嘌呤核苷类抗病毒药物470例不良反应分析

2002年8月在法国巴黎召开的世界病毒学大会提出的第7份病毒类学报告指出:使人类致病的病毒有29个科,7个亚科,53个属,1200多种病毒.发病率高,危害性大的病毒性疾病有6类,其中的一类为由8种人疱疹病毒引起的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎、间质性肺炎、疱疹性脑炎、眼角膜炎、生殖器疱疹、带状疱疹、唇疱疹.[1]

嘌呤核苷磷酸化酶与嘧啶核苷磷酸化酶的融合表达及酶法合成嘌呤核苷类产物

将嘌呤核苷磷酸化酶与嘧啶核苷磷酸化酶进行融合,提高生物酶法催化合成克拉屈滨等嘌呤核苷类产物的产率。设计不同的刚性、柔性连接短肽(Linker),将嘧啶核苷磷酸化酶EcUP与嘌呤核苷磷酸化酶AmPNP连接融合,考察酶融合蛋白的可溶性表达与活性情况。使用EEEEEEKKK短肽连接的融合蛋白EcUP-L4-AmPNP可溶性表达水平较高,并对嘌呤核苷与嘧啶核苷均具有反应活性,对嘌呤核苷的水解率远小于嘧啶核苷。研究发现:融合酶EcUP-L4-AmPNP催化合成克拉屈滨等嘌呤核苷类产物的产率70.4%~98.3%,合成产率比分别加入酶EcUP和酶AmPNP的游离双酶体系提高了约1.5~2.0倍。核苷磷酸化酶的融合蛋白有利于实现高效催化合成嘌呤核苷产物,生物催化合成克拉屈滨等几种嘌呤核苷类产物的产率显著提高。

新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物的合成

以1,3,5-三-O-苯甲酰基-2-脱氧-2-β-氟-α-D-核糖为原料,通过溴代、与4-氯吡咯[2,3-d]嘧啶的钠盐偶合、4-氯的氨基化等反应,设计合成了一系列具有新型结构的4-取代-9-(2′-脱氧-2′-β-氟-β-D-呋喃糖基)吡咯[2,3-d]嘧啶类化合物,其化学结构经核磁共振、高分辨率质谱分析确证;并且初步探讨了反应条件和反应机理.结果表明,以无水四氢呋喃为溶剂,密闭高压回流反应,反应产率较高.

新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物的抗乙型肝炎病毒体外活性实验研究

探讨新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用,为了将新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物作用于以Hep G2.2.15细胞系,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测样品对Hep G2.2.15细胞的毒性,采用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)检测细胞上清中HBsAg和HBeAg的变化.结果显示,新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物在第9天时,浓度为10μmol/L,对HBsAg和HBeAg的抑制率都较高,化合物的毒性也较低.体外细胞培养表明,新型类嘌呤脱氧核糖核苷类化合物在体外有一定的抗乙型肝炎病毒作用.

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中DA和NE水平的影响及其机制

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑组织中多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平以及代谢关键酶的影响,探索嘌呤核苷酸治疗药物依赖的可能性。方法:65只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(C)、海洛因组(H)、海洛因+嘌呤核苷酸组(HAG)、海洛因+腺嘌呤核苷酸组(HA)、海洛因+鸟嘌呤核苷酸组(HG),每组13只。荧光分光光度计法检测各组大鼠中脑组织中DA和NE水平,ELISA试剂盒检测酪氨酸羟化酶(TH)水平,实时定量PCR法检测TH的表达。电镜下观察大鼠VTA区神经结构的形态变化。结果:与C组比较,H组DA、NE、TH水平和TH表达水平降低(P<0.05)。与H组比较,HAG组DA、NE、TH水平升高(P<0.05),HA组TH水平升高(P<0.05),HG组TH、NE水平升高(P<0.05)。与C组比较,H组TH基因表达降低;与H组比较,HAG、HA及HG组中TH基因表达水平升高(P<0.05)。电镜下H组出现神经毡水肿及髓鞘脱落现象,HAG、HA和HG组常染色体稍有增多,超微结构损伤都较H组减轻。结论:嘌呤核苷酸补偿能提高大鼠脑组织中DA和NE的水平,能够减轻海洛因对大鼠造成的损伤,提示嘌呤核苷酸治疗药物依赖具有可行性。

