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量子点荧光标记在重组噬菌体表面展示肽与胰岛素受体相互作用中的应用 被引量:9
1
作者 李鸿梅 刘含智 +4 位作者 张皓 朱贵宾 王丽萍 杨柏 李惟 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第5期982-984,共3页
Luminescent quantum dots(QDs) are a promising alternative to organic dyes for fluorescence-based applications. Filamentous phage was labeled with QDs and its infective capability is observed after labeling. The experi... Luminescent quantum dots(QDs) are a promising alternative to organic dyes for fluorescence-based applications. Filamentous phage was labeled with QDs and its infective capability is observed after labeling. The experimental result shows that the labeling phage can still infect E.coli K91 normally. We have also developed the procedures for using QDs to label CHO-IR cells and Mouse Kidney tissue slice. The tissue slice remained stably labeled for over 10 d and the cells remained stably labeled even for over 5 months. 展开更多
关键词 量子点荧光标记 重组噬菌体表面展示肽 胰岛素受体 相互作用 生物荧光标记 光谱学
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噬菌体表面呈现抗人红细胞血型A抗原单链抗体的研究 被引量:4
2
作者 王长军 唐家琪 +2 位作者 李先富 潘秀珍 操敏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期244-247,共4页
构建表达抗人红细胞血型A抗原 5 0A杂交瘤细胞的单链抗体 (ScFv)。方法 :应用重组噬菌体抗体技术 ,从5 0A杂交瘤细胞中分离、构建单链抗体基因 ,并将其克隆入噬粒pCANTAB5E中 ,转化E .coliXL Blue,辅助噬菌体援救构建 5 0A噬菌体单链抗... 构建表达抗人红细胞血型A抗原 5 0A杂交瘤细胞的单链抗体 (ScFv)。方法 :应用重组噬菌体抗体技术 ,从5 0A杂交瘤细胞中分离、构建单链抗体基因 ,并将其克隆入噬粒pCANTAB5E中 ,转化E .coliXL Blue,辅助噬菌体援救构建 5 0A噬菌体单链抗体库 ;采用完整红细胞亲和富集法淘选阳性重组噬菌体 ,鉴定重组噬菌体并进行序列测定分析 ;免疫印迹试验检测重组单链抗体的特异性抗原活性。结果 :用M13KO7援救XL 1Blue转化菌中的pCANTAB5E重组噬菌体 ,得到滴度为 4×10 9pfu ml噬菌体单链抗体库 ;免疫印迹试验证实表达产物保留了亲本单抗对人红细胞血型A抗原的特异性亲和力。结论 :成功构建 5 0AMcAb单链噬菌体抗体库 ,为进一步研制高特异性、高亲和力的基因工程原核血型检定抗体试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体表面呈现技术 单链抗体 红细胞 ABO血型
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噬菌体表面展示技术筛选HCBP6人源单链可变区抗体 被引量:9
3
作者 钟彦伟 成军 +7 位作者 张忠东 孙敏 李强 李克 王琳 李莉 张玲霞 陈菊梅 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期389-393,共5页
