结构和它导致成人Ｔ细胞白血病及热带下肢痉挛性瘫痪的分子机制进行了综述。

人类嗜T淋巴细胞病毒1型Tax1蛋白在头颈部腺样囊性癌中的表达与预后分析及机制探索

目的探讨人类嗜T淋巴细胞病毒1型(human T-lymphotropic virus 1,HTLV-1)与头颈部腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发病及其远处转移的相关性。方法采用免疫组织化学及Western blot分析伴或不伴有远处转移ACC患者样品、ACC低侵袭力细胞系(SACC-83)、高侵袭力细胞(SACC-LM)及人单核细胞白血病细胞系(THP-1)中HTLV-1 Tax1蛋白、Myb、Notch同源蛋白1(neurogenic locus notch homolog protein 1,Notch1)和维甲酸信号通路蛋白RARA的表达,Pearson分析Tax1蛋白与肺转移及以上信号分子的相关性。结果11例ACC患者Tax1蛋白细胞核阳性表达,4例患者Myb细胞核阳性表达,6例患者Notch1细胞膜和细胞浆阳性表达,8例患者RARA细胞核阳性表达。选取2例ACC和细胞样本进行Western blot验证,1例与免疫组织化学结果不一致。Pearson分析Tax1与RARA蛋白呈正相关,与远处转移呈相关趋势,但与Myb和Notch1表达无显著相关性。结论HTLV-1感染可能影响体内维生素A代谢通路,与ACC患者发生远处转移相关。

人类嗜T细胞白血病Ⅰ型病毒TAX蛋白对NF-κB转录因子的作用

人类嗜T细胞白血病Ⅰ型病毒(HTLV-I)是成人T细胞白血病(ATL)的致病因子,其编码的TAX蛋白的反式激活在白血病形成中有重要作用。NF-κB是细胞活化和产生细胞因子的重要转录调控因子。正常情况下,NF-κB因子与抑制性蛋白IKB结合,形成复合物存在于胞质中。TAX蛋白可与IKB激酶γ(IKKγ)直接结合,而后启动TAX对IKKα和IKKβ的结合,并使之发生磷酸化。后者使IKB蛋白降解,NF-κB获得释放,从胞质中转位到校内,与相应靶基因上的NF-κB位点结合而被活化,产生一系列生物性反应和效合作用。NF-κB因子具有拮抗细胞凋亡的作用,但其机制还有待深入研究。

EB病毒相关性淋巴上皮瘤样肝内胆管细胞癌1例报告并文献复习

目的探讨EB病毒相关性淋巴上皮瘤样肝内胆管细胞癌(EBVaLELICC)的病理学特征,以加深临床对该肿瘤的认识。方法收集1例EBVaLELICC患者的临床及病理学资料,对其病理石蜡标本进行免疫组化、原位杂交和基因重排检测,分析该病病理学特点,并复习相关文献。结果患者女,56岁,肿瘤位于肝左外叶,边界清楚,约1.8 cm×1.5 cm×1.2 cm大小。于肝胆外科行腹腔镜下肝左外叶切除术,术后病理学检查示肿瘤细胞呈腺管状,部分不规则、融合或呈筛状,细胞呈合体状,核大、染色质细,可见小核仁,未见核分裂象;间质大量淋巴细胞、浆细胞增生,伴淋巴滤泡形成。免疫组化染色示肿瘤细胞表达CK7、CK19,P53表达率为10%,表现为野生型,Ki-67增殖指数5%,间质淋巴细胞表达CD3、CD4、CD8、CD20,淋巴滤泡生发中心细胞表达BCL-6、CD10,不表达BCL-2,浆细胞表达CD38、Kappa、Lambda,PD-L1(22C3)在肿瘤细胞及间质淋巴细胞均有表达,联合阳性分数值约为30。EBER原位杂交检测示肿瘤细胞弥漫阳性。淋巴细胞免疫球蛋白及T细胞受体基因均呈多克隆重排。患者术前及术后均未接受任何治疗,随访8个月健在,未发现肿瘤复发转移。结论EBVaLELICC是一种罕见的胆管癌亚型,具有独特的病理学特征,患者可从免疫治疗中获益,预后好于普通型胆管细胞癌。

