采用可溶性噻唑盐WST-8检测细胞病变

目的 建立一种简便和客观的检测细胞病变的方法。方法 活细胞代谢过程中 ,可溶性噻唑盐WST 8在电子载体 1 MethoxyPMS存在时被还原形成的可溶性甲染料 ,通过读取A4 50 6 30 间接检测活细胞的个数 ,可用于细胞病变的检测。将WST 8法用于rhIFN α1b效价的检测 ,并与结晶紫法和常规镜检相比较。结果 相关性研究表明在一定细胞浓度范围内 (2 0 0～ 5 5 0 0 0细胞 孔 )Wish活细胞个数与A4 50 6 30 值呈线性相关 ,相关系数为 0 998。WST 8法检测rhIFN α1b的效价结果与结晶紫法和常规镜检结果基本一致 ,相关系数分别为 0 911(P <0 0 0 1)和0 94 5 (P <0 0 1)。结论 WST

苯并噻唑盐催化多聚甲醛合成1,3-二羟基丙酮

在氮气保护下,以多聚甲醛为原料,正丁醇作溶剂,三乙胺作助催化剂,在溴化-3-乙基苯并噻唑盐催化作用下合成了1,3-二羟基丙酮。考察了反应温度、反应时间、三乙胺用量对产物1,3-二羟基丙酮(DHA)收率的影响,得出的优选工艺参数为:60 mmol多聚甲醛,3 mmol催化剂和25 mL三乙胺,同时加入10 mL正丁醇,反应温度130℃,反应时间40 min。DHA收率为37%,选择性在95%～98%。产物经过先酯化再水解分离的提纯工艺,质量分数从90%提高到99.8%,分离提纯后得率为72%。产物熔点为73℃;通过IR、1HNMR及紫外可见光谱分析确证了化合物的结构。

溴化苯并噻唑盐的合成

以橡胶促进剂-M 为原料合成了苯并噻唑和对偶姻缩合反应有催化性能的5种溴化苯并噻唑盐,讨论了溶剂和温度对反应的影响。

以溴化苯并噻唑盐为催化剂合成α-羟基脂肪酮

以溴化苯并噻唑盐为催化剂合成了七种α—羟基肪脂酮.并讨论了反应物结构和催化剂与反应性能的关系.

一种新型噻唑盐的微波辅助合成及对安息香缩合的催化作用

以4-甲基-5-羟乙基噻唑和对氰基氯化苄为原料微波合成一种新型噻唑盐,3-(对氰基苄基)-4-甲基-5-(2-羟乙基)噻唑氯化物,再用此噻唑盐替代VB1作为安息香缩合反应的催化剂,检验其催化性能,发现催化苯甲醛得苯偶姻收率为74.5%、催化糠醛得糠偶姻收率为76.1%,此噻唑盐不仅具有天然VB1的无毒性,且可回收利用;考察了物质的量投料比、反应时间、反应温度及微波反应器功率对此噻唑盐收率的影响;并用HPLC测定产物的纯度,通过熔点、元素分析、IR及LC-MS对噻唑盐性质和及苯偶姻结构进行了表征.

3—甲基—2—(取代苯乙烯基)—苯并噻唑碘盐的合成及紫外可见光谱

报道了7种属于半菁染料的苯乙烯噻菁染料的合成及紫外可见光谱研究。发现在甲醇溶液中,取代基对吸收光谱具有一定的影响。

2-乙硫基-β-萘并噻唑乙替硫酸-酯盐合成的研究

以α-萘胺为起始原料，通过封管反应、碱提取、水蒸气蒸馏、乙酸酸化和乙醇重结晶，取得了纯度较高的2-巯基-β-萘并噻唑。研究发现，2-巯基-β-萘并噻唑与PdCl2有高灵敏度、高选择性的络合显色作用，并把这种显色方法成功地用于该噻唑的提纯检验上。对2-乙硫基-β-萘并噻唑的物态提出了不同看法，得到IR谱的证明。最终在2-乙硫基-β-萘并噻唑与硫酸二乙酯摩尔比1：1．5～1：1．8，反应温度110～130℃的优化反应条件下成功合成了2-乙硫基-β-萘并噻唑乙替硫酸-酯盐，产率34％，m．P．52～54℃。

长链型噻唑鎓盐在水相中原位催化Suzuki偶联反应

合成的长链型噻唑鎓盐与钯配位在水相中催化Suzuki偶联反应,通过对条件的优化得到最佳实验条件.然后再进行实验底物广泛性的考察,发现该长链型噻唑鎓盐有较广的实用性.

制备(R)-2,2-二甲基四氢噻唑4-羧酸-L-酒石酸盐的新方法

发展了一种制备(R)-2,2-二甲基四氢噻唑4-羧酸-L-酒石酸盐(D-DMT·L-TA)的新方法,可以以73.0%的收率以及99%的光学纯度得到产品.

