噬菌体表面展示肽库技术在病毒研究中的应用

噬菌体表面展示肽库技术是近年来发展起来的用丝状噬菌体展示外源肽的一项新技术,被广泛应用于分子识别的各个领域。本文就该技术在病毒受体、病毒抗原表位、病毒抗体以及病毒疫苗和病毒性疾病的诊断等方面的研究进展作一简要概述。

噬菌体展示肽库技术及其在农药残留免疫分析中的研究进展

噬菌体展示技术是一种特殊的基因工程重组表达技术,已经作为一种强大的工具运用在不同的研究中,包括筛选抗体和酶的配体、筛选小分子的受体、基因工程抗体等。免疫分析作为农药残留快速筛查技术被广泛研究,利用抗体从噬菌体展示肽库中淘选竞争物,可以加快异源免疫分析方法的建立;利用抗原抗体复合物从噬菌体展示肽库中淘选抗免疫复合体多肽,可建立非竞争免疫分析方法,丰富农药的免疫分析模式。本文从噬菌体展示技术的原理、噬菌体展示肽库的构建和噬菌体展示肽库的筛选方面概述了噬菌体展示肽库技术;从模拟表位筛选、抗免疫复合体筛选和新免疫分析方法方面阐述了噬菌体展示肽库技术在农药等小分子免疫分析中的应用;并对噬菌体展示肽库技术的研究和应用前景进行了展望。

噬菌体展示肽库技术应用的研究进展

噬菌体展示肽库技术是一种新的肿瘤筛选技术 ,它将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面 ,使高通量筛选多肽配体变得容易些。该技术在研究蛋白质之间的相互作用、寻找肿瘤特异性抗原和治疗性靶肽以及在新型诊断试剂和疫苗研制中都有重要用途。

噬菌体展示肽库技术及其在分子病原细菌学研究中的应用

从噬菌体展示技术的基本原理、肽库的构建、噬菌体肽库的分类、噬菌体肽库的筛选方法等方面,综述了噬菌体展示肽库技术;从抗原表位研究、免疫诊断研究、基因疫苗研究、抗菌药物的靶向投递等方面,阐述了噬菌体展示肽库技术在分子病原细菌学中的应用;并对今后的研究方向进行了展望。

噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽

目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。

噬菌体展示肽库技术及其应用研究现状

噬菌体展示技术是将随机多肽文库表达于丝状噬菌体的表面,筛选功能性多肽的一种生物技术。该技术在抗原表位定位、免疫学诊断、疫苗研制、药物筛选等方面具有重要用途。

从噬菌体表面展示肽库中筛选衣原体单克隆抗体识别的抗原表位

利用抗体捕获法 ,经三轮淘洗 ,从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与衣原体单克隆抗体C17特异结合的噬菌体克隆 ,其一致序列为 :(L/I)PGGS(P/W ) ,竞争抑制实验表明含特异序列的克隆能与天然抗原竞争。据此 ,我们认为此序列为衣原体的B细胞抗原表位。

噬菌体展示随机肽库技术的医学研究应用

噬菌体展示随机肽库是将编码外源性多肽的DNA序列插入噬菌体外壳蛋白基因,产生由数十亿种随机肽段与噬菌体外壳蛋白以融合形式呈现在噬菌体表面的重组噬菌体库。近年来,噬菌体展示随机肽库已成为筛选蛋白和多肽的重要生物技术,并被广泛应用于医学研究。笔者就其在肿瘤和自身免疫性疾病研究以及疫苗研制中的应用现状进行综述。

噬菌体展示肽库技术淘选蚕丝纤维蛋白连结短肽的实验研究

采用噬菌体随机肽库展示技术研究与蚕丝纤维蛋白连结的功能性短肽的淘选方法.实验结果显示,淘选的与蚕丝纤维蛋白连结的功能性短肽都包含有一个相同的氨基酸残基序列QSWS.噬菌体与蚕丝蛋白的连结试验和合成肽与蚕丝蛋白的连结试验都证实了QSWS序列与蚕丝蛋白连结的重要性.随着对淘选方法进一步改进和优化,这些功能性短肽将有助于对蚕丝进行功能化改造,可拓宽蚕丝在生物材料领域中的应用.

噬菌体表面展示技术筛选胰高血糖样肽1受体N端片段的Exendin-4亲和位点

[目的]通过噬菌体表面展示技术寻找胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)结合Exendin-4的关键位点。[方法]通过易错PCR建立一个鼠肺nGLP-1R(从第21个氨基酸到第145个氨基酸)的噬菌体随机突变展示肽库。根据筛选出的突变体分析突变后nGLP-1R与Exendin-4结合活性。[结果]nGLP-1R第30位、第46位和第92位氨基酸是其与Exendin-4结合的潜在位点。[结论]关键位点单个氨基酸残基的突变可以改变nGLP-1R蛋白质的生物学活性。

利用T7噬菌体展示技术构建人舌鳞癌细胞多肽文库

目的:本研究拟构建人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为进一步筛选和鉴定与舌鳞癌相关的蛋白或多肽打下基础。方法:人舌癌细胞株Tca8113,QiaGen法提取细胞mRNA,逆转录合成双链cDNA后与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到T7噬菌体展示多肽文库。结果:构建了人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,原始文库重组滴度为鳞癌1.7×106 pfu,扩增后滴度为3×1010 pfu/mL。随机从文库中抽取10个克隆PCR扩增插入片断,电泳结果显示构建的文库中均有插入片段,文库插入率高达100%。所构建的文库插入片断大小在(0.4～1.0)kbp之间。结论:成功构建了人舌癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为下一步筛选和鉴定与舌癌相关的蛋白或多肽奠定了基础。

