噬菌体呈现肽库技术的应用

噬菌体呈现肽库是噬菌体显示技术的一个非常重要的分支。自问世以来,随着分子生物学技术的飞速发展,它已被广泛应用于免疫学、分子生物学、药理学、疫苗学等生命科学领域。简要概述了这一技术的应用。

利用噬菌体随机肽库筛选IL-5结合的相关多肽

目的 :采用噬菌体随机肽库筛选人IL 5 ,以获得能高亲和力结合IL 5的相关多肽。方法 :以重组人IL 5作为筛选分子 ,应用M13噬菌体PIII呈现随机 7肽库进行筛选。经过三轮淘筛后 ,经夹心ELISA、竞争ELISA法进一步鉴定噬菌体克隆与IL 5的亲和力 ,对阳性克隆进行了扩增和DNA测序 ,据此推导结合随机多肽的氨基酸序列。结果 :经鉴定得到 9个阳性噬菌体克隆能与IL 5呈高亲和力结合。通过测序和序列比较分析 ,发现CX1 2 AS为相对保守的结合表位。结论 :研究表明通过噬菌体肽库能够筛选到IL 5结合的相关多肽 ,为进一步研究IL

从噬菌体随机肽库中筛选流感病毒神经氨酸酶的抑制多肽

目的:从噬菌体呈现12肽库中筛选与流感病毒神经氨酸酶特异性结合的肽。方法:以甲三型流感病毒裂解疫苗原液为靶分子,经过3轮生物淘选,从噬菌体随机肽库中筛选与之结合的噬菌体。用ELISA方法鉴定噬菌体克隆与靶分子的结合力,用荧光方法测定噬菌体克隆对流感病毒A/Sydney/5/97(H3N2)神经氨酸酶的抑制活性。对筛选到的阳性克隆进行DNA序列测定并推导出相应的氨基酸序列。结果:经过3轮筛选后,42个噬菌体克隆与靶分子有高度亲和力,23个噬菌体克隆对流感病毒A/Sydney/5/97(H3N2)神经氨酸酶有抑制活性。对27个噬菌体克隆的测序结果表明,分别有10个和2个克隆的序列是一致的,其氨基酸序列分别为KSLSRHDHIHHH和WPRHHHSASVQT。结论:通过噬菌体肽库筛选到抑制流感病毒神经氨酸酶的12肽,为进一步研究对流感病毒神经氨酸酶有抑制活性的分子药物奠定了基础。

胃癌肝高转移细胞结合肽的特异性鉴定

目的 鉴定选择性噬菌体阳性克隆是否可与胃癌肝高转移细胞—XGC9811 -L特异性结合。方法 利用竞争结合试验检测噬菌体阳性克隆与XGC9811-L细胞的结合效率。竞争抑制实验确定阳性噬菌体与靶细胞的结合性是否通过外源呈现肽发挥作用。细胞结合ELI-lSA实验和免疫荧光技术鉴定phage20与靶细胞XGC9811-L结合的特异性。结果 在8个阳性克隆中,phage20与XGC9811 -L细胞的结合效率最高,达100%,是原噬菌体肽库的50倍,随着外源呈现肽浓度的增加,phage20与靶细胞的结合力随之减弱。phage20可与XGC9811 -L特异结合,并可内化入细胞。结论 在8个噬菌体阳性克隆中,phage20与XGC9811-L细胞具有高度结合力,并呈现出明显的细胞特异性。

胃癌血管靶向肽GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的机制研究

背景:为提高胃癌血管抑制治疗的选择性,本课题前期研究应用噬菌体呈现肽库技术筛选获得了人胃癌血管靶向性环七肽GX1,并发现GX1能抑制人胃癌血管内皮细胞增殖,诱导细胞凋亡。目的:探讨GX1抑制人胃癌血管内皮细胞增殖的相关机制。方法:分别以40μmol/L GX1和40μmol/L对照肽Pep2处理正常人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和与人胃腺癌细胞株SGC7901体外共培养、产生肿瘤血管内皮相关特征的co-HUVEC。流式细胞术检测细胞周期分布,基因芯片检测筛选GX1组与对照肽Pep2组co-HUVEC差异表达基因并行GO分类,蛋白质印迹法检测凋亡相关基因蛋白表达。结果:与对照肽Pep2相比,GX1对co-HUVEC和正常HUVEC的细胞周期分布均无明显影响(P>0.05)。两组co-HUVEC共存在三百余个显著差异表达基因,其中与肿瘤生长、侵袭、转移相关者一百余个,功能主要涉及信号转导、凋亡、应激、细胞黏附、细胞代谢等。GX1组co-HUVEC的Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达明显上调,Bcl-2蛋白表达明显下调,Caspase-8蛋白表达无明显变化。结论:GX1可能通过下调Bcl-2/Bax比值,经线粒体途径诱导靶细胞凋亡,实现对人胃癌血管内皮细胞增殖的抑制作用。

利用噬菌体随机肽库筛选抗呼吸道合胞病毒多肽的实验研究

目的 采用完整的呼吸道合胞病毒 (respiratorysyncytialvirus ,RSV)颗粒筛选噬菌体肽库 ,以获得能高亲和力结合并能抑制该病毒复制的特异性多肽。方法 Hep 2细胞培养RSV ,采用蔗糖密度梯度 (30 %、4 5 %、6 0 % )和超滤离心纯化病毒。病毒用生物素标记后 ,应用M13噬菌体PⅢ呈现随机 7肽库进行筛选。经过 3轮淘筛后 ,ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与RSV的亲和力 ,通过TCID50检测其抗病毒复制能力。选取与RSV具有高亲和力的阳性克隆进行DNA测序 ,据此推导多肽的氨基酸序列。结果 经鉴定得到 13个阳性噬菌体克隆能与RSV呈高亲和力结合 ,其中 3个克隆体外能明显抑制RSV的复制 ,使TCID50 由 10 - 8.1 SFU ml分别降至 10 - 4.1 、10 - 4.3、10 - 3.8SFU ml。DNA测序发现各个克隆之间缺乏明显的同源序列 ,但普遍含有较多的脯氨酸。结论 通过噬菌体肽库能够筛选到抗病毒作用的阳性克隆 。

人67 LR噬菌体结合肽的筛选与功能分析

目的为了获得能够与人67ku层黏连蛋白受体(67 ku laminin receptor,67LR)特异性结合的噬菌体呈现肽。方法以重组人67LR蛋白为诱饵,分别对噬菌体12肽库和环7肽库进行亲和凝胶筛选,ELISA测定所筛选噬菌体克隆与靶蛋白的亲和力,经测序分析得到67LR特异性结合噬菌体克隆,并通过293细胞侵袭转移实验测定阳性噬菌体呈现肽对67LR促细胞侵袭作用的抑制效果。结果经4轮筛选共筛到2类新的67LR结合肽,分别具有DXCETCT(X可变)和YRPMXEY(X可变)一致序列。其中DX-CETCT噬菌体呈现肽可显著抑制67LR所诱导的细胞侵袭,且这种抑制作用与YIGSR5肽具有一定互补性。结论成功筛选到2类新的67LR结合肽,其中DXCETCT噬菌体呈现肽可针对性抑制67LR所诱导的细胞侵袭作用。