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题名深海噬菌体BVE2内溶素的重组表达及其活性研究
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作者
张天佑
陈源
余美舜
张蒙辉
金敏
曾润颖
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机构
自然资源部第三海洋研究所、自然资源部海洋生物遗传资源重点实验室
自然资源部第三海洋研究所、自然资源部海洋生物资源开发利用工程技术创新中心
先进制造学院
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出处
《应用海洋学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期416-425,共10页
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基金
中国亚太经合组织合作基金。
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文摘
本研究从一株来源于西南印度洋沉积物的噬菌体BVE2基因组中得到了一条全长702 bp,编码噬菌体内溶素的基因Lysin132,编码的蛋白共含有234个氨基酸残基,预计分子量为25.74 kDa;氨基酸序列同源比对结果表明BVE2 Lysin132具有多个酰胺酶活性位点。进化树分析结果表明BVE2 Lysin132是一种N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶。将Lysin132克隆到pEASY-Blunt E2 Expression Vector中,构建了E.coli-pEASY-Lysin132表达菌株。成功用IPTG诱导表达,得到了大量带有6×His标签的重组BVE2 Lysin132。经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳,得到单一目的蛋白条带。酶学性质分析结果表明,重组BVE2 Lysin132的最适反应温度为30℃,在中高温下热稳定性良好,在10~50℃下孵育90 min,仍能保持70%以上的酶活力;最适pH为7.0,在pH 6.0~8.0时均能保持80%以上的酶活力,表明该酶有较宽的pH作用范围;Na+、Mg^(2+)可以使酶活力显著提高20%以上,Ca^(2+)可以使酶活力提高40%以上。抑菌实验结果表明,重组BVE2 Lysin132对革兰氏阴性菌的抑制效果较好,尤其对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、坎氏弧菌(V.campbellii)、哈维氏弧菌(V.harveyi)的抑制作用显著,与市售微生物溶菌酶相比,抑制效果最高提升了40%以上。因此,本研究获得了一种拥有较宽pH作用范围且热稳定性良好的内溶素,可为开发应用于水产养殖、食品保鲜、医药等领域的新型抑菌剂研发提供基础。
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关键词
海洋生物学
噬菌体bve2
内溶素
N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶
抑菌活性
热稳定
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Keywords
marine biology
bacteriophage bve2
Lysin
N-acetylmuramyl-L-alanine amidase
antibacterial activity
thermostable
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分类号
P735
[天文地球—海洋生物学]
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