工业色谱法分离制备7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇酶解产物10-去乙酰紫杉醇

基于工业色谱法分离制备抗癌药物紫杉醇的半合成前体10-去乙酰紫杉醇(10-DAP)。7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇(10-DAXP)在我国特有红豆杉品系(中华红豆杉)枝叶中含量丰富,以其为原料可制备紫杉醇最理想的半合成前体——10-DAP。本研究以部分纯化后的7-木糖基-10-去乙酰紫杉烷为原料,通过β-木糖苷酶水解该粗提物中的主要成分10-DAXP及其两个微量类似物7-木糖基-10-去乙酰三尖杉宁碱(10-DAXC)和7-木糖基-10-去乙酰紫杉醇C(10-DAXP C),脱去其C-7位上的木糖基,水解产物采用大孔吸附树脂吸附,正相快速柱分离和反相制备色谱分离,可获得高纯度的目标物10-DAP,产物纯度为96%,整个工艺的收率大于75%。该方法适合以10-DAXP为原料大规模制备紫杉醇的半合成前体化合物10-DAP,为工业化生产紫杉醇开辟了一条新途径。

大孔吸附树脂提取7-木糖-10-去乙酰紫杉醇酶解产物10-去乙酰紫杉醇

本研究利用大孔树脂富集7-木糖10-去乙酰紫杉醇的酶解产物10-去乙酰紫杉醇。首先以10-去乙酰紫杉醇(10-DAT)绝对含量为指标,通过HPLC测定比较HP20、XAD4、XAD16、XAD1600四种大孔树脂对10-去乙酰紫杉醇的吸附与解吸性能力,筛选出最佳树脂XAD1600进行实验。最佳的吸附解吸条件为:树脂柱高径比10∶1,吸附流速20mL/min,吸附量23.85mg/mL,以6倍柱床体积的90%乙醇为洗脱液,洗脱流速20mL/min。经XAD1600型树脂富集后10-去乙酰紫杉醇回收率达96.5%,含量20.5%。且树脂柱重复使用3次后,其吸附能力仅降低5%。

7-木糖紫杉烷类化合物合成紫杉醇的新工艺研究

以7-木糖-10-去乙酰基紫杉烷类化合物为原料,通过氧化还原、乙酰化、去乙酰化的三步反应得到含有紫杉醇的混合物;通过柱分离和重结晶分离提纯,得到高纯度紫杉醇.合成的紫杉醇经高效液相色谱(HPLC)、核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13 C-NMR)和高分辨质谱(HRMS)等进行了表征和分析确认.此合成工艺路线拓展了化学半合成紫杉醇的原料来源,降低了紫杉醇的生产成本,拓展了紫杉醇的原料来源.

7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的优化试验研究

在寻找东北红豆杉(Taxus cuspidata)中的抗癌的活性物质过程中,一种亲水性紫杉醇衍生物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇被筛选出来。目的是优化并建立红豆杉中7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的提取工艺及鉴定,本文以使用RP-HPLC测定的7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇含量为指标,采用正交试验法对提取过程中乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取次数(C)、提取时间(D)4因素进行优化。结果从红豆杉中提取7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的最主要影响因素是乙醇浓度及固液比,高浓度、高用量有利于提取;提取时间和次数也极为重要,单因素实验结果以2h/次和提取2次为最佳。结论N9(A3B3C2D1)、N8(A3B2C1D3)为优化选出的7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇最佳提取工艺条件。

利用天蓝色链霉菌转化7-木糖紫杉烷的研究

紫杉醇是目前临床治疗癌症的一线化疗药物,资源紧张,价格昂贵。7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-XDT)在红豆杉中含量可达紫杉醇的10倍,脱除木糖基后生成的10-脱乙酰紫杉醇(10-DAT)经乙酰化可生成紫杉醇。通过木聚糖平板对不同菌株进行筛选,从52株供试微生物中,发现27株在木聚糖平板上生长良好。经转化实验筛选,发现一株天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor YUCM 410115)具有转化7-XDT为10-脱乙酰紫杉醇的能力。菌体细胞经破碎离心后,沉淀及上清液均无转化反应出现,而发酵液的硫酸铵沉淀物则可以转化7-XDT生成10-DAT,表明该菌株能产生一种胞外紫杉醇-7-木糖苷酶,发酵液酶活为6 268U。首次发现天蓝色链霉菌能够产生紫杉醇-7-木糖苷酶,为7-XDT转化生产紫杉醇提供了新的酶源。

