测定人红细胞嘧啶5′核苷酸酶含量的双抗体夹心ELISA方法

为了进一步探讨嘧啶 5′核苷酸酶 (P5′N)缺乏症的发病机制 ,我们利用P5′N的特异性底物尿苷一磷酸 (UMP)作为配基 ,制备尿苷一磷酸 己二酰肼 琼脂糖 4B(UMP ADH Sepharose 4B)亲和层析柱 ,结合硫酸铵分级分离和沉淀、离子层析及亲和层析等方法提纯人红细胞P5′N。将所得P5′N免疫家兔 ,获得兔抗人抗体。以兔抗人P5′N抗体为包被抗体 ,辣根过氧化物酶 (HRP) 兔抗人P5′N抗体为显示抗体 ,经方阵法、抗原阻断试验及抗原替代试验后 ,建立定量测定人红细胞的P5′N双抗体夹心酶联免疫吸附实验。实验结果显示 ,所得兔抗人红细胞P5′N抗体效价为 1∶4 ,所建双抗体夹心ELISA法灵敏度为 5ng ml,其阻断率大于 95 %,而取代率小于 30 %。同时 ,测定正常人红细胞P5′N含量为 (71.77± 10 .98)ng mgNHP。该法特异性强 ,敏感性高 ,可检测最低含量为 5 - 2 0ng ml的P5′N含量 ,在临床上能适应大样本测定。

铅接触工人红细胞嘧啶5’核苷酸酶活力研究

采用紫外光分光光度法测定１５７ 名铅接触工人和３０名非铅接触工人红细胞Ｐ５’Ｎ 的活力，并同时测定血铅、红细胞游离原卟啉（ＦＥＰ） 及锌卟啉（ＺＰＰ） 、尿铅和尿δ－ 氨基酮戊酸（δ－ ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ 简称δ－ ＡＬＡ） 值。结果表明，铅中毒组红细胞Ｐ５’Ｎ活力为２８４ ±１３２ 单位（μｍｏｌ 尿嘧啶／ｇＨｂ／ｈ） ，铅吸收组为５２７ ±１５３ 单位，铅接触组为９０６ ±２１３ 单位，非铅接触组为１１１９ ±２８６ 单位。方差分析显示各组间红细胞Ｐ５’Ｎ 活性存在明显差异（Ｐ＜ ０００１） 。相关分析表明：血铅与红细胞Ｐ５’Ｎ 活力、ＦＥＰ、ＺＰＰ、尿铅、尿δ－ ＡＬＡ 的相关系数分别为－０７６３７（Ｐ＜ ０００１） ，０５７３４（Ｐ＜ ０００１） ，０５７９４（Ｐ＜ ０００１） ，０４８２４（Ｐ＜ ０００１） ，０４６（Ｐ＜ ０００１） 。提示，红细胞Ｐ５’Ｎ 既可作为铅接触的监测指标。

红细胞嘧啶5'-核苷酸酶缺乏症4例及文献复习

目的:了解红细胞嘧啶5'-核苷酸酶(P5'N)缺乏症的特点。方法:回顾性分析4例红细胞P5'N缺乏症患者的病历资料,并结合文献进行复习。结果:4例患者中3例为男性,1例女性。年龄范围7个月～33岁,病程7个月～17年。所有患者均有轻度至中度的贫血,均有脾脏肿大,红细胞P5'N活性均低于正常。结论:遗传性P5'N缺乏症是一种少见的遗传性非球形细胞溶血性贫血,本病的血液学特点与其他遗传性非球形细胞溶血性贫血的主要区别在于本病红细胞P5'N活性下降。本病尚无特效治疗措施,目前仍以支持治疗为主。

双抗体夹心ELISA法测定正常人红细胞中的嘧啶5′核苷酸酶含量

我们在提纯嘧啶5′核苷酸酶(P5′ Nase)的基础上,建立了双抗体夹心ELISA法定量测定正常人红细胞P5′ Nase的含量,并与其酶活性作对比,以期为P5′ Nase缺陷症的诊断和研究提供一种新方法.……

人红细胞嘧啶5′-核苷酸酶Ⅰ分子量鉴定、氨基酸组成分析及其微量测序

为进一步探讨遗传性红细胞嘧啶 5′ 核苷酸酶Ⅰ (P5′N Ⅰ )缺乏症的发病机制 ,在纯化人红细胞P5′N Ⅰ的基础上 ,分别用质谱仪和氨基酸分析仪分析其分子量及氨基酸组成 ,同时将该酶经胰蛋白酶水解后进行微量测序 ,并行生物信息学分析。研究结果 :质谱分析表明在蛋白电泳呈一条带的纯化的人红细胞P5′N Ⅰ中发现 3种分子量成倍数关系 ,且质谱图曲线非常吻合的蛋白 ,分子量分别为 2 6 95 2 .9,5 5 4 76及 110 938。测出 1个酶解肽片段N末端的 10个氨基酸序列为 :I E G P T I R Q I E。在数据库中未发现同源性片段。氨基酸分析表明该酶至少由 18种氨基酸 ,约 2 5 3个氨基酸残基组成。结论 :人红细胞P5′N Ⅰ可能为一种多亚基组成的变构酶 ,生理状态下可能存在同源二聚体或四聚体。所测氨基酸序列可作为筛选目的基因的探针。所测氨基酸组成为确定其蛋白一级结构提供了重要依据。