蒙脱土负载噻唑催化合成1,3-二羟基丙酮

将不同种类的噻唑盐化合物负载于钠基蒙脱土（Na^＋-MMT）上,制备出一系列蒙脱土负载噻唑催化剂,将其用于选择性催化甲醛聚糖反应合成1,3-二羟基丙酮（DHA）。通过FTIR、XRD、SEM对制备的催化剂结构和形态进行了表征。测试了催化剂选择性催化甲醛聚糖反应的活性,考察了反应时间、温度、催化剂种类、催化剂用量等对DHA收率的影响,结果表明：在不含水的正丁醇甲醛反应液（甲醛量30 mmol）,蒙脱土负载噻唑催化剂1.2 mmol[溴己基苯并噻唑盐与Na^＋-MMT离子交换容量（CEC）物质的量比为0.8∶1.0],温度120℃,反应时间30 min条件下,DHA收率达62.3%。N2和空气氛围对蒙脱土负载噻唑催化剂催化甲醛聚糖生成DHA的活性影响不大,催化剂循环使用3次,仍具有催化活性。

MTT法用于中药成分细胞毒性和增殖检测的干扰因素及控制措施

3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法具有操作简单和成本低廉等优点,被广泛应用于中药成分的细胞毒性和对细胞增殖影响等研究。然而,细胞的数量和密度、MTT浓度和作用时间等实验条件会干扰检测结果的准确性。另外,由于中药成分种类繁多而且化学结构复杂,可能导致吸收光谱漂移、形成近似检测波长的吸收峰及干扰细胞代谢的活性等,影响MTT检测结果的准确性。对近年的相关文献进行整理,归纳和分析了影响MTT实验的实验条件、优化措施和质量控制,归类了检测需要注意的某些中药成分,总结了替代MTT法的其他实验及MTT与其他实验的联合应用,对应用中存在的问题进行了探讨和展望,期望为MTT法在中药成分相关实验中的合理应用提供参考。

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1对牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用噻唑盐(MTT)法检测bFGF和IGF-1单独或联合应用时对人PDL细胞增殖的影响。结果bFGF和IGF-1单独应用时均可明显促进PDL细胞增殖,在实验的5d范围内,bFGF浓度在1～100ng/ml和IGF-1浓度在1～100ng/ml时呈浓度-时间依赖关系,bFGF最佳效应浓度为10ng/ml(比对照组增加了247.8%),IGF-1最佳效应浓度为100ng/ml(比对照组增加了236.5%),两者的最佳效应时间均为3d。以二者的最佳效应浓度联合应用时,作用更为显著,培养3d时比对照组增加了290.4%(P<0.001)。结论bFGF和IGF-1均能促进人PDL细胞的分化和增殖,二者联合应用有协同效应。

MTT、WST-8法测定细胞生长抑制率的结果比较

体外培养的乳腺癌细胞给予不同浓度的A p igen in处理,72h后分别用M TT、W ST-8法检测细胞生长抑制率。结果两种方法测定的乳腺癌细胞M CF-7生长抑制率结果相似,但W ST-8法步骤少,操作更为简便,值得推广。

Periostin对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :研究小鼠重组Periostin对牙周膜细胞 (PDL细胞 )增殖及碱性磷酸酶 (ALP)活性的影响。方法 :采用MTT比色试验及酶动力学方法 ,测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果 :Periostin仅在浓度为 40 μg/ml时 ,可显著促进PDL细胞的增殖 (P <0 .0 1) ,其余浓度则无作用 ,而其浓度在 10 μg/ml～ 80 μg/ml范围中时 ,均可显著提高PDL细胞ALP活性水平 (P <0 .0 5 )。结论 :小鼠重组Periostin对PDL细胞的增殖及ALP活性均有促进作用 ,但其在这两方面的作用存在差异 。

MTT法和WST-8法检测三羟异黄酮对SW480细胞生长抑制的比较

目的探讨MTT法和WST-8法检测三羟异黄酮(Genistein,GEN)对SW480细胞的生长抑制,比较两种检测方法的实用性。方法体外培养的结肠癌细胞SW480给予不同浓度的GEN处理,48 h后分别用MTT、WST-8法检测细胞生长抑制率。同时测定加入WST-8试剂后在0.5、1、24、h 4个不同时间点吸收值,根据吸光密度(OD)值确定WST-8法最佳的检测时间。结果两种方法均表明GEN作用48 h后SW480细胞的生长明显受抑制,并且随着GEN浓度的增加,这种抑制作用亦增强,两种方法测定的结肠癌细胞SW480生长抑制率结果相似。WST-8法最佳的检测时间为1～2 h。结论 WST-8法步骤少,孵育时间短,操作更为简便,可作为抗癌药物的筛选检测方法。