玉屏风散对单纯疱疹病毒性角膜炎模型小鼠细胞免疫功能的影响

目的观察中药玉屏风散对不同感染时期单纯疱疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis,HSK)小鼠模型细胞免疫水平的影响,探讨其抗HSK复发的作用及其机制。方法采用流式细胞术分析不同感染时期模型小鼠脾脏+、+、+淋巴细胞表达水平,ELISA法检测血清γ-IFN、IL-2、IL-4及IL-10水平改变。观察并比较玉屏风散对不同感染时期HSK小鼠模型CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞和血清γ-IFN、IL-2、IL-4及IL-10水平改变的影响。结果与正常对照组比较,HSK潜伏期(PI28d)和复发期(UVB3d)模型小鼠CD3+、CD4+T淋巴细胞表达明显降低,CD8+T淋巴细胞表达明显升高;外周血Th1型细胞因子IL-2、γ-IFN水平显著降低,Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平显著增高。CD4+T淋巴细胞表达的降低与IL-2、γ-IFN水平的降低呈显著正相关。在同一感染期内,玉屏风散治疗组、玉屏风散+阿昔洛韦治疗组治疗末期与治疗开始时比较,HSK模型小鼠体内CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞表达水平和外周血Th1型细胞因子IL-2、γ-IFN,Th2型细胞因子IL-4、IL-10表达水平均有明显改善,并显著优于单纯阿昔洛韦治疗组及空白对照组。结论玉屏风散具有提高HSK潜伏期和复发期模型小鼠体内CD3+、CD4+T淋巴细胞表达,降低CD8+T淋巴细胞表达,改善CD4+/CD8+比值水平,调节机体细胞免疫功能的作用。

福建广东8株HTLV-Ⅰ前病毒长末端重复序列核苷酸序列测定及亚型分析

目的 了解福建、广东地区人群中HTLV Ⅰ的感染起源和亚型。方法 对在莆田、厦门及汕头发现的 8株HTLV Ⅰ前病毒长末端重复核苷酸序列用PCR法扩增 ,再用自动测序仪进行核苷酸序列测定 ,并对这 8株HTLV Ⅰ亚型的基因序列同源性作了分析。结果 获得了这 8株HTLV Ⅰ的核苷酸序列。结论 所发现的这 8株HTLV Ⅰ在其基因序列上很类似台湾株PZ96 0 4和CD96 2 2 ,可划归于世界群的亚型a(Aa型 )

HIV/AIDS患者APOBEC3G mRNA水平与CD4T淋巴细胞计数相关研究

目的探讨人体细胞内的载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme-catalytic polypeptide-like 3G,APOBEC3G)与HIV疾病进展的关系及其与CD4 T淋巴细胞计数之间的关系。方法用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测黑龙江省17例HIV-1感染者及7例健康人外周血单核细胞(PBMC)中APOBEC3G mRNA水平,同时检测黑龙江省17例HIV-1感染者及7例健康人CD4 T淋巴细胞计数。结果与未感染HIV组相比,HIV感染组APOBEC3G mRNA水平略降低,两组无显著性差异(P>0.05),3组APOBEC3G mRNA水平为:HIV未感染组>无症状感染组>AIDS患者组,但各组总体均数差异不显著(P>0.05)。HIV/AIDS患者CD4计数与APOBEC3G mRNA水平正相关(r=0.523,P=0.038)。结论 APOBEC3G在HIV-1疾病进展中可能发挥一定的作用。

NFκB与成人T淋巴细胞白血病关系的研究进展

在成人T淋巴细胞白血病(ATL)细胞中,人类T细胞白血病Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)非结构基因编码的TAX蛋白对调节病毒的复制和核因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)的激活起关键作用。NFκB是一类细胞核转录因子,它能通过经典的TAX蛋白激活途径或者通过不依赖TAX蛋白的途径而活化,使得宿主细胞CD4^+T淋巴细胞内一系列与细胞增殖存活有关的基因表达,如细胞因子、细胞凋亡调控蛋白、抗凋亡蛋白等,最终细胞无限增殖和转化导致ATL的发生,近些年NFκB已被作为治疗ATL的分子靶点。

人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病/热带痉挛性截瘫患者血清和脑脊液中细胞凋亡及凋亡相关因子的表达

目的 研究人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病/热带痉挛性截瘫(HAM/TSP)患者外周血淋巴细胞凋亡情况、HAM/TSP患者血清及脑脊液中sFas和sFasL表达水平及外周血Fas、肿瘤坏死引子α(TNF- α)和Bcl -2蛋白在HAM/TSP发生发展中的作用。方法 应用单细胞电泳检测HAM/TSP患者外周血淋巴细胞的凋亡情况,应用ELISA检测8例HAM/TSP患者血清和脑脊液中sFas、sFasL的水平,并用流式细胞术对患者外周血淋巴细胞上Fas、TNF -α和Bcl -2蛋白进行定量检测,并与健康对照组及其他神经系统疾病组(OIND)进行对比分析。结果 ( 1 )HAM/TSP患者外周血淋巴细胞凋亡率为13 .63%±0 .48%,与健康对照组(1 .63% ±0 .57% )比较显著增高(P<0 .05)。(2)患者血清sFas表达水平为(1 .08±0 .26)ng/ml,与OIND组[ (0 .29±0 .05)ng/ml]及健康对照组[ (0 .18±0 .07)ng/ml]比较显著增高(P<0 .05 );血清sFasL表达水平[ ( 0 .26±0 .11 )ng/ml]高于OIND组[ (0 .22±0 .04 )ng/ml]及健康对照组[ ( 0. 21±0 .05 )ng/ml],但差异无统计学意义(P>0 .05);脑脊液sFas和sFasL表达水平分别为( 0. 19±0 .07 )ng/ml和( 0. 24±0 .08 )ng/ml,显著高于OIND组[ (0 .11±0 .06)ng/ml、(0 .01±0 .01)ng/ml,P<0 .05]。(3)外周血淋巴细胞中Fas、TNF -α表达?