目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)的特异性人源化单链可变区抗体(scFv)。方法:采用噬菌体表面展示技术,将生物合成的应用酵母双杂交技术筛选得到的HCV核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)16肽固相包被于Nunc板... 目的:制备丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)的特异性人源化单链可变区抗体(scFv)。方法:采用噬菌体表面展示技术,将生物合成的应用酵母双杂交技术筛选得到的HCV核心蛋白的肝细胞结合蛋白6(HCBP6)16肽固相包被于Nunc板,从噬菌体单链可变区抗体库中经过5轮“黏附-洗脱-扩增”筛选过程,随机挑选出48个克隆,利用酶联免疫黏附法(ELISA)、交叉反应和竞争抑制实验,对其进行免疫学检测,获得与HCBP6结合活性较强的单链可变区抗体片段的阳性克隆,并对HCBP6特异性scFv的编码序列进行序列测定分析。结果:对噬菌体单链可变区抗体库经过5轮“黏附-洗脱-扩增”的筛选后,结合到包被平皿的噬菌体与第一轮相比,富集了162倍。用酶联免疫黏附法测定第5轮筛选后上清液中含有的噬菌体抗体与HCBP6结合活性。其中有30株克隆ELISA的吸光度(A450 nm)值较高(P8 nm 0.77,P240.714,P26 0.728,P29 0.723,P38 0.803,P39 0.762,P43 0.747等)。对这些噬菌体抗体进行与牛血清白蛋白(BSA)的交叉反应后,确定其中有7株交叉反应较弱(P80.145,P24 0.119,P26 0.17,P29 0.186,P38 0.118,P39 0.138,P43 0.178),结合2次ELISA重复实验的/4值及竞争抑制实验结果,最后确定1株(P24)阳性克隆。提取质粒,SfiI/NotI双酶切后,将片段亚克隆到pCANTABSE载体,进行DNA序列测定,DNA大小为771 bp,符合人源化单链可变区抗体典型的骨架区(FR)及互补决定区(CDR)的序列结构。结论:用噬菌体抗体库技术能够成功地获得HCBP6的scFv。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 肝细胞结合蛋白6 特异性人源化单链可变区抗体 噬菌体表面展示技术 酵母双杂交技术
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噬菌体表面展示人干扰素-α 2b 被引量:3
4
作者 吴晓兰 潘卫 +4 位作者 马仲才 陈秋莉 武文斌 曹明媚 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期403-406,共4页
目的:建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法:利用噬菌体表面展示(phage display)技术表达人于扰素-α2b(hIFN-αa2b)基因。结果:生物活性测定表明,3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a... 目的:建立一种研究人干扰素-α结构与功能的新平台。方法:利用噬菌体表面展示(phage display)技术表达人于扰素-α2b(hIFN-αa2b)基因。结果:生物活性测定表明,3×108TU重组噬菌体干扰素的抗病毒活性与SIU基因工程IFN-α2a的活性相当,并能被 IFN-α单抗中和。结论:hlFN-α 2b在噬菌体表面能正确折叠和功能性表达,即成功地建立了噬菌体展示外源肽(hIFN-α)的技术平台。 展开更多
关键词 人干扰素-α 抗病毒活性 噬菌体表面展示
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T4噬菌体表面展示技术的研究进展 被引量:5
5
作者 吴健敏 涂长春 任兆钧 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期385-388,共4页
关键词 丝状噬菌体 噬菌体表面展示技术 噬菌体展示 研究进展 表达 融合蛋白 多肽 空间构象 生物技术 生物活性
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噬菌体表面呈现技术及在抗寄生虫免疫中的应用 被引量:4
6
作者 俞慕华 陈代雄 +1 位作者 梁瑜 詹希美 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期844-846,共3页
关键词 噬菌体表面呈现技术 抗寄生虫免疫 抗体文库
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噬菌体表面展示技术筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白 被引量:3
7
作者 陈京龙 魏红山 +1 位作者 刘霞 张黎颖 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第36期3509-3512,共4页
