从噬菌体随机十二肽库中筛选NF-κB(p65)亲和肽的研究

目的:采用噬菌体展示技术筛选核转录因子-κB(nuc lear factor-κB,NF-κB)亚基p65亲和肽。方法:以p65亚基为靶分子,利用噬菌体随机十二肽库进行亲和筛选,用ELISA法进行阳性克隆结合特异性验证。结果:经过3轮亲和筛选后,随机挑选15个噬菌体克隆,对其亲和力做ELISA试验,其中6个克隆显示较强的阳性结果。将上述6个阳性克隆DNA测序,序列均为CGTCAGCCTCGGCGAATAAGTATCCGAAGGAGTAAA,相应的氨基酸序列为FTPSDTYSPRLT。竞争性ELISA的结果显示,抑制率随p65亚基浓度的增大而升高。结论:从噬菌体随机肽库中筛选到能与NF-κB p65亚基特异性结合的克隆,并确定了其核心序列。

抗hTNF-α中和抗体识别表位的筛选和鉴定

目的:对噬菌体随机线性7肽库进行筛选,得到能与抗hTNF -α中和抗体特异性结合的表位肽. 方法: 以抗hT NF- α中和抗体为靶,筛选噬菌体线性7肽库,双夹心ELISA,竞争抑制ELISA及MAP点杂交鉴定阳性噬菌体克隆. 结果:经3轮筛选后随机挑取50个噬菌体克隆,经ELISA检测其中15个克隆显示与抗hTNF- α抗体有较强的结合能力,DNA测序结果得到的结构相似群为:WTFKMQP, WPFKMSP, WPYK MIP和WNYKMLP, 竞争性ELISA结果显示四个序列均能与TNF竞争性结合抗hTNF -αmAb,MAP点杂交结果显示筛选得到的多肽是能与抗hTNF -α抗体特异性结合的多肽. 结论:列具有很高的同源性,并能与抗hTNF -α中和抗体特异性结合,为hTNF -α相关多肽疫苗的研究提供依据.