红细胞嘧啶5′核苷酸酶的纯化及其抗血清的制备

利用UMP ADH Sepharose4B亲和层析的方法纯化正常人红细胞嘧啶 5′ 核苷酸酶 (P5′N ,EC 3 1 3 5) .结果表明 :利用UMP ADH Sepharose4B亲和层析柱可有效、专一性吸附P5′N ,纯化液经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条蛋白质带 ,测定纯化物相对分子质量 2 8× 10 3 ,等电点 ( pI) 5 2 .纯化物免疫家兔后 ,得兔抗人P5′N抗血清 。

红细胞嘧啶5′-核苷酸酶缺乏致溶血性贫血1例报道并文献复习

红细胞嘧啶5′-核苷酸酶缺乏症(pyrimidine 5′-nucleotide deficiency,P5′ND)是一种罕见的遗传性酶缺陷疾病,目前报道较少。文中病例反复出现溶血性贫血、黄疸、脾脏肿大,经完善红细胞酶学试验最终诊断为P5′ND。笔者结合相关文献复习认为,对于慢性非球形溶血性贫血患者,需警惕此类红细胞酶缺陷相关疾病,有条件者可尽量完善二代基因测序筛选致病基因,更好地指导临床实践。现特将其诊疗过程初步整理、总结并报道如下,以期为罕见病的诊治思路提供一定参考价值。

遗传性红细胞嘧啶5’核苷酸酶变异型——P5′N广州型的鉴定

红细胞嘧啶5'核苷酸酶(P5'N)遗传性缺乏是导致溶血性贫血的重要原因之一。在报道我国首例病例的基础上,对P5'N变异型进行了鉴定。结果显示该P5'N变异型具有如下特征:酶活性降低,同类底物利用率改变,热稳定性降低,KmUMP增高,pH曲线改变及最适pH移至碱性。与已报告的P5'N变异型比较,该变异型为一新的变异型,命名为P5'N广州型(P5'N GuangZhou)。

红细胞嘧啶5’-核苷酸酶缺乏症9例并文献复习

目的:探讨红细胞嘧啶5’-核苷酸酶(P5’N)缺乏症患者的临床特征、实验室检查特点、治疗方法。方法:回顾性分析9例P5’N缺乏症患者的临床资料和实验室检查特点并复习相关文献。结果:9例患者均有不同程度贫血,其他症状包括:脾大7例,黄疸6例,胆石症2例,肝大1例。2例患者并发β-地中海贫血,1例并发丙酮酸激酶(PK)缺乏。4例可分析病例中2例患者的母亲同时存在P5’N缺乏。4例患者需要输血治疗。结论:遗传性P5’N缺乏症特点是红细胞P5’N活性下降,外周血可见嗜碱性点彩红细胞。获得性P5’N缺乏症可见于β-地中海贫血等疾病。

遗传性嘧啶5′-核苷酸酶缺乏症研究进展

遗传性嘧啶5′-核苷酸酶（P5′N）缺乏症是由于P5′N-1基因突变导致的一种少见的遗传性非球形红细胞溶血性贫血。P5′N-1基因位于染色体7p15-p14，已在32个家系中发现了20种P5′N-1基因突变。本病临床表现以轻度至中度贫血为主，目前尚无有效的治疗方法。本文就该病近年来的研究进展作一综述。

急性白血病红细胞P5'N电泳特性检测及其临床意义

目的检测急性白血病患者红细胞嘧啶5’-核苷酸酶（P5’NEC3，1，3，5）电泳泳动速度，并结合酶活力测定探讨其临床意义。方法采用Western-印迹法检测35例急性白血病患者P5’N电泳泳动速度并测定其活力。结果急性白血病初发及复发患者P5’N活力降低，而缓解患者P5’N活力正常，两者P5’N电泳泳动速度均没有变化，结论急性白血病获得性P5’N缺乏主要原因与P5’N活性受到抑制或P5’N含量下降有关。

Induction of nucleoside phosphorylase in Enterobacter aerogenes and enzymatic synthesis of adenine arabinoside

Nucleoside phosphorylases (NPases) were found to be induced in Enterobacter aerogenes DGO-04, and cytidine and cytidine 5′-monophosphate (CMP) were the best inducers. Five mmol/L to fifteen mmol/L cytidine or CMP could distinctly increase the activities of purine nucleoside phosphorylase (PNPase), uridine phosphorylase (UPase) and thymidine phosphorylase (TPase) when they were added into medium from 0 to 8 h. In the process of enzymatic synthesis of adenine arabinoside from adenine and uracil arabinoside with wet cells of Enterobacter aerogenes DGO-04 induced by cytidine or CMP, the reaction time could be shortened from 36 to 6 h. After enzymatic reaction the activity of NPase in the cells induced remained higher than that in the cells uninduced.