目的:通过筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白,为隐源性肝炎的发病机制研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,将隐源性肝炎患者血清作为固相筛选蛋白,用噬菌体正常人肝细胞T7cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA... 目的:通过筛选隐源性肝炎血清蛋白结合蛋白,为隐源性肝炎的发病机制研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,将隐源性肝炎患者血清作为固相筛选蛋白,用噬菌体正常人肝细胞T7cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA序列分析,将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自GenBank中获得结合蛋白的cDNA和基因组的全长序列,然后再探讨该蛋白在隐源性肝炎发病机制中的作用.结果:噬菌体经过5轮生物富集后,从随机筛选的60个克隆中得到24个阳性克隆,经序列测定后进行同源搜索,初步确定人类HCVNS5A转化调节蛋白13(NS5ATP13)为人体肝脏中固有的与隐源性肝炎血清蛋白结合的蛋白.结论:应用T7cDNA噬菌体表面展示技术,我们发现隐源性肝炎血清蛋白与人类肝细胞HCVNS5A转化调节蛋白13相互作用,在隐源性肝炎发生及抗病毒治疗有重要意义. 展开更多
关键词 隐源性肝炎 血清蛋白 结合蛋白 丙型肝炎病毒 噬菌体表面展示技术
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新型噬菌体表面呈现载体的构建 被引量:4
8
作者 刘志刚 俞炜源 林建波 《生物技术通讯》 CAS 2002年第1期11-13,共3页
作为抗体库筛选的一个有效方法,噬菌体表面呈现技术在单链抗体的研制中得到广泛的应用。以噬菌粒pCANTAB5E和pHB为基础,利用PCR和DNA重组方法,构建了一个新型的用于单链抗体噬菌体表面呈现的噬菌粒载体。随后用一株对大肠杆菌细胞有毒... 作为抗体库筛选的一个有效方法,噬菌体表面呈现技术在单链抗体的研制中得到广泛的应用。以噬菌粒pCANTAB5E和pHB为基础,利用PCR和DNA重组方法,构建了一个新型的用于单链抗体噬菌体表面呈现的噬菌粒载体。随后用一株对大肠杆菌细胞有毒性的人源化单链抗体(1HSCFV)对其呈现单链抗体的效果进行了初步的评价,结果表明新型噬菌粒系统具有更好的呈现能力。 展开更多
关键词 单链抗体 噬菌粒 噬菌体表面呈现 载体
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噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽 被引量:1
9
作者 苏林 孔燕 +2 位作者 刘长征 杨克恭 陈松森 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期351-356,共6页
目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,... 目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。 展开更多
关键词 噬菌体表面展示文库 人干细胞因子 模拟肽 筛选 酶联免疫吸附测定法
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噬菌体表面呈现技术在疫苗研制方面的应用 被引量:2
10
作者 万一 张英起 《药物生物技术》 CAS CSCD 2003年第6期390-393,共4页
噬菌体表面呈现技术已被广泛地应用于生物技术的许多领域。文章从用噬菌体表面呈现技术鉴别抗原或抗原表位和用噬菌体作为疫苗载体两个方面对噬菌体表面呈现技术在新型疫苗研制方面的应用进行了综述。
关键词 噬菌体表面呈现 疫苗 疫苗载体 文库
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抗鳗弧菌独特型单克隆抗体dsFv的构建及其噬菌体表面呈现 被引量:1
11
作者 夏永娟 黄宝成 +1 位作者 温伟红 黄威权 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期719-724,共6页
抗鳗弧菌独特型单克隆抗体 1E10是能够模拟鳗弧菌的保护性表位 ,可以作为疫苗使用的一种单克隆抗体 .利用基因工程抗体技术从抗鳗弧菌独特型单克隆抗体杂交瘤细胞株 1E10中克隆出抗体的重链及轻链可变区基因 (VH 和VL) .通过定点突变技... 抗鳗弧菌独特型单克隆抗体 1E10是能够模拟鳗弧菌的保护性表位 ,可以作为疫苗使用的一种单克隆抗体 .利用基因工程抗体技术从抗鳗弧菌独特型单克隆抗体杂交瘤细胞株 1E10中克隆出抗体的重链及轻链可变区基因 (VH 和VL) .通过定点突变技术将VH4 4和VL10 5突变为半胱氨酸并且连接到噬菌体表达载体pCANTAB5E中 ,突变后的VH 和VL 基因位于cpⅢ先导序列和cpⅢ基因之间 ,在LacZ启动子调控之下 ,以融合蛋白的形式被导入细胞间隙 ,依靠链间二硫键组装成二硫键稳定型Fv抗体 (dsFv) .加入辅助噬菌体M13K0 7后 ,dsFv以融合蛋白的形式表达在噬菌体表面 .ELISA测定显示 :dsFv噬菌体能够与抗原结合并且这种结合呈噬菌体浓度依赖 .结果表明 :成功构建出了抗鳗弧菌独特型单克隆抗体dsFv基因并使其在噬菌体表面获得了正确呈现 . 展开更多