7-O-[ω-(N-L-氨基酸甲酯)-烷基]-染料木素的合成与表征

染料木素具有多种生理活性,以染料木素和L-氨基酸为原料,经过染料木素烷基化、氨基酸酯化、偶联3步反应,合成了一系列新的标题化合物,并对8个标题化合物进行了1HNMR、HRMS和IR结构表征。

4′,7-二辛氧基染料木素的合成及其抗乳腺癌活性研究

目的合成4′,7-二辛氧基染料木素并检测其生物活性。方法在染料木素的7位和4′位引入辛氧基,并采用MTT比色法,以5氟尿嘧啶为阳性对照,评价其对体外培养的人乳腺癌(MCF-7)细胞的作用。结果 4′,7-二辛氧基染料木素对MCF-7细胞的增殖抑制作用强于阳性对照药物。结论提示4′,7-二辛氧基染料木素可作为抗乳腺癌的新型候选药物。

7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠急性毒性研究

目的研究化合物7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素对小鼠的急性毒性。方法给小鼠按剂量2000mg·kg^-1一次性灌胃7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素,连续观察9天,统计死亡率,计算出LD50值。结果小鼠按剂量2000mg·kg^-1给予7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素后,均无明显中毒反应出现,也无死亡现象。结论 7-二氟甲氧基-4′,5-二辛氧基染料木素毒性极低,属低毒范围。

糖化温度对7°P麦汁阿拉伯木聚糖、β-葡聚糖的影响研究

小麦是良好的啤酒酿造原料,在我国种植面积广泛,价格较低,品种多,富含蛋白质、淀粉。本文设计添加10%小麦芽进行糖化,研究不同糖化温度和糖化时间对7°P麦汁理化指标的影响。实验结果表明,52℃15min、63℃110min、72℃20min、78℃过滤糖化工艺中,7°P麦汁阿拉伯木聚糖含量最多,为1034.33mg/L;52℃15min、63℃100min、72℃20min、78℃过滤糖化工艺中,β-葡聚糖含量最高,为72.96mg/L。当阿拉伯木聚糖产生919.33mg/L、β-葡聚糖产生两为72.96mg/L时,7°P麦汁的粘度最大,此时,过滤速率为81.52mL/30min。

嘎木朱尔在大鼠伤口愈合过程中对白细胞介素-1β影响的实验研究

目的:通过建立Wistar大鼠创伤缺损模型,检测Wistar大鼠伤口的白细胞介素-1β,观察嘎木朱尔对大鼠创伤愈合的药效.方法:将72只Wistar大鼠随机分为蒙药组,云南白药组,模型对照组和空白对照组,每组18只.除空白对照组外,其它3组Wistar大鼠均建立创伤缺损模型,蒙药组以嘎木朱尔处理、云南白药对照组以云南白药处理,模型对照组伤口不做任何处理.造模后第1、3、5、7、9、14天分批处死各组大鼠,应用酶联免疫吸附法检测大鼠伤口皮肤组织的白细胞介素-1β含量.结果:蒙药嘎木朱尔能够明显抑制创伤组织中炎症因子白细胞介素-1β,效果优于云南白药组.结论:嘎木朱尔能够促进创伤组织的再生和修复.

滇龙胆草7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因的克隆与表达分析

克隆滇龙胆7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因GrDL7H,并进行表达分析,为龙胆苦苷生物合成途径的解析奠定基础。根据滇龙胆转录组GrDL7H序列,使用RT-PCR(逆转录PCR)和3′RACE(cDNA末端快速扩增)技术从滇龙胆幼叶中克隆该基因及其启动子,并进行序列分析和组织特异性表达分析。结果表明,GrDL7H基因(登录号:KT306971)全长2154bp,包含5个外显子和4个内含子,其中GrDL7H基因(登录号:KP340980)开放阅读框长1542bp,编码513个氨基酸;GrDL7H蛋白质相对分子质量为59.08ku,等电点(pI值)为8.88,属于CYP450蛋白超家族成员,可能定位于叶绿体;GrDL7H蛋白质无信号肽,为亲水稳定蛋白质,主要由α-螺旋和环构成;GrDL7H蛋白质具有CYP450蛋白质保守结构域,功能为参与氧化还原反应;滇龙胆GrDL7H蛋白质与黄金鸡纳树CcDL7H蛋白质的亲缘关系最近;GrDL7H基因启动子主要包含6个光应答元件、1个赤霉素应答元件、6个参与茉莉酸甲酯应答的顺式调控元件和1个热胁迫应答元件等;组织特异性表达分析结果表明,GrDL7H基因主要在叶片中表达。

