噬菌体表面呈现技术在肿瘤中的应用

噬菌体表面呈现技术 (Phagedisplaytechnology)是近年来发展起来的新兴技术。目前将噬菌体表面呈现技术用于肿瘤 ,在肿瘤治疗方面取得了很大的进展 。

噬菌体表面呈现技术及其在肾脏病中的应用

噬菌体表面呈现 (phagedisplay)技术是将外源蛋白或多肽与噬菌体壳蛋白融合并呈现于噬菌体表面。这种外源蛋白或多肽可以识别相应的结合分子而被筛选鉴定出来。本文综述了噬菌体表面显现技术的建立 ,抗体文库。

噬菌体表面呈现抗人红细胞血型A抗原单链抗体的研究

构建表达抗人红细胞血型A抗原 5 0A杂交瘤细胞的单链抗体 (ScFv)。方法 :应用重组噬菌体抗体技术 ,从5 0A杂交瘤细胞中分离、构建单链抗体基因 ,并将其克隆入噬粒pCANTAB5E中 ,转化E .coliXL Blue,辅助噬菌体援救构建 5 0A噬菌体单链抗体库 ;采用完整红细胞亲和富集法淘选阳性重组噬菌体 ,鉴定重组噬菌体并进行序列测定分析 ;免疫印迹试验检测重组单链抗体的特异性抗原活性。结果 :用M13KO7援救XL 1Blue转化菌中的pCANTAB5E重组噬菌体 ,得到滴度为 4×10 9pfu ml噬菌体单链抗体库 ;免疫印迹试验证实表达产物保留了亲本单抗对人红细胞血型A抗原的特异性亲和力。结论 :成功构建 5 0AMcAb单链噬菌体抗体库 ,为进一步研制高特异性、高亲和力的基因工程原核血型检定抗体试剂奠定了基础。

从噬菌体随机肽库中初步筛选RCAS1的模拟表位

目的从噬菌体随机肽库中初步筛选表达于SiSo细胞系的受体结合癌抗原(receptorbindingcancerantigenexpressedonSiSocells,RCAS1)的模拟表位。方法用抗RCAS1单克隆抗体2211对噬菌体随机肽库进行多级亲和筛选,建立与2211具有亲和力的肽库,随机挑选阳性克隆,用双抗体夹心ELISA和斑点ELISA检测其特异性。结果经过3轮免疫筛选,阳性噬菌体克隆富集了100倍,在随机挑取的10个阳性克隆斑中,有7个克隆可与2211单克隆抗体特异性结合。结论这7个阳性克隆中可能包含了肿瘤相关抗原RCAS1的模拟表位。

定向进化人α型干扰素基因家族的研究

应用DNA改组(DNAshuffling)技术重组了12种人α型干扰素基因,并结合噬菌体表面呈现(phagedisplay)技术构建了噬菌体干扰素改组文库,采用简便的、功能性的定向竞争筛选方法,获得了比活达1 0×109IU/mg的新型α型基因工程复合干扰素,是目前国际上已投产的α2型干扰素的5倍,具有生产应用前景,上述策略也为其它细胞因子或酶的改造提供了借鉴方法。

抗甲状腺刺激性免疫球蛋白单链抗体基因的构建及序列测定

目的 构建抗甲状腺刺激性免疫球蛋白(Thyroid stimulating immunoglobulin,TSI)单链抗体基因,获得基因序列。方法 利用噬菌体表面呈现技术,结合间接ELISA方法和竞争抑制实验,筛选出抗TSI单链噬菌体抗体,进一步获得抗TSI单链抗体,对抗TSI单链抗体基因进行测序。结果 抗TSI单链抗体基因长759bp,其中VL长342bp,VH长372bp,具有开放性阅读框架,为功能性基因。结论 抗TSI单链抗体基因构建成功,噬菌体表面呈现技术为获得功能性单链抗体基因的可靠方法。

人源抗肝癌单链抗体库的构建及初步鉴定

目的构建人源抗肝癌单链抗体基因噬菌体表面呈现文库。方法利用噬菌体表面呈现技术,构建基因文库,经过panning筛选富集后,用ELISA方法检验抗原结合活性。结果从30个噬菌体克隆中筛选到8个具有肝癌细胞株SMMC7721结合活性的阳性克隆。结论从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗肝癌单链抗体的策略是可行的。