嘌呤受体P2Y2基因在恶性肿瘤中的研究进展

近年来恶性肿瘤的发病率逐年升高,严重影响了患者的生存质量及生存期。尽管随着放射治疗、化学治疗以及靶向治疗等治疗手段的不断发展,部分肿瘤患者获得了一定益处,但肿瘤细胞的远处转移以及肿瘤耐药的发生已经成为肿瘤患者转归过程中面临的巨大难题。因此,亟需寻找恶性肿瘤发生发展过程中相关靶向分子标志物,以阻断恶性肿瘤侵袭或耐药的发生,从而改善患者的生存质量并延长患者的生存期。嘌呤受体P2Y2(P2RY2)基因的表达产物为P2Y2受体,在人体内广泛表达,由细胞外的核苷酸腺苷三磷酸(ATP)/尿苷三磷酸(UTP)激活,诱导的嘌呤能信号转导可涉及多种生物学过程,如神经传递、肌肉收缩、伤口愈合,并可调控细胞的增殖、迁移和凋亡。研究证实P2RY2基因在多种恶性肿瘤中普遍表达,通过与肿瘤微环境中的相关信号分子或炎症物质相互作用,参与肿瘤细胞增殖的调控以及细胞迁移的诱导,并且近年来研究发现其与肿瘤耐药的发生密切相关,可能成为恶性肿瘤的潜在治疗靶点之一。本文对P2Y2受体在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。

嘌呤受体P2Y_2在涎腺腺样囊性癌的表达及ATP对其细胞生长的抑制

目的研究嘌呤受体P2Y2在涎腺腺样囊性癌非高转移细胞株(SACC-83)和高转移细胞株(SACC-LM)的表达,及其激动剂ATP对二者细胞生长的抑制作用。方法采用免疫细胞化学法检测P2Y2受体在SACC-83和SACC-LM细胞株中的表达;采用MTT法检测不同浓度ATP(0.1mM/L、0.2mM/L、0.4mM/L、0.8mM/L和1.6mM/L)在不同作用时间点(24h、48h和72h)对SACC-83和SACC-LM细胞生长的抑制作用。结果 SACC-83和SACC-LM细胞中P2Y2均呈阳性表达,在细胞膜的染色较胞浆深,其表达在两细胞株中无明显差异。ATP对SACC-83和SACC-LM细胞的生长均有明显的抑制作用(P<0.05),并且对SACC-LM细胞的抑制作用强于对SACC-83细胞的抑制作用,其抑制作用与药物浓度和作用时间呈正相关。结论不同转移能力的涎腺腺样囊性癌细胞SACC-83和SACC-LM的胞膜和胞浆中均有嘌呤受体P2Y2表达,ATP对二者细胞生长有显著抑制作用。

基于CaCC的P2ry2调节剂细胞筛选模型的建立及应用

目的:构建基于钙激活氯离子通道(CaCC)的高通量P2Y2嘌呤受体(P2ry2)调节剂细胞筛选模型。方法:采用RT-PCR方法验证Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮细胞(FRT细胞)中P2ry2的mRNA表达水平,切胶回收PCR扩增产物并进行序列测序和比对,进一步应用Western blot检测FRT细胞的P2ry2蛋白表达水平。构建钙激活氯离子通道ANO1和对卤族元素敏感的黄色荧光蛋白双突变体YFP-H148Q/I152L真核表达载体,应用脂质体转染、抗生素筛选和有限稀释,获取共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞。采用倒置荧光显微镜观察共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L细胞的情况,并应用荧光淬灭动力学实验验证模型的有效性;荧光淬灭动力学实验验证细胞模型是否可筛选P2ry2调节剂,并应用Fura-2/AM荧光探针法检测细胞内游离钙的变化,探究胞内Ca2+浓度与P2ry2调节剂的剂量依赖关系;用Z'因子评价本模型的稳定性和可重复性。结果:FRT细胞内源性表达P2ry2;倒置荧光显微镜中观察到ANO1在细胞膜上表达绿色荧光,YFP-H148Q/I152L在胞浆中表达绿色荧光,成功构建了共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的细胞模型;荧光淬灭动力学实验证实该细胞模型可筛选P2ry2调节剂,应用Fura-2表明该细胞模型可敏感地检测胞浆内钙离子浓度的变化且Ca2+浓度与P2ry2调节剂及相对荧光强度呈剂量依赖关系;Z'因子为0.75,说明该细胞模型可以高通量筛选P2ry2的调节剂且有良好的稳定性与可重复性。结论:成功构建了一种经济简便快捷高效的P2ry2调节剂细胞筛选模型,适用于P2ry2调节剂的发现与评价。