雷公藤内酯醇对小鼠腹腔内激活巨噬细胞杀伤活性和NO分泌影响的实验研究

目的 探讨雷公藤内酯醇(TP)对子宫内膜异位症腹腔大量激活巨噬细胞免疫抑制作用机制,以及其在不同剂量TP和不同时间段杀伤活性和NO分泌的影响。方法 体外培养由脂多糖(LPS)诱导激活的小鼠腹腔巨噬细胞,采用噻唑盐比色(MTT)间接法观察其杀伤活性的变化,并用硝酸还原酶法检测其上清NO的含量变化。结果 TP在1～10μg/ml时对巨噬细胞杀伤活性和NO的产生具有明显抑制作用(P<0.01),且无细胞毒性。TP<1 μg/ml,无统计学意义(P>0.05)。结论 TP能有效抑制小鼠腹腔液中活化巨噬细胞和NO的生成,为临床治疗子宫内膜异位症提供实验依据。

异亮氨酸对人腮腺细胞生长和增殖的影响

目的探讨异亮氨酸对人腮腺细胞生长和增殖的影响。方法在人腮腺细胞(humansalivaryglandscells,HSGCs)体外培养基中加入不同浓度梯度为0.5、0.75、1.0、1.25、1.5、2.0mmol/L的异亮氨酸,观察细胞生长情况,寻找最适生长浓度,未加异亮氨酸组为对照;应用噻唑盐比色测定法(MTT法)观察异亮氨酸对HSGCs增殖的影响比较实验组和对照组细胞传代培养细胞生长情况。结果实验组细胞生长和增殖活性明显高于对照组,其最适浓度为1.5mmol/L,并可进行传代培养,传2代以上;对照组第一次传代后即发生细胞凋亡。结论异亮氨酸在体外培养中能明显促进HSGCs生长和增殖,减少细胞凋亡,促进细胞传代。

4,4’-二氟苯偶酰的合成研究

以对氟苯甲醛为原料,3-丙基-4-甲基-5-羟乙基噻唑溴盐为催化剂,FeCl3/CuSO4/NaNO3为氧化剂,一锅法合成4,4’-二氟苯偶酰。考察了不同助催化剂及用量、催化剂用量、反应温度对反应收率的影响,得到较优工艺条件:三乙胺为辅助催化剂,m(对氟苯甲醛)∶m(催化剂)∶m(三乙胺)=100∶6∶14,反应温度90℃,总收率73.3%,产品结构经1 H NMR,IR确认。

苯甲醛安息香缩合反应催化合成苯偶姻新方法

制备了不同取代基的噻唑盐催化剂,研究了噻唑盐催化苯甲醛合成苯偶姻的安息香缩合反应,考察了噻唑盐取代基、催化剂用量、反应温度及反应时间对苯甲醛安息香缩合反应的影响规律。结果表明,以3-乙基-4-甲基-5-羟乙基噻唑溴盐为催化剂,噻唑盐用量为1.5%(以苯甲醛计,n/n,在反应温度为100℃,反应时间为6h时,苯偶姻收率达72.5%,且反应过程中不需添加任何有机溶剂,具有环境友好的特点。

钛表面钛酸钙涂层的制备及其生物安全性能的初步研究

目的钛酸钙(Calcium titanate,Ca Ti O3)作为一种有前途的涂层,可应用于钛植入体表面,改善其性能。本研究通过水热合成方法在纯钛表面制备Ca Ti O3涂层,评价其生物学性能和安全性能。方法在120℃6、12、24 h和150℃6、12、24 h条件下,利用水热合成法,钛片表面制备涂层,利用扫描电镜、X射线衍射、能谱分析对涂层进行形貌分析;通过小鼠骨髓微核实验计算120℃组(6、12、24 h)和150℃组(6、12、24 h)、等渗盐水组、环磷酰胺组(环磷酰胺40 mg/kg,腹腔注射0.1 m L)的细胞微核率;并通过兔溶血实验计算血120℃组(6、12、24 h)和血150℃组(6、12、24 h)、阴性对照组(等渗盐水)、阳性对照组(蒸馏水)的溶血率;MTT法检测钛片120℃组(6、12、24 h)和钛片150℃组(6、12、24 h)及纯钛片组第1、4、8天的吸光度(A)值。结果水热合成法可于钛表面制备出Ca Ti O3涂层。骨髓微核实验结果显示,120℃组6、12、24 h和150℃组6、12、24 h的微核率分别为0.8‰、0.6‰、1.0‰和0.8‰、1.2‰、1.4‰,显著低于环磷酰胺组(37‰),差异均有统计学意义(P<0.05)。溶血实验结果显示,血120℃组6、12、24 h和血150℃组6、12、24 h的溶血率分别为0.50%、0.61%、0.55%和0.75%、0.51%、0.31%,均符合医用材料的溶血实验要求(<5%)。MTT检测结果显示,第4天,钛片120℃组12、24 h和钛片150℃组12、24 h的A值分别为0.498±0.218、0.566±0.266和0.668±0.268、0.769±0.213,均显著高于纯钛片组(0.341±0.143);第8天,钛片120℃组12、24 h,钛片150℃组12、24 h的A值分别为0.767±0.267、0.836±0.236和0.765±0.265、0.903±0.303,显著高于纯钛片组(0.731±0.121),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Ca Ti O3涂层的钛片无明显的致突变性和溶血现象,对成骨细胞无明显毒副作用,可促进成骨细胞的增殖,是一种具有发展潜力的种植体涂层材料。