嘌呤核苷酸减弱吗啡抑制的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢

目的:探讨外源性嘌呤核苷酸对吗啡致神经细胞核苷酸合成代谢降低的影响。方法:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12细胞)分为对照组、吗啡组、单嘌呤核苷酸(AMP+GMP)组、三嘌呤核苷酸(ATP+GTP)组、吗啡+AMP+GMP组及吗啡+ATP+GTP组。应用RT-PCR法检测各实验组腺苷激酶(AK)和次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)基因转录产物含量的变化。结果:吗啡组AK mRNA及HGPRT mRNA表达量(分别为1.330±0.108和1.407±0.141)与对照组(1.874±0.161和1.923±0.155)比较明显降低(P<0.01,P<0.05)。吗啡+AMP+GMP组AK mRNA表达量(1.626±0.171)与吗啡组和对照组比较差异无显著性(P>0.05),HGPRT mRNA表达量(1.796±0.168)高于吗啡组(P<0.05)。吗啡+ATP+GTP组AK mRNA表达量(1.107±0.164)低于对照组(P<0.01),HGPRT mRNA表达量(1.563±0.209)与吗啡组及对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:外源性补充嘌呤核苷酸能改善吗啡所致的PC12细胞嘌呤核苷酸合成代谢关键酶基因表达降低。

嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠睾丸和附睾组织中腺苷脱氨酶活性及基因表达的影响

目的:研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖及戒断大鼠睾丸、附睾腺苷脱氨酶(ADA)活性及基因表达的影响,阐明海洛因对男性生殖系统嘌呤核苷酸代谢的损害及嘌呤核苷酸补偿的对抗作用。方法:建立海洛因依赖及戒断大鼠模型,80只建模成功的雄性Wistar大鼠随机分为对照组(生理盐水)、海洛因组、海洛因戒断3d组、海洛因戒断9d组、核苷酸组(不给海洛因)、海洛因+核苷酸组(同时给药)、核苷酸3d组及核苷酸9d组(每组10只),检测睾丸和附睾组织内ADA活性及基因表达的情况。结果:睾丸和附睾组织中ADA活性,海洛因组和海洛因戒断3d组均明显高于对照组(P<0.05),其他各组与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05);睾丸组织中ADAmRNA水平,海洛因组明显高于对照组(P<0.05),附睾组织中ADAmRNA水平,海洛因组、海洛因戒断3d组和海洛因戒断9d组均明显高于对照组(P<0.05),其他各组与对照组比较,差异均无显著性(P>0.05)。结论:海洛因对大鼠睾丸和附睾组织中ADA活性和基因表达有持续增强作用,补偿嘌呤核苷酸可以对抗海洛因的作用。

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响

目的:探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸分解代谢的影响,阐明嘌呤核苷酸补偿治疗海洛因依赖效应机制。方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组。检测各组血尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cre)含量,以及血浆和大脑皮质腺苷脱氨酶(ADA)和黄嘌呤氧化酶(XO)活性。结果:海洛因组血浆中UA含量及ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组血浆UA含量及ADA、XO的活性与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。各组间BUN和Cre含量差异无显著性(P>0.05)。海洛因组大脑皮质中ADA、XO的活性均比对照组明显升高(P<0.05),而海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组大脑皮质ADA、XO的活性与海洛因组相比明显降低(P<0.05)。结论:海洛因可促进大鼠整体水平上嘌呤核苷酸的分解代谢,而补偿嘌呤核苷酸可以抑制或拮抗海洛因的上述作用。

嘌呤对慢性吗啡处理大鼠热痛阈与急性戒断的影响

目的:研究嘌呤碱基与嘌呤核苷对吗啡依赖大鼠的热痛阈与急性戒断的影响。方法:28只大鼠随机分成对照组、吗啡依赖组、吗啡依赖+嘌呤碱基组、吗啡依赖+嘌呤核苷组,每组7只。通过热敏感甩尾实验,记录大鼠热敏感甩尾潜伏期;通过纳洛酮催促,对大鼠急性戒断症状进行观察与评定。结果:与对照组相比,吗啡依赖组、吗啡依赖+嘌呤碱基组、吗啡依赖+嘌呤核苷组均产生明显的药物抗痛觉效应(P<0.05);吗啡与嘌呤碱基或与嘌呤腺苷同时作用大鼠的甩尾潜伏期与吗啡依赖组相比有延长的趋势(P>0.05);吗啡与嘌呤碱基或与嘌呤核苷同时作用的大鼠戒断后,湿狗样抖动及腹泻/排便的发生次数比吗啡单独作用组明显增加(P<0.05)。结论:本实验观察到系统应用腺嘌呤/鸟嘌呤、腺苷/鸟苷对吗啡依赖大鼠既可提高其基础热痛阈,又可加重其部分急性戒断症状。