关键词 独特型 单克隆抗体 噬菌体表面呈现 体表 融合蛋白 轻链可变区 杂交瘤细胞株 鳗弧菌 疫苗使用 细胞间隙
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抗人卵巢癌单链抗体噬菌体表面呈现文库的构建、初步筛选及鉴定 被引量:1
12
作者 杜辉 王建 +1 位作者 辛晓燕 郑维国 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第6期536-539,共4页
目的 :构建抗人卵巢癌全套单链抗体基因噬菌体表面呈现文库 .方法 :利用噬菌体表面呈现技术 ,构建基因文库 ,经过panning筛选富集后 ,用ELISA方法检验抗原结合活性 .结果 :从单个噬菌体克隆中筛选到 2 6个具有抗原结合活性的阳性克隆 .结论
关键词 噬菌体表面呈现 单链抗体 卵巢肿瘤
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抗人胃癌全套单链抗体基因噬菌体表面呈现文库的构建、初步筛选及鉴定 被引量:4
13
作者 杨丽娟 苏成芝 《第四军医大学学报》 1998年第1期22-24,共3页
目的:构建抗人胃癌全套单链抗体基因噬菌体表面呈现文库.方法:利用噬菌体表面呈现技术,构建基因文库,经过panning筛选富集后,用ELISA方法检测抗原结合活性.结果:从94个单个噬菌体克隆中一次筛选到18个具有抗原... 目的:构建抗人胃癌全套单链抗体基因噬菌体表面呈现文库.方法:利用噬菌体表面呈现技术,构建基因文库,经过panning筛选富集后,用ELISA方法检测抗原结合活性.结果:从94个单个噬菌体克隆中一次筛选到18个具有抗原结合活性的阳性克隆.结论:我们所应用的方法为抗肿瘤基因工程抗体的制备提供了一条更为有效的新途径。 展开更多
关键词 噬菌体表面呈现 PCR抗体 基因文库 胃肿瘤
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噬菌体表面呈现技术研究进展 被引量:1
14
作者 冯东晓 李敏 李春海 《生物技术通讯》 CAS 1997年第1期32-36,共5页
噬菌体表面呈现技术是1985年建立的一种将外源基因表达呈现在噬菌体颗粒表面的方法,可用于建立随机多肽文库、抗体文库等。经特定配基的筛选,可获得与其特异结合的配体分子。通过改构,还可将cDNA产物表达于噬菌体颗粒的尾部构建cDNA文库... 噬菌体表面呈现技术是1985年建立的一种将外源基因表达呈现在噬菌体颗粒表面的方法,可用于建立随机多肽文库、抗体文库等。经特定配基的筛选,可获得与其特异结合的配体分子。通过改构,还可将cDNA产物表达于噬菌体颗粒的尾部构建cDNA文库。SIP技术通过将配体和配基分别与基因Ⅲ蛋白的C末端和N末端融合表达,基因Ⅲ的C-末端参与噬菌体颗粒的组装,配基与配体的结合能够重建基因Ⅲ蛋白的功能,才能形成有感染能力的噬菌体,这样就大大提高了筛选效率。 展开更多
关键词 噬菌体表面呈现文库 基因Ⅲ蛋白 选择性感染噬菌体技术
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从噬菌体表面展示肽库中筛选衣原体单克隆抗体识别的抗原表位 被引量:1
15
作者 张浩杰 端青 《微生物学免疫学进展》 2002年第2期29-31,共3页
利用抗体捕获法 ,经三轮淘洗 ,从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与衣原体单克隆抗体C17特异结合的噬菌体克隆 ,其一致序列为 :(L/I)PGGS(P/W ) ,竞争抑制实验表明含特异序列的克隆能与天然抗原竞争。据此 ,我们认为此序列为衣... 利用抗体捕获法 ,经三轮淘洗 ,从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与衣原体单克隆抗体C17特异结合的噬菌体克隆 ,其一致序列为 :(L/I)PGGS(P/W ) ,竞争抑制实验表明含特异序列的克隆能与天然抗原竞争。据此 ,我们认为此序列为衣原体的B细胞抗原表位。 展开更多
关键词 噬菌体表面展示 随机肽库 衣原体 B细胞抗原表位
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噬菌体表面呈现技术及其在寄生虫学中的应用前景 被引量:3
16
作者 谢敏辉 傅承彬 《国外医学(寄生虫病分册)》 1999年第2期52-56,共5页