人类嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型的PCR检测方法研究

目的:建立PCR检测人类嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型的方法。方法:将HTLV-Ⅰ的PX基因转染大肠杆菌DH5a质粒pUC57构建HTLV-Ⅰ检测参考菌株,针对PX基因设计PCR引物,并考察PCR方法的特异性和灵敏度。结果:凝胶电泳检测到PCR扩增PX基因得到的230bp目标片段,且PCR方法具有较高的灵敏度。结论:该PCR可特异、灵敏地检测人类嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型。

RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪患者细胞凋亡的影响

目的探讨RNA干扰Tax基因表达对人嗜T淋巴细胞病毒Ⅰ型相关性脊髓病／热带痉挛性瘫痪（HAM／TSP）患者细胞凋亡的影响。方法运用RNAi技术特异性干扰Tax基因的表达，流式细胞技术和westernblot法鉴定Tax蛋白的表达情况，并运用流式细胞技术对干扰后的T淋巴细胞（TLC）凋亡情况及凋亡相关因子Fas、Bcl-2、肿瘤坏死因子α（TNF-α）进行检测。结果重组质粒psiTax／U6转染T细胞（9．84±3．32）％后，Tax蛋白的表达较未处理组（47．45±14．52）％和pSilencerl．O／U6转染组（45．98±10．66）％明显降低（t=9．51，14．93，均P〈0．01）；westernblot法显示重组质粒psiTax／U6转染TLC后，Tax表达较pSilencerl．0／U6转染组明显降低；RNAi干扰组的凋亡率（21．55±1．37）％较未处理组（47．80±3．36）％显著降低（t=24．17，P〈0．01）；RNAi干扰组Fas，TNF—α显著降低（t=17．83，16．85，均P〈0．01），而Bcl-2显著升高（t=5．21，P〈0．01）。结论运用RNA技术干扰Tax基因抑制Tax基因表达，可以有效抑制TLC细胞的凋亡。凋亡相关因子Fas，TNF—αandBcl-2在此过程中发挥重要作用。

福建东部沿海地区人类嗜T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ/Ⅱ感染的血清流行病学研究

目的 调查福建东部沿海地区人群人类嗜T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ/Ⅱ(HTLV-Ⅰ/Ⅱ)的感染状况。方法 用酶联免疫吸附试验方法筛查1999～2002年福州、宁德两地的吸毒人群、性病就诊者、暗娼及健康献血者、健康体检人群血清标本3259份。阳性者用免疫印迹进行确认。使用EpiInfo6.0软件进行X^2和Fisher’s exact test分析。结果 健康人群HTLV-Ⅰ抗体阳性率为0.06％,吸毒人群为0.32％,性病就诊者及暗娼为0.58％,未检出HTLV-Ⅱ抗体。性病就诊者及暗娼HTLV-Ⅰ抗体阳性率显著高于健康人群(P<0.05),吸毒者HTLV-Ⅰ抗体阳性率与健康人群比较差异无显著性(P>0.05)。HTLV-Ⅰ抗体阳性率在各年龄组间差异均未见有显著性(P>0.05)。HTLV-Ⅰ抗体阳性率在福州、宁德两地差异也未见有显著性(P>0.05)。结论 提示福建东部沿海地区人群以HTLV-Ⅰ的流行为主,且HTLV-Ⅰ的流行水平很低,未发现HTLV-Ⅱ的流行。年龄、性别因素在闽东沿海地区不是HTLV-Ⅰ流行的危险因子,性暴露次数的增加可能是影响HTLV-Ⅰ流行水平的因素。

我国福建省福清地区HTLV－Ⅰ无症状携带者体内HTLV－Ⅰ病毒核酸的检测

我国福建省福清地区ＨＴＬＶ－Ⅰ无症状携带者体内ＨＴＬＶ－Ⅰ病毒核酸的检测陈国敏，薛守贵，张永利，林惠添，董德华，林星，魏礼康，陈武，曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词嗜人Ｔ细胞病毒Ⅰ型，无症状携带者，聚合酶链反应，核酸杂交...