高效液相色谱法测定混合核苷片中四种核苷的含量

目的 建立高效液相法同时测定混合核苷片中腺嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷、尿嘧啶核苷、胞嘧啶核苷含量的方法。方法 采用C18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱;流动相：以0.01mol·L^-1磷酸二氢钾溶液为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱;流速：1.0mL·min^-1;检测波长：260nm。用保留时间定性,以峰面积按外标法定量。结果 四种核苷分离良好,线性关系良好（r=0.9996）,平均加样回收率在98.4%-101.9%,RSD%≤2.7%。结论 本方法简便、准确,可用于混合核苷片中四种核苷的定性和定量分析。

腺嘌呤核苷酸转位酶与癌细胞凋亡

腺嘌呤核苷酸转位酶(ANT)是线粒体上的一类转运蛋白。它与癌细胞的代谢和凋亡过程相关,在恶性肿瘤的新型治疗方面有一定潜能。ANT的四种异构体作用不同,本文将分别阐述它们与癌细胞凋亡的关系。

核苷类抗代谢药物的研究进展

综述近年来核苷类抗代谢药物的最新研究进展,核苷类抗代谢物的分类,各类核苷类似物的作用机制、药物代谢机制、适应证以及核苷类前药的设计方法。

恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎临床疗效评价

病毒的持续复制和免疫功能紊乱是慢性乙型肝炎（CHB）的发病关键因素［1］。除了抗炎、免疫调节、抗肝纤维化、改善肝功能等，及时使用抗病毒治疗可迅速抑制 HBV，减少肝细胞间的相互传播，减轻肝细胞的损伤坏死［2］。恩替卡韦（ETV）是公认的新一代鸟嘌呤核苷类的抗 HBV 药物。为了评价其疗效，现将我院近5年来386例 CHB 患者用恩替卡韦抗病毒治疗的疗效进行分析。

补锌对急性冷应激大鼠解偶联蛋白水平的影响

目的 研究补锌对大鼠耐寒力的影响及其可能机制。方法 雄性SD大鼠 6 0只 ,随机分为 4组 ,1、3组正常进水进食 ,2、4组给予正常饲料 ,饮高锌水 [补锌 1mg (kg·d) ],5d后 ,3,4组大鼠于 - 15℃的冷室中暴露 2h ,测各组直肠温度后与 1,2组一同宰杀 ,测定血浆和组织中的锌含量 ;用3 H标记的鸟嘌呤核苷酸 (3 H GTP)与线粒体上解偶联蛋白 (UCP)相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经ScatchardPlot测定出两者结合的解离常数 (Kd)和最大结合量 (Bmax)。结果 未补锌组和补锌组直肠温度下降的幅度分别为 - 2 95± 0 6 1和 - 1 16± 0 39℃ (P <0 0 5 ) ;冷暴露可以增加组织的锌水平 ;补锌组、冷暴露组与对照组相比Bmax增加 ,Kd值无明显差别。结论 适量补锌可以通过增加棕色脂肪组织线粒体中UCP含量提高机体的耐寒力。

海洛因对脑及肌肉组织中腺苷脱氨酶含量的影响

目的:检测海洛因给药、停药大鼠脑和肌肉组织中腺苷脱氨酶(ADA)含量,探讨海洛因给药对嘌呤核苷酸分解代谢的影响。方法:建立海洛因给药、停药大鼠模型,测定脑及肌肉组织中的ADA含量。结果:与对照组比较,给药3d组大鼠脑和肌肉组织中ADA含量均有增高趋势(P>0 .0 5 ) ,给药9d组显著增高(P<0 .0 5 )。与给药9d组比较,停药3d组大鼠脑组织中ADA含量下降不显著,停药8d组明显降低(P<0 .0 1) ;停药3d组肌肉组织中ADA含量已明显低于给药9d组(P<0 .0 1) ,停药8d组下降更为显著。结论:海洛因通过增加ADA的含量,使脑及肌肉组织中嘌呤核苷酸分解代谢增强,且脑组织中这一作用比肌肉组织更显著、持久。

