噬菌体呈现抗体库的构建及抗Fas-Fab抗体的研究

目的构建噬菌体抗体库,获得具有功能的抗FasFab噬菌体抗体。方法以Fas重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠。取其脾细胞提取mRNA采用RTPCR方法扩增抗体基因,构建重链和κ链基因库,用重组Fas抗原对所构建的抗体库进行4轮筛选,并以ELISA法鉴定其功能。结果获得抗体重链Fd基因和κ链基因长度约700bp。构建的重链Fd基因为3.5×106的抗体重链基因库。构建的重链和κ链基因库的容量均为3.1×106。经VCSM13感染得到噬菌体的滴度为8.9×1016cFu/L的噬菌体抗体库,含有抗体重链和κ链基因的噬菌体占27%。用重组人Fas抗原进行4轮筛选,得到100%的富集,说明Fas重组抗原富集了抗FasFab噬菌体抗体,经ELISA检测均有抗Fas抗体的特异性。结论制备的可溶性抗FasFab抗体具有抗Fas抗体的特异性,为进一步的研究奠定了基础。

噬菌体抗体库技术应用研究进展

噬菌体抗体库技术是近几年发展的一项分子生物学技术,是迄今发展最成熟、应用最广泛的制备抗体的技术。它是一种将PCR技术和噬菌体展示技术相结合,并在噬菌体表面表达、分泌,经过筛选后获得特异性抗体的技术。就噬菌体抗体库技术的原理、构建、筛选及其应用研究进展进行综述。

噬菌体抗体库技术:靠近理想的现实

噬菌体抗体库技术是近年来在基因工程抗体研究领域中发展起来的一项新技术 ,该技术把特异性结合和高效筛选有机结合 ,大大缩减了获得目的性抗体的工作量。本文综述了噬菌体抗体库的构建 ,种类 ,筛选方法及最新进展。

噬菌体抗体库技术在农兽药快速检测技术中的进展

综述了噬菌体抗体库技术及其在农兽药快速检测技术中应用的最新进展,指出以噬菌体抗体库技术为代表的基因工程技术在农兽药残留快速检测方面有很好的前景。

噬菌体呈现技术制备结肠癌抗独特型抗体

以纯化的鼠抗人结肠癌细胞单克隆抗体 (简称单抗 )MC5与钥孔血蓝素 (KLH)的交联物经腹腔免疫Balb c小鼠 ,取脾分离mRNA .RT PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因片段 (VH 和VLcD NA ,大小分别约为 340bp和 32 0bp) ,二者经linkerDNA连接形成ScFv(singlechainvariablefragment)DNA(约 75 0bp) .将ScFvDNA与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7感染后 ,获得重组噬菌体抗体ScFv文库 .以单抗MC5对ScFv文库进行 4轮亲和筛选后 ,随机挑取 80个克隆经酶联免疫吸附实验 (ELISA)筛选出 2 2个呈现ScFv形式抗独特型抗体(抗 IdScFv)的噬菌体单克隆 .竞争抑制实验表明 ,在 2 2个阳性克隆中有 4个克隆所呈现的抗 IdScFv属β或γ型 .针对单抗MC5的噬菌体呈现型抗 IdScFv的制备 ,为筛选新的结肠癌重组抗

噬菌体抗体库筛选技术

噬菌体展示技术（PhageDisplayTechnology）为制备高亲和性抗体提供了有力的工具。噬菌体抗体库的筛选是其中关键的环节，为了提高筛选效率，用包被在固体表面的抗原进行筛选的传统方法不断地被改进，如宿主菌直接洗脱和双层膜筛选系统。针对细胞表面抗原等抗原难以纯化因而传统方法不适用的情况，又出现了直接细胞筛选系统和抗抗体替代抗原筛选系统。将噬菌体感染宿主菌的过程与筛选过程相关联，产生了选择性感染筛选系统。

人源性大肠癌自然致敏噬菌体抗体Fab呈现库的构建与筛选

目的 构建大肠癌病人自然致敏淋巴结抗体Fab段噬菌体呈现库，初步筛选相关抗大肠癌抗体。方法 取大肠癌病人转移淋巴结，提取淋巴结总RNA，逆转录PCR扩增重链Fd和κ轻链cDNA。依次将PCR产物插入载体pComb3的相应部位，构建人源性大肠癌噬菌体Fab基因库，并应用噬菌体表面呈现技术对该抗体库进行淘选及鉴定。结果 所选2种Ig亚类的重链Fd片段、2种κ轻链cDNA得到扩增。Fd片段和κ轻链均插入pComb3的重组率为40％，Fab噬菌体表达库容达1.48×10^6。经3轮淘选，抗体库得到约120倍的富集。3轮抗体库的点印记免疫染色均显示有Fab表达：酶联免疫吸附实验显示其与大肠癌抗原有结合活性。结论 成功构建了大肠癌病人自然致敏淋巴结抗体Fab段噬菌体呈现库，利用噬菌体抗体库技术，可筛选相关抗大肠癌抗体。

噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。

人源性大肠癌自然致敏噬菌体抗体Fab呈现库的构建与筛选

目的 构建大肠癌病人自然致敏淋巴结抗体Ｆab段噬菌体呈现库，初步筛选相关抗大肠癌抗体。方法取大肠癌病 人转移淋巴结，提取淋巴结总ＲＮＡ，逆转录ＰＣＲ扩增重链Ｆｄ和Ｋ轻链ｃＤＮＡ。依次将ＰＣＲ产物插入载体pＣomb３的 相应部位，构建人源性大肠癌噬菌体Ｆab基因库，并应用噬菌体表面呈现技术对该抗体库进行淘选及鉴定。结果所选 ２种Ig亚类的重链 Ｆd片段、２种κ轻链cＤＮＡ得到扩增。 Ｆd片段和κ轻链均插入pＣomb３的重组率为４０％，Ｆab噬菌 体表达库容达１．４８×１０６。经３轮淘选，抗体库得到约１２０倍的富集。３轮抗体库的点印记免疫染色均显示有Ｆab表达；酶 联免疫吸附实验显示其与大肠癌抗原有结合活性。结论成功构建了大肠癌病人自然致敏淋巴结抗体Ｆab段噬菌体呈 现库，利用噬菌体抗体库技术，可筛选相关抗大肠癌抗体。

噬菌体抗体库技术及其应用研究进展

噬菌体呈现抗体库是近年发展的一项分子生物学新技术,它的建立是抗体技术领域中的一次革命性进展。它以其独特的构建和筛选系统,彻底改变了抗体制备的传统途径,使抗体工程技术进入了一个新的发展阶段,并对生物学领域中许多技术的发展起到了巨大的推动作用。该技术是迄今发展最成熟、应用最广泛的制备抗体技术。我们简要综述此项技术的研究应用进展。

噬菌体抗体库技术研究进展

噬菌体展示技术（PDT）在模拟表位的筛选、筛选特定靶分子的配体、蛋白与蛋白间相互作用、细胞信号转导等基础研究，疾病的治疗和致病机理研究以及疫苗的制备、基因工程抗体的研发等领域均有广泛应用。噬菌体抗体库技术是通过PCR将全套人抗体重链和轻链V区基因克隆出来，并在噬菌体表面表达、分泌，经过筛选后获得特异性抗体的技术。该技术融合了丝状噬菌体展示与抗体组合文库技术，得到的抗体称为噬菌体抗体。

噬菌体抗体库技术研究进展

噬菌体抗体库技术是近 10年来发展起来的一项新技术 ,它的建立是抗体技术领域中的一个革命性进展 ,使得单克隆抗体的制备得到根本改观。该技术在分子生物学领域和免疫学领域中的应用均有诱人的广阔前景。

ScFv噬菌体抗体库技术研究进展及其在寄生虫学上的应用

随着蛋白组学时代的到来,对目的抗体的需求量的增加,噬菌体抗体库技术获得抗体的优越性得到充分发挥。该文主要介绍噬菌体抗体库技术的重要一种ScFv(单链抗体)噬菌体抗体库技术。从理想ScFv噬菌体抗体库的构建、可溶性表达、液体和固体筛选的优缺点及其在寄生虫学的应用等几个方面对此技术的研究进展作一综述。

蛋白质组学时代的噬菌体抗体库技术

抗体是蛋白质组学研究的核心工具 ,噬菌体抗体库技术是一种高效的抗体生产技术 ,蛋白质组学研究对该技术提出了新的要求 。

基因工程抗体中噬菌体抗体库技术的应用

通过基因工程可以大规模地制备能与人相容的单克隆抗体或片段。其中 ,噬菌体抗体库技术可以模拟体内抗体产生和成熟过程 ,不经细胞杂交 ,甚至不经免疫制备针对任何抗原的单克隆抗体。

噬菌体抗体库技术研究进展

噬菌体抗体库技术是利用PCR扩增出抗体的全套可变区基因,将抗体分子DNA片断如Fab或单链抗体(ScFv)与噬菌体外壳蛋白基因PⅢ或PVⅢ连接,使融合蛋白表达于噬菌体颗粒的表面,经过“吸附-洗脱-扩增”过程富集筛选特异性抗体。这一技术将抗体基因型和表型联系在一起,使识别抗原的能力和噬菌体的可扩增性统一起来,较好的模拟了体内的抗体产生的过程,成为一种高效的筛选体系。本文就噬菌体抗体库技术的原理、构建、筛选及其应用研究进展做一综述。

噬菌体抗体库技术及其研究策略

噬菌体抗体库技术是近年发展起来的将抗体基因与噬菌体外壳蛋白基因在其表面进行融合表达的技术。可用来构建噬菌体抗体库 ,并可从中制备各种基因工程抗体 ,为抗体的进一步开发应用提供了具有良好前景的新方法。