嘌呤霉素敏感的氨肽酶结构与功能研究进展

嘌呤霉素敏感的氨肽酶(puromycin-sensitive aminopeptidase,PSAP)是一种M1氨肽酶(M1 amino‐peptidases),具有对嘌呤霉素敏感的特性。其结构包括N端底物结合序列GAMEN、酶活中心HEXXH(X)18E基序以及C端ERAP-1样超家族(ERAP like superfamily)结构域。作为M1型氨肽酶中的重要亚型,PSAP由定位于17q21.32的基因NPEPPS编码,全长为919个氨基酸。PSAP广泛分布于人体各组织,在脑中表达最高,其次是心脏和骨骼肌。同时,PSAP也在肝脏、肾小管上皮、小肠和大肠上皮以及胃上皮细胞中表达。通过其水解活性,PSAP可以清除一些毒性蛋白聚集体,如微管相关蛋白Tau、多聚谷氨酰胺(poly Q)及铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)等,参与阿尔茨海默症、亨廷顿舞蹈病、肿瘤等疾病的发生发展过程。现有PSAP酶活抑制剂包括bestatin、amastatin、leuhistin、actinonin和嘌呤霉素等,其中一些已经成药或者正在进行临床试验。本文总结了M1氨肽酶特别是PSAP的生物学功能、结构和相关药物研究进展,旨在为深入研究PSAP的结构、功能及靶向药物的开发提供依据。

嘌呤霉素敏感的氨肽酶对Tau^(P301L)诱导细胞凋亡的影响

目的探讨嘌呤霉素敏感的氨肽酶(PSA)对TauP301L诱导的细胞凋亡的影响。方法将TauP301L表达载体转入SH-SY5Y和PC12细胞24、48和72 h后,采用MTT法检测两种细胞增殖率的变化,Hoechst33342染色检测细胞核形态学的变化,确定TauP301L的最佳作用时间;在PC12细胞中转染TauP301L和PSA载体,在SH-SY5Y细胞中转染TauP301L和PSA-siRNA载体,Western blotting法检测Caspase-3的表达,酶标仪检测Caspase-3的活性变化,流式细胞法检测细胞凋亡率。结果 TauP301L诱导细胞凋亡具有时间依赖性。TauP301L转染细胞48 h后,PC12细胞、SH-SY5Y细胞存活率明显下降(P<0.01),细胞核出现凋亡的形态学变化;流式检测细胞凋亡率增加(P<0.01)。在PC12细胞中,与TauP301L组相比,PSA和TauP301L共同作用组Caspase-3的活性形式表达量及酶活性明显下降(P<0.01),细胞凋亡率显著下降(P<0.01);而在SH-SY5Y细胞中,与TauP301L组相比,TauP301L和PSA-siRNA共同作用组的细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Caspase-3的活性形式表达量和活性均升高(P<0.01)。结论 TauP301L能够诱导细胞凋亡,而PSA能够下调TauP301L所诱导的这种凋亡,对神经细胞起到保护作用。

嘌呤霉素敏感的氨肽酶对β-淀粉样蛋白诱导的细胞凋亡的影响

目的探讨嘌呤霉素敏感的氨肽酶（PSA）对p一淀粉样蛋白（A1325-35）诱导的SH—SY5Y细胞、PCI2细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测AB。3，对SH．SY5Y、PCI2细胞生长的影响；Hoechst染色检测A对SH．SY5Y、PCI2细胞核形态的影响；进一步采用脂质体转染法在SH．SY5Y细胞中瞬时转染PSA—siRNA，在PCI2细胞中瞬时转染PSA重组质粒，加入A125-35作用24h后收集细胞．进行流式细胞术检测细胞凋亡率；Westemblotting检测PSA、caspase一3蛋白的表达变化；酶标仪检测caspase．3活性。结果A[325。，抑制SH．SY5Y、PCI2细胞增殖，细胞核发生凋亡的形态学改变．流式检测细胞凋亡率增加；在SH．SY5Y细胞中，沉默PSA表达能使A132，诱导的细胞凋亡率升高，促进caspase-3酶原激活，caspase-3活性升高。反之，PCI2细胞中过表达的PSA能使A132；诱导的细胞凋亡率下降，抑制caspase-3酶原激活，caspase-3活性降低。结论A。能抑制神经细胞生长，引起神经细胞凋亡；PSA能抑制A，诱导的神经细胞凋亡，对神经元具有保护作用，其机制可能与抑制caspase-3通路的激活有关。

miR-614通过调控靶基因PSA表达抑制人肺癌细胞的侵袭和增殖能力

背景与目的 MicroRNAs(miRNAs)是一种非编码的小分子RNA,在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用,各种miRNAs对肺癌的作用及机制仍需进一步阐明。本研究探讨了miR-614对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法应用实时定量PCR检测miR-614在高低不同转移能力肺癌PGCL3和PGLH7细胞中的表达水平;脂质体2000介导分别转染miR-614类似物和抑制物入PGCL3和PGLH7细胞,应用Transwell实验检测miR-614对肺癌细胞侵袭的作用;应用CCK8实验和BrdU掺入实验检测miR-614对肺癌细胞增殖的作用;生物信息学软件预测miR-614潜在的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-614是否作用于嘌呤霉素敏感性氨肽酶(puromycin-sensitive aminopeptidase,PSA)mRNA的3’UTR区预测靶位;Western blot检测PSA蛋白水平。结果 miR-614在高转移肺癌细胞PGCL3中的表达水平明显低于其在低转移肺癌细胞PGLH7的表达水平;体外侵袭实验结果显示,miR-614可抑制肺癌细胞侵袭;细胞增殖实验结果显示,miR-614可抑制肺癌细胞增殖;miRanda软件预测并经双荧光素酶报告基因验证PSA是miR-614的靶基因;miR-614类似物可下调PSA蛋白表达,miR-614抑制物可上调PSA蛋白表达。结论 miR-614过表达抑制了人肺癌细胞的侵袭和增殖能力,PSA是miR-614下游靶基因之一。