全反式维甲酸对大鼠棕色脂肪线粒体上解偶联蛋白活性和含量的影响

目的 :探讨全反式维甲酸 (t RA )对大鼠棕色脂肪组织线粒体上解偶联蛋白 (UCP)活性和含量的影响。方法 :将大鼠分为 t RA组和对照组 ,用 3H标记的鸟嘌呤核苷酸 (3H- GTP)与线粒体上解偶联蛋白相结合 ,用液体闪烁仪测定其放射性活性 ,经 Scatchard Plot测定出两者结合的解离常数 (Kd)和最大结合量 (Bmax)。 结果 :t RA组 Bmax比对照组增加 1.48倍 ,Kd 值两组无明显差别 ,t RA组大鼠体重下降 ,棕色脂肪体积变小 ,白色脂肪变成淡红色。 结论 :t RA能使棕色脂肪组织线粒体中U CP含量增加 ,但不改变其活性 ;能增加棕色脂肪组织中脂肪消耗 ,可能在白色脂肪组织中诱导产生 UCP。

转录抑制剂DRB和α-Amanitin对A549细胞中Nrf2定位影响的研究

目的:利用细胞核亚细胞器结构的一些特异性蛋白质SC35、核孔复合体(nuclear porecomplex,NPC)、RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)及Y12等标记亚细胞器,探讨转录抑制剂5,6-dichloro-1-β-D-ribofuranosylbenzimidazole(DRB)与α-Amanitin对人非小细胞肺癌A549细胞中Nrf2的表达与定位的影响。方法:①50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分别作用于A549细胞1 h和6 h后,Western blotting检测Nrf2及其相关蛋白的表达变化。②50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分别处理A549细胞1 h,利用免疫荧光细胞技术检测Nrf2、SC35、NPC、RNAPolⅡ、Y12形态结构的变化,并研究Nrf2定位的变化。结果:①与对照组相比,DRB和α-Amanitin作用1 h后,Nrf2及其调控的下游基因HO-1、AKR1C和NQO1的蛋白质表达变化不明显,但6 h作用后,这些蛋白质的表达明显降低。②激光共聚焦显微镜观察显示,细胞经DRB和α-Amanitin处理1 h后,SC35的荧光强度明显增强,PolⅡ的荧光强度减弱,而Nrf2的定位无明显改变;NPC、Y12的表达无明显变化,且与Nrf2无共定位现象。结论:DRB和α-Amanitin能抑制Nrf2及其HO-1、AKR1C和NQO1的表达,但是对Nrf2的定位没有显著影响。

NADH在辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤中的防护作用

为研究细胞辅酶NADH在细胞辐射凋亡损伤中的防护作用 ,将L0 2肝细胞经 5 0Gy照射后加入不同浓度 (0～ 6 0 0 μg/ml)的NADH ,培养 6、12、2 4h ,观察细胞凋亡率并检测 3组Fas,Bax ,Bcl 2蛋白表达 ,透射电镜观察细胞凋亡形态。结果表明 ,辐射可以诱导细胞凋亡损伤 ,NADH抑制细胞辐射诱导的凋亡呈剂量依赖性 ,并可以上调Bcl 2蛋白和下调Fas、Bax蛋白表达。提示NADH对L0 2肝细胞有明显的抗辐射凋亡损伤作用 ,其作用机制可能与Fas、Bcl

亚低温对SIRS大鼠肝组织腺苷酸影响的实验研究

目的：通过测定亚低温情况下SIRS动物模型肝组织腺苷酸含量改变，对亚低温能否减轻SIRS动物模型损伤做初步探讨。方法：实验3hr测定Wistar大鼠正常对照组(NC组)、内毒素组(LPS组)、亚低温组(MHT组)肝组织腺嘌呤核苷酸水平。结果：LPS组和MHT组大鼠肝组织腺苷酸水平均较正常对照组明显降低，亚低温组肝组织腺苷酸水平较内毒素组明显升高。结论：亚低温可减缓SIRS大鼠肝组织能量障碍。