噬菌体表面呈现(phage display)技术是将外源蛋白或多肽与噬菌体外壳蛋白融合并呈现于噬菌体表面。这种外源蛋白或多肽可以识别相应的结合分子而被筛选鉴定出来。本文以丝状噬菌体为例,综述其发展、应用、有关资料的因特网查询以及在寄... 噬菌体表面呈现(phage display)技术是将外源蛋白或多肽与噬菌体外壳蛋白融合并呈现于噬菌体表面。这种外源蛋白或多肽可以识别相应的结合分子而被筛选鉴定出来。本文以丝状噬菌体为例,综述其发展、应用、有关资料的因特网查询以及在寄生虫学研究领域应用的前景。 展开更多
关键词 噬菌体表面呈现 抗体文库 寄生虫学 因特网
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噬菌体表面展示技术进展 被引量:10
17
作者 王长军 《国外医学(免疫学分册)》 2001年第4期215-218,共4页
噬菌体表面展示技术 (PhageDisplayTechniques ,PDT)是近年发展起来的 ,将外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。可用来构建肽文库、抗体库 ,并从中筛选出有价值的活性肽或蛋白。随着该技术的不断发... 噬菌体表面展示技术 (PhageDisplayTechniques ,PDT)是近年发展起来的 ,将外源肽或蛋白基因与噬菌体表面特定蛋白基因在其表面进行融合表达的新技术。可用来构建肽文库、抗体库 ,并从中筛选出有价值的活性肽或蛋白。随着该技术的不断发展和完善 。 展开更多
关键词 免疫学技术 PCR 肽文库 抗体库 噬菌体表面
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噬菌体表面展示技术及其在靶向载体构建中的应用
18
作者 帅武平 高建青 +1 位作者 陈海靓 梁文权 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期246-249,共4页
目的介绍噬菌体表面展示技术及其在靶向载体构建中的应用。方法主要综述了近年来国内外的相关文献。结果采用噬菌体表面展示技术可以高通量筛选单链抗体等靶向分子,将其连接至携载药物或基因的非病毒及病毒载体可提高其靶向性及产生更... 目的介绍噬菌体表面展示技术及其在靶向载体构建中的应用。方法主要综述了近年来国内外的相关文献。结果采用噬菌体表面展示技术可以高通量筛选单链抗体等靶向分子,将其连接至携载药物或基因的非病毒及病毒载体可提高其靶向性及产生更好的治疗效果。结论噬菌体表面展示技术的发展和成熟将为构建具有高效、特异性的靶向载体提供条件。 展开更多
关键词 噬菌体表面展示 载体 靶向分子
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T4噬菌体表面展示技术的研究及应用
19
作者 蒋成砚 张以芳 +1 位作者 任兆均 郑锦铃 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期1011-1013,共3页
关键词 噬菌体表面展示技术 T4 细菌病毒 遗传结构 形态结构 类病毒 基因组 混合物 蛋白质
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瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅰ及其CBD的噬菌体表面展示系统的构建
20
作者 黄琰 张曦 +2 位作者 马安周 庄国强 曲音波 《生物加工过程》 CAS CSCD 2006年第1期21-26,共6页
为研究纤维素酶的酶活性和吸附特性之间的关系,将瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅰ(endoglucanaseⅠ,EGⅠ)和其吸附结构域(cellulose-binding domains,CBD)的基因经PCR扩增后,连接到载体pCANTAB5E上,构建成噬菌粒展示载体pCANTAB5E-egⅠ和pCANTAB... 为研究纤维素酶的酶活性和吸附特性之间的关系,将瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅰ(endoglucanaseⅠ,EGⅠ)和其吸附结构域(cellulose-binding domains,CBD)的基因经PCR扩增后,连接到载体pCANTAB5E上,构建成噬菌粒展示载体pCANTAB5E-egⅠ和pCANTAB5E-egⅠ-cbd。将这些噬菌体展示载体转化到大肠杆菌TGⅠ中,在辅助噬菌体M13KO7的帮助下得到重组噬菌体。用ELISA和Somogyi方法分别测定了EGⅠ及其CBD的表面展示噬菌体对纤维素的亲和性和EGⅠ的CMC活性,结果显示EGⅠ及其CBD已功能展示于噬菌体表面。该系统的成功构建为今后利用噬菌体展示的方法进行纤维素酶的酶分子改造提供了基础。 展开更多
关键词 噬菌体表面展示 瑞氏木霉内切葡聚糖酶 纤维素吸附结构域
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