马特链霉菌7-木糖紫杉烷糖基水解酶初步研究

酶法转化7-木糖紫杉烷(7-XDT)为10-脱乙酰基紫杉醇(10-DAT)是目前合成紫杉醇的最主要途径。本研究分离到一株具有产生7-木糖紫杉烷(7-XDT)糖基水解酶能力的马特链霉菌(Streptomyces matensi YUCM 410051),通过酶的最适反应温度、硫酸铵分级沉淀、最适反应pH和酶的有机试剂耐受等研究,发现最适反应温度为25~30℃,硫酸铵分级沉淀酶活在20%~70%的盐浓度时活性最高;粗酶液最适反应pH在6.0~7.5,酶的甲醇耐受浓度和DMSO耐受浓度均为10%。深入研究该酶对开发具有水解7-木糖紫杉烷(7-XDT)中木糖基的酶资源和提高红豆杉中的紫杉烷类化合物的利用率具有重要价值。

外用蒙药嘎木朱尔、哈布德仁-9治疗体外实体瘤的临床观察

目的:探讨蒙药嘎木朱尔、哈布德仁-9治疗体外实体瘤的临床疗效。方法:选取2018年1月—2020年12月,于内蒙古自治区国际蒙医医院肿瘤科病房就诊的明确诊断癌症、有实体瘤、符合纳入标准的60例患者,随机分为试验组、对照组,各30例。试验组给予蒙药嘎木朱尔、哈布德仁-9肿瘤部位外敷,根据病情口服相关蒙药;对照组给予西医常规治疗和蒙药内服,7 d为1个疗程,每组治疗3个疗程。参照《实体瘤疗效评价标准1.1版(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors RECIST Version 1.1)》,《疼痛数字评分量表(numeric rating scale,NRS)》标准,《欧洲癌症研究与治疗组织研制的生活质量核心调查问卷第3版中文版生活质量调查问卷测评》标准,实体瘤部位红肿、热痛症状、渗血及溃疡的标准为评分标准,于治疗前后进行评分,评估蒙药嘎木朱尔、哈布德仁-9对体外实体瘤大小、疼痛、红肿热痛、渗血及溃疡、生活质量的疗效,以此证明蒙药嘎木朱尔、哈布德仁-9的临床疗效及安全性。结果:①试验组男性16例,女性14例;最大年龄86岁,最小年龄34岁,平均年龄(57.73±11.182)岁;30~50岁9例,50~70岁16例,70岁以上5例。对照组男性13例,女性17例;最大年龄88岁,最小年龄36岁,平均年龄(58.83±11.071)岁;30~50岁7例,50~70岁17例,70岁以上6例。②实体瘤大小好转情况:治疗后试验组完全缓解1例、部分缓解15例、疾病稳定8例、疾病进展6例,客观缓解率53.3%(16/30),临床获益率80.0%(24/30),总有效率80.0%(24/30)。对照组完全缓解0例、部分缓解11例、疾病稳定10例、疾病进展9例,客观缓解率36.7%(11/30),临床获益率70.0%(21/30),总有效率70.0%(21/30)。③治疗后肿瘤部位出血情况、肿瘤部位发热情况、肿瘤部位疼痛情况均有明显好转(P<0.05)。治疗后组间对比差异有统计学意义(P<0.05),试验组好转情况比对照组显著(试验组肿瘤部位出血情况总有效率92.9%,试照组肿瘤部位出血情况总有效率62.5%;试验组肿瘤部位发热情况总有效率87.5%,对照组肿瘤部位发热情况总有效率26.3%;试验组肿瘤部位疼痛情况总有效率87.0%,对照组肿瘤部位疼痛情况总有效率80.0%)。④生活质量对比情况:试验组生活质量-躯体功能、情绪、总健康、疲倦、恶心与呕吐、疼痛、气促、失眠、食欲丧失等治疗前后差异有统计学意义(P<0.05);对照组情绪、总健康、恶心与呕吐、疼痛、食欲丧失等治疗前后差异有统计学意义(P<0.05);治疗后组间对比:认知功能、疼痛、失眠差异有统计学意义(P<0.05),其余差异无统计学意义(P>0.05)。⑤均未发生不良反应。结论:①试验组实体瘤客观缓解率、临床获益率、总有效率均比对照组高。②试验组的肿瘤部位出血情况、肿瘤部位发热情况、肿瘤部位疼痛情况的好转比对照组显著。③试验组用蒙药嘎木朱尔、哈布德仁-9外敷于实体瘤部位后生活质量-认知功能、疼痛、失眠有显著好转(P<0.05),疗效比对照组显著。蒙药嘎木朱尔、哈布德仁-9能明显改善实体瘤部位的发热、疼痛、出血情况,能提高生活质量,值得在临床推广。

