应用噬菌体肽文库筛选mAbF3特异性结合肽(英文)

目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与汉坦病毒囊膜蛋白中和性单抗 (mAb)F3特异性结合的配体肽。方法以F3mAb为筛选配基 ,对噬菌体展示的随机 12肽文库进行 3轮生物亲和淘选 ;用夹心ELISA和竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性 ,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过 3轮生物淘选 ,能被抗体捕获的噬菌体克隆为 2 1/ 2 2。ELISA测定显示 ,筛选到的噬菌体短肽能与F3mAb特异性结合。序列分析表明 ,7个阳性克隆氨基酸序列相同 ,均为 MHGPTKNQMWHT ;同源性分析显示 ,该序列与HTNV/SEOVM蛋白G2区第 75 0～ 75 9位氨基酸有较高的同源性。结论 本研究为基于表位水平的HFRSV特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要的依据分析。结果 通过 3轮生物淘选 ,能被抗体捕获的噬菌体克隆为 2 1/ 2 2。ELISA测定显示 ,筛选到的噬菌体短肽能与F3mAb特异性结合。序列分析表明 ,7个阳性克隆氨基酸序列相同 ,均为 MHGPTKNQMWHT ;同源性分析显示 ,该序列与HTNV/SEOVM蛋白G2区第 75 0～ 75 9位氨基酸有较高的同源性。

应用噬菌体肽文库筛选肾综合征出血热病毒优势B细胞结合表位肽

目的：应用噬菌体展示肽文库筛选鉴定肾综合征出血热病毒优势B细胞结合表位肽。方法：以Prote in-A纯化的肾综合征出血热患者恢复期血清为筛选配基,对经正常人血清预吸附的噬菌体展示随机12肽文库（或次级肽文库）进行生物亲和淘选;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定所获得克隆的结合特性,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果：ELISA测定显示,通过5轮淘选得到的噬菌体克隆半数以上可与筛选血清发生特异性结合;对45个阳性克隆进行序列测定分析,根据其推导的氨基酸序列可大致分为8组,同源性分析显示,Ⅰ-Ⅶ组序列基序可能为LVXKR、LTXR、IXKP、LXPA、VGA、KX IR、EKXP,其中4组基序在病毒结构蛋白氨基酸序列中发现同源区。结论：获得了一组肾综合征出血热病毒（HFRSV）优势B细胞表位肽,HFRSV核蛋白可能是诱导高水平抗体的主要免疫原,研究结果为基于表位的基因工程诊断试剂的研制和多肽疫苗的设计提供依据。

交替洗脱法筛选高亲和力噬菌体肽

以人胰岛素为靶蛋白从七肽展示库中筛选高亲和力噬菌体肽,在洗脱阶段采用酸性洗脱液和高浓度靶蛋白溶液进行4次交替洗脱,选择性回收高亲和力噬菌体肽。测定滴度计算回收率,ELISA法分别测定噬菌体洗脱液整体亲和力和噬菌体单克隆的结合特性并计算亲合率。洗脱步骤采用4次交替洗脱后,第二轮第4次噬菌体的回收率比第一轮增长了1 800倍,高亲和力噬菌体在洗脱液中所占比例也迅速提高,第二轮第4次洗脱液中达75％,在第三轮的各次洗脱液中几乎均达100％。建立了一种快速筛选高亲和力噬菌体肽的方法,改进后的筛选方法能使高亲和力噬菌体肽的筛选工作更为简便且效果显著。

汉坦病毒核衣壳蛋白mAb B11模拟结合肽的筛选和鉴定

目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与肾综合征出血热病毒mAbB11特异性结合的短肽。方法 采用Protein A亲和纯化的单抗为筛选配基 ,对噬菌体展示的随机 12肽文库进行生物亲和淘选 ;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性 ,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过 4轮淘选 ,ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽多数能与B11单抗特异性地结合 (12 15 ) ;序列分析表明 8个阳性克隆氨基酸序列分为 4组 ;同源性分析显示核心序列可能为 (M F)HR(H T)X(H W )或 (R F)HX(H T)P(W M) (L Y)。

Cε3-Cε4结合肽筛选及鉴定

为了获得免疫球蛋白E(IgE)特异性结合肽,采用固相筛选法,以Cε3-Cε4为靶蛋白,利用噬菌体随机多肽展示技术进行筛选,4轮筛选后,经ELISA鉴定获得19个阳性单克隆噬菌体,阳性率达38%,测序并翻译后共获得11个结合肽.竞争抑制性实验证明P7,P13,P20与Cε3-Cε4蛋白的结合能力较强,细胞水平分析表明:结合肽P7,P20可阻止IgE与其受体结合.本研究将为进一步探索IgE结合肽生物学功能奠定基础,并为设计治疗变态反应性疾病的小分子药物提供参考.

应用噬菌体肽文库筛选McAb F3特异性结合肽

目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与抗汉坦病毒囊膜蛋白单抗F3特异性结合的配体肽。方法 采用protein A亲和层析纯化的F3单抗为筛选配基 ,对噬菌体展示的随机 12肽文库进行生物亲和淘洗 ;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性 ,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过 3轮生物淘洗 ,能被抗体捕获的噬菌体克隆为 91.7% (11 12 ) ;ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽能与F3单抗特异性结合 ;序列分析表明 7个阳性克隆氨基酸序列相同 ,均为 MHGPTKNQMWHT ,同源性分析显示该序列与HTNV SEOVM蛋白G2区第 75 0～ 75 9位氨基酸有较高的同源性。结论 获得了具有良好结合活性的模拟表位肽 ,为基于表位水平的HFRSV(肾病综合征出血热病毒 )特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要依据。