三种IBV检测方法比较研究

IBV属于冠状病毒γ群,可引起鸡呼吸道疾病,对IBV诊断方法研究广泛,建立多种方法,而噬菌体展示技术广泛用于蛋白质研究中。使用分子生物学技术和噬菌体展示技术筛选到能与IBV S1蛋白特异性结合噬菌体建立三种IBV检测方法,Real-Time PCR、RT-PCR和噬菌体ELISA。结果表明,三种方法都可有效检测出传染性支气管炎病毒(IBV),证明三种方法可靠性,对这三种方法的灵敏性进行比较,敏感性上实时Real-Time PCR法最敏感,依次为RT-PCR和噬菌体ELISA技术,检测极限分别为7.64×101、7.64×103、1.21×105copies·μL-1,证明筛选的IBV S1蛋白特异性亲和噬菌体可用于IBV病毒诊断,具有较高特异性和敏感性,为IBV诊断提供新方法。Real-Time PCR、RT-PCR和噬菌体ELISA三种方法各具特点,可满足不同检测需要。

Cry2Aa毒素结合十二肽的筛选与鉴定

利用Cry-2Aa毒素蛋白对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮筛选，并从第4轮筛选产物中随机挑选20个单克隆，进行单克隆ELISA、PCR扩增、DNA电泳及测序，鉴定这些克隆与Cry2Aa毒素的结合活性。结果显示，这20个克隆均能与c巧也Aa毒素发生特异性结合，并推导出8条不同的序列。挑取阳性值最高的克隆GT（氨基酸序列为GTPWHHHRHLIV）建立了基于十二肽的Cry-2Aa毒蛋白的间接竞争ELISA检测方法。该方法的抑制中浓度（IC50）为1｜1390μg／ml，最低检测限IC10为O．0211μg／ml，线性检测范围为0．0478～22.691Oμg／ml（Y=23．09lgx＋48．692，R^2=0．9963）。噬菌体展示肽库筛选方法为快速、准确地检测Cry2Aa毒蛋白提供了新的途径。