美洲大蠊肠道产7-木糖紫杉烷糖基水解酶菌株的筛选及鉴定

旨在筛选美洲大蠊肠道具有产7-木糖紫杉烷糖基水解酶性能的内生菌,并对其进行生物学鉴定。以实验室保存的178株美洲大蠊肠道内生菌为研究对象,采用刚果红透明圈法和荧光显色法筛选产木聚糖酶菌株,进一步利用薄层色谱法筛选产7-木糖紫杉烷糖基水解酶菌株。在此基础上,选取一株高产7-木糖紫杉烷糖基水解酶菌株进行形态学、生理生化和分子生物学鉴定,并采用高效液相色谱法测定其对7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇的转化率。结果显示,178株美洲大蠊肠道内生菌中有55株菌产木聚糖酶,其中8株链霉菌和2株贪铜菌可产生7-木糖紫杉烷糖基水解酶。高产菌株WA11-2-9经形态学特征、生理生化试验和16S rDNA序列分析鉴定为Streptomyces enissocaesilis。WA11-2-9可将7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇转化为10-去乙酰巴卡亭Ⅲ和10-去乙酰紫杉醇,主要产物10-去乙酰紫杉醇的转化率为21.52%。美洲大蠊肠道内生菌WA 11-2-9(GenBank Accession:MZ411692)具有分泌7-木糖紫杉烷糖基水解酶的能力,它为后续生物转化制备紫杉醇奠定了坚实基础。

7-(2-溴乙氧基)染料木素铬(Ⅲ)配合物对2型糖尿病db/db小鼠的降糖活性研究

目的:研究染料木素的结构衍生物7-(2-溴乙氧基)染料木素作为配体,合成铬(Ⅲ)配合物,并研究该配合物与染料木素铬(Ⅲ)配合物对2型糖尿病db/db小鼠的降糖活性差异。方法:首先染料木素与1,2-二溴乙烷反应,分离获得7-(2-溴乙氧基)染料木素,之后7-(2-溴乙氧基)染料木素与乙酸铬反应,分离纯化获得7-(2-溴乙氧基)染料木素铬(Ⅲ)配合物,并对其进行结构鉴定。将42只db/db小鼠随机分为7组,每组6只,分别为7-(2-溴乙氧基)染料木素铬(Ⅲ)配合物高、低剂量组,染料木素铬(Ⅲ)配合物高、低剂量组,阳性组,7-(2-溴乙氧基)染料木素组,模型组,另取6只C57小鼠作为正常组。药物干预4周后,研究该配合物及染料木素铬(Ⅲ)配合物对2型糖尿病db/db小鼠的生长状况、血糖、糖耐量、胰岛素耐量、血清生化指标、抗氧化能力、糖原含量、肝肾脏器指数的影响。结果:经过合成以及结构鉴定,该配合物结构为3个7-(2-溴乙氧基)染料木素与一个铬元素络合形成,络合位点为4-羰基及5-羟基,并含有2分子结晶水。经过药物干预,7-(2-溴乙氧基)染料木素铬(Ⅲ)配合物高、低剂量组,染料木素铬(Ⅲ)配合物高、低剂量组在生长状况、血糖水平、糖耐量、胰岛素耐量、血清生化指标、抗氧化能力、糖原含量、肝肾脏器指数与模型组比较都有不同程度的改善(P<0.05或P<0.01)。7-(2-溴乙氧基)染料木素铬(Ⅲ)配合物高剂量组在改善血糖、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、肝糖原、肌糖原、肝体比、肾体比等指标方面相较于染料木素铬(Ⅲ)配合物高剂量组有明显优势(P<0.05)。且7-(2-溴乙氧基)染料木素铬(Ⅲ)配合物在某些指标方面可以起到与阳性组类似的效果。结论:7-(2-溴乙氧基)染料木素铬(Ⅲ)配合物相较于染料木素铬(Ⅲ)配合物在改善糖脂代谢、抗氧化能力、糖原合成能力、糖尿病相关脏器修复能力等方面具有更优的效果,为研发功能性降血糖食品或药物的开发提供了重要参考。