噬菌体展示技术筛选卵巢癌细胞表面转移相关分子结合肽

目的:利用噬菌体7肽库筛选高转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910PM表面转移相关分子结合肽。方法:利用噬菌体展示技术体外快速差减筛选(biopanning and rapid analysis of selective interactive ligands,BRASIL)卵巢癌细胞株HO-8910和HO-8910PM,经过连续5轮生物淘洗,随机挑选14个噬菌体单克隆进行DNA测序,并进行ELISA、噬菌体竞争结合实验验证阳性噬菌体的亲和性。结果:噬菌体克隆Z3(短肽LRLRNTR)对高转移潜能卵巢癌细胞株HO-8910PM有较高的亲和性。结论:噬菌体展示技术筛选的短肽LRLRNTR可望为卵巢肿瘤早期诊断、转移复发及治疗提供新的方向。

噬菌体展示肽库技术在胃癌研究与治疗中的进展

胃癌是我国最常见的消化道肿瘤之一。近几年,胃癌早期诊断以及低副作用的有效治疗已经成为研究人员重点关注的方向和领域。噬菌体展示肽库技术(PDL)作为分析蛋白质之间相互作用的有效方法,具有简便、高效、高通量等优点,这使得PDL在胃癌的诊断检测和靶向治疗领域展示出了极大的研究价值和潜力。本文就目前PDL技术在胃癌诊断和治疗领域中的研究进展进行综述。

应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅱ结合蛋白

目的 通过筛选乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子Ⅱ(SPⅡ)结合蛋白 ,为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HBV的表面抗原基因启动子Ⅱ的聚合酶链反应 (PCR)产物DNA作为固相筛选分子 ,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机筛选的 2 0个克隆中得到 4个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性分析 ,确定了和HBVSPⅡ结合的肝细胞蛋白———尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶 4 (NADHDH4 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HBVSPⅡ的结合蛋白 ,分析了该蛋白的编码基因 ,为进一步研究HBV的复制、转录、调节机制开辟了新的途径。

噬菌体展示肽库筛选赭曲霉毒素A模拟表位的研究

目的从噬菌体随机肽库中筛选模拟赭曲霉毒素A表位的噬菌体粒子,并以其替代毒素建立免疫学检测方法。方法以抗赭曲霉毒素A的单克隆抗体为配基,免疫亲和筛选以融合蛋白形式表达在丝状噬菌体M13外壳蛋白Ⅲ上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,同时进行DNA测序确定插入七肽的氨基酸序列。结果经过4轮淘选,共筛选到11株能与该抗体特异性结合的阳性克隆,且该结合能被赭曲霉毒素A阻断,模拟表位的共有序列为IRPMVXX,X为任意氨基酸。以其中的P2号克隆建立了竞争ELISA检测方法,线性范围为200～8000pgml,检测下限为150pgml。结论噬菌体展示技术可成功筛选到赭曲霉毒素A模拟表位,筛选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学分析方法。

应用噬菌体表面展示技术筛选丙型肝炎病毒NS5A抗原模拟表位

目的:筛选丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A(HCVNS5A)特异性噬菌体模拟表位,为抗HCV的疫苗研究探索新途径.方法:应用噬菌体表面展示技术,以抗-HCVNS5A的单克隆抗体作为固相筛选分子,对人工合成的噬菌体随机12肽库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程,随机挑取30个克隆,经噬菌体酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定并进行交叉反应实验以及竞争抑制性结合实验,最后对所选克隆进行DNA序列分析,以确定HCVNS5A抗原的模拟表位.结果:经噬菌体富集后,从随机筛选的30个克隆中得到12个阳性克隆,确定氨基酸序列XXXPXXXLLRXX为HCVNS5A的模拟表位.结论:用噬菌体12肽库成功筛选得到HCVNS5A的模拟表位,为开展用HCV模拟表位探索HCV的防治研究创造了条件.

HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建

目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。

猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位鉴定

本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库,并对其进行生物淘选,以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,采用噬菌体展示技术,以T7select415-1b为载体,分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库(SM-E2库和HCLV-E2库)。通过生物淘选和噬菌体原位杂交技术,采用7株猪瘟单克隆抗体和1株猪瘟高免血清分别对构建的SM-E2库和HCLV-E2库进行抗原表位筛选。结果共筛选到了5条与E2蛋白高度同源的序列,在E2蛋白上的同源区域分别为TAVSPTTLR、YYEP、TTWKEYSH、GGQ(V)VK和PDGLPHY。结果表明,TAVSPTTLR、YYEP和TTWKEYSH序列与目前已知E2蛋白表位一致,说明它们是E2蛋白上的优势表位;GGQ(V)VK和PDGLPHY序列与预测表位一致,推测是E2蛋白上潜在的抗原表位。

量子点荧光标记在重组噬菌体表面展示肽与胰岛素受体相互作用中的应用

Luminescent quantum dots(QDs) are a promising alternative to organic dyes for fluorescence-based applications. Filamentous phage was labeled with QDs and its infective capability is observed after labeling. The experimental result shows that the labeling phage can still infect E.coli K91 normally. We have also developed the procedures for using QDs to label CHO-IR cells and Mouse Kidney tissue slice. The tissue slice remained stably labeled for over 10 d and the cells remained stably labeled even for over 5 months.