噬菌体显示技术用于抗体表位的筛选

利用噬菌体随机肽库筛选抗ＴＮＦ单抗表位的研究中，就抗体的选择、肽库富集的检测、筛选得到的表位多肽的验证及如何提高筛选的成功率等，进行了一些初步探索．实验结果表明，由识别线性抗原位点的抗体较容易筛选到噬菌体呈现表位，具有较强中和活性的抗体，因多识别空间构型抗原位点而增加筛选难度．ＮＣ膜斑点印迹、ＥＬＩＳＡ及ＤＮＡ测序均可作为筛选富集的检测方法．用与天然抗原同源比较的方法及竞争性ＥＬＩＳＡ分析。

噬菌体显示技术及其应用

噬菌体显示（ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙｉｎｇ）技术的原理在于将外源性基因与噬菌体本身的壳蛋白ＩＩＩ基因５’端相连，随后利用外源性插入片段与壳蛋白基因表达的融合蛋白位于噬菌体表面的优点，使目的噬菌体的筛选、富集更为简便、有效。在此基础上发展起来的噬菌体抗体、噬菌体抗体库以及随机多肽库技术则为抗体的制备、配体的发现、药物的设计与筛选提供了有效的手段。

以噬菌体显示技术制造抗体的新方法

用噬菌体显示技术制造抗体是近年来创造的制备抗体的基因工程新技术。它模拟了体内Ｂ淋巴细胞的免疫选择和抗体亲和力的成熟过程，成功制备了高亲和力特异性人抗体。本文简介该技术建立的基础、基本程序和特点。

人源性Fab段噬菌体抗体库的构建及抗人β_1-AR抗体克隆的筛选

目的:构建人源性Fab段噬菌体抗体库并筛选抗人β1 - AR抗体克隆。方法:通过RT -PCR从抗人β1 - AR抗体阳性的扩张性心肌病(DCM)患者的外周血淋巴细胞中扩增出人IgG重链Fd段和κ、λ两轻链基因片段,将其克隆入噬粒pComb3中,构建人源性Fab段噬菌体抗体库,并利用噬菌体表面显示技术,以人β1 肾上腺素受体细胞外第二环2 6肽(β1 - ARECⅡ)为抗原肽,对此抗体库进行淘筛富集。结果:成功地构建了库容量为1 4×10 6 的人源性Fab段噬菌体抗体库,从此抗体库中筛选到了特异性抗人β1 -ARFab段噬菌体抗体阳性克隆。结论:利用噬菌体抗体库技术可以获得表达抗人β1 -AR抗体的重组克隆。

构建轻链次级库提高人抗TNF-α抗体的亲和力

目的使用构建轻链次级库的方法,对已经获得的人源抗TNFα单抗mAb的Fab进行轻链置换,并筛选具有更高亲和力的人源抗TNFαmAb的Fab。方法首先,采用RTPCR扩增正常人全套抗体轻链基因,并与已获得的人源抗TNFαmAb的重链基因配对,构建人源抗TNFα噬菌体抗体的轻链次级库。然后筛选与TNFα具有更高亲和力的克隆。结果经过3轮的生物淘筛biopanning,获得了较原来的人源抗TNFαmAbFab具有更高亲和力的人源抗体Fab。结论轻链次级库筛选法,能有效地提高抗体的亲和力,为解决噬菌体抗体库法制备的人源抗体亲和力较低这一难题,提供了一种有效的方法。