HPLC同时测定柿叶提取物中槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷和染料木素含量的方法研究

目的：建立柿叶提取物中槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷和染料木素的HPLC同时测定方法。方法：采用HPLC法,Phenomenex-C18（250mm×4.6mm,5μm）,甲醇-0.02%磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长：368nm,流速：1mL/min;柱温30℃。结果：槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷和染料木素分别在7.44-297.4μg/mL范围和1.10-109.8μg/mL范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.20%和98.77%。结论：该方法准确、可靠,重复性好,可用于柿叶提取物的质量评价与控制标准,为柿叶功能性产品的研究开发奠定基础。

长期用药嘎木朱尔涂膜剂家兔血砷浓度的检测

家兔连续外用高、中、低剂量的嘎木朱尔涂膜剂4周,2周及4周后从耳缘静脉取血,采用氢化物-原子荧光法测定血液中砷的含量。高中低剂量组及对照组用药2周后血砷浓度依次为0.266μg/ml、0.200μg/ml、0.151μg/ml、0.072μg/ml;用药4周后分别为0.352μg/ml、0.270μg/ml、0.178μg/ml、0.085μg/ml。用药组血砷含量明显高于对照组且与用药剂量呈正相关;低剂量组2周与4周血砷浓度无显著性差异（P〉0.05）,中、高剂量组给药4周时血砷浓度比2周明显增高（P〈0.05）,提示：家兔长期大剂量外用嘎木朱尔涂膜剂,制剂中的砷在体内有明显的吸收蓄积作用,但按低剂量（0.45g生药/kg）短时间（小时2周）给药,砷的吸收在血中基本无蓄积。

蒙药嘎木朱尔治疗老年性阴道炎300例

目的 :使用蒙药治疗老年性阴道炎的疗效观察 ;方法 :阴道灌洗加局部上药 ;结果 :80 %以上患者用药2周后 ,自觉症状消失 ;结论 :疗效确切 ,值得推广。

耐热β-木糖苷酶的可溶性表达及其应用

紫杉醇作为一种具有突出药用价值的天然抗癌药物,其在红豆杉属植物中的含量极少,且已有的紫杉醇制备方法难以满足商业需求,因此酶法制备紫杉醇的研究受到越来越多的关注。通过β-木糖苷酶水解紫杉醇类似物7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇(7-XDT)得到10-去乙酰基紫杉醇(10-DT),再进一步被乙酰基转移酶催化变成紫杉醇,此双酶催化反应为紫杉醇的制备提供了一个可靠方法。以嗜热菌Thermotoga petrophila DSM 13995来源的β-木糖苷酶Tpexyl3为研究对象,利用重组酶Tpexyl3催化7-XDT制备10-DT。为了提高重组β-木糖苷酶Tpexyl3在大肠杆菌BL21(DE3)中的可溶性表达量,对6种商业化的分子伴侣蛋白进行了筛选。结果表明:分子伴侣蛋白dnaK-dnaJ-grpE能显著提高Tpexyl3在大肠杆菌中的可溶性表达量;在以质量分数1%的麦芽糊精作为碳源的富集肉汤(TB)培养基中,不添加诱导剂,32℃下发酵48 h,重组酶Tpexyl3的表达量可达190 U/mL,较原始重组质粒在溶菌肉汤(LB)培养基中的表达量(6.81 U/mL)提高了27.9倍;在重组酶Tpexyl3加酶量250 U/mL、7-XDT质量浓度500 mg/L、pH 5.5、80℃下反应4 h,可生成162 mg/L的10-DT,物质的量转化率为45.59%。