“载药囊泡化肿瘤靶向治疗术”临床应用专家共识

随着精准医疗的快速发展,细胞外囊泡在肿瘤等疾病的诊断和转化应用中展现出巨大潜力。“载药囊泡化肿瘤靶向治疗术”是中国原创的新型肿瘤免疫治疗技术,其以肿瘤细胞来源的微囊泡作为载体,包裹或负载临床常用小分子化疗药物,通过药物靶向递送、趋化和激活中性粒细胞、逆转巨噬细胞极化表型及促进肿瘤抗原提呈等多重作用机制实现对肿瘤细胞的有效杀伤。历经十余年的抗肿瘤机制探究、临床前评估及临床试验,该技术已成功完成临床转化,获批临床应用。为进一步推动“载药囊泡化肿瘤靶向治疗术”在临床的规范和科学应用,中国免疫学会肿瘤免疫与生物治疗专业委员会和中国抗癌协会肿瘤生物治疗专业委员会联合组织细胞外囊泡及肿瘤免疫治疗领域的技术和临床专家,经过多次商讨与修订,最终撰写了《“载药囊泡化肿瘤靶向治疗术”临床应用专家共识》。本共识就“载药囊泡化肿瘤靶向治疗术”在肿瘤治疗领域的研究和应用进行了介绍,并对该技术面临的挑战及未来发展方向进行了展望,旨在为其临床合理使用提供建议及参考。

囊泡诱导序列诱导的囊泡蛋白质谱及生物信息学分析

囊泡诱导序列(vesicle inducing sequence,VIS)诱导哺乳动物细胞产生的囊泡,能够装载或展示靶蛋白质,具有产量高、易于改造等特征,有望在草食动物疫苗及水产疫苗等领域得到应用。然而,VIS囊泡的结构组成及形成机制目前还不清楚。基于此,将免疫亲和纯化的VIS囊泡进行蛋白质质谱(LC-MS/MS)鉴定,对鉴定结果进行基因本体(gene ontology,GO)功能注释、KEGG代谢通路分析,同时利用Western blot技术验证排名靠前的部分蛋白质。蛋白质质谱技术共鉴定出709种蛋白质。其中,多数蛋白质为细胞囊泡组分,且部分蛋白质参与高尔基体膜泡运输。KEGG通路富集结果显示,VIS囊泡结构蛋白共参与了3条囊泡形成及运输过程相关的代谢通路,分别为吞噬体通路、内吞作用、突触囊泡途径。该研究从蛋白质水平上揭示了VIS囊泡构成及形成机制,对今后VIS囊泡在动物生物制品及疫苗等领域的应用奠定了基础。

小胶质细胞衍生的细胞外囊泡在中枢神经系统中的作用研究

小胶质细胞作为中枢神经系统(CNS)固有免疫的核心成分,在神经系统发育、环路形成、神经元活动和维持大脑稳态等方面发挥着重要作用,其与细胞突触同时感知周围环境变化,并不断进行自我调整实施对脑内环境的监视。小胶质细胞衍生的细胞外囊泡(EVs)不但反映了供体细胞的动态特性,还为生物活性信号的远距离传递和靶向调控提供通讯载体。本文总结了关于小胶质细胞在生理和病理状态下释放的EVs对神经元、突触、星形胶质细胞、内皮细胞、脑血管和髓鞘等的作用以及其在脑内网格状信号传导所诱发的生物学功能,挖掘小胶质细胞衍生的EVs在CNS疾病发生和治疗中的潜能,并对神经胶质细胞衍生的EVs的功能探索提供一定的基础。

热刺激后小胶质细胞细胞外囊泡对神经元的损伤作用

目的探究热刺激后小胶质细胞细胞外囊泡对神经元损伤的影响。方法热刺激BV2小胶质细胞后收集上清,通过不同的超速离心速度获取细胞外大囊泡和小囊泡。利用纳米粒度分析仪检测粒径,利用Western blot检测囊泡上TSG101、CD63和flotillin-1的表达。PKH67标记BV2来源的囊泡后与N2a细胞共孵育,检测神经元对小胶质细胞细胞外囊泡的摄取情况。分别将热刺激后BV2来源的大囊泡和小囊泡与N2a共孵育,通过CCK-8、细胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、台盼蓝染色和TUNEL染色法评价热刺激后N2a的损伤情况。结果小囊泡粒径介于30~120 nm,高表达TSG101和CD63,大囊泡粒径介于90~1000 nm,高表达flotillin-1;BV2来源的细胞外囊泡可被N2a细胞摄取并参与热刺激对N2a细胞损伤的调节,其中CCK-8检测结果表明小胶质细胞来源的大小囊泡均能降低热刺激后N2a细胞的活力(P<0.05)。LDH检测、台盼蓝染色及TUNEL检测结果表明大囊泡(P<0.05)和小囊泡(P<0.01)均能显著提高热刺激后N2a细胞LDH的释放水平、N2a细胞的蓝染水平及凋亡程度,且小囊泡处理组中N2a细胞的LDH释放水平、蓝染和凋亡水平高于大囊泡处理组。结论热刺激后小胶质细胞通过细胞外囊泡加剧了神经元的损伤。

外周脑源性细胞外囊泡作为神经精神疾病生物标志物和治疗监测标志物的前景与展望

细胞外囊泡(EV)是一组源自内体系统或从细胞质膜脱落的膜质结构。EV可以携带一组异质性分子,包括蛋白质、脂质、核酸和其来源细胞的膜受体。EV可以通过血脑屏障,因此可以通过神经细胞表面标志物将来自脑的EV(BDEV)从外周血中提取出来。由于BDEV携带了中枢神经系统信号,如蛋白质、脂质、核酸等,这使得其成为一种有效的探索中枢神经系统工具。该文综述BDEV成为神经精神疾病生物标志物的可行性,以及将其作为治疗过程中疗效监测指标的前景。

输注异基因耐受性DC产生的外囊泡体引发输血相关急性肺损伤风险的研究

目的探讨利用耐受性的树突状细胞(dendritic cell,DC)分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)干预感染后输血相关急性肺损伤(transfusion-related acute lung injury,TRALI)策略的风险。方法体外诱导小鼠骨髓来源的DC细胞用雷帕霉素处理诱导成耐受性DC,收集其培养上清,通过梯度离心法收获EVs。利用LPS和抗H2Kd抗体诱导Balb/c小鼠为TRALI疾病模型,并尝试用同基因的雷帕霉素-DC或者异基因的雷帕霉素-DC分泌的EV对TRALI小鼠进行干预,观察并记录发病小鼠的一系列数据。结果与TRALI发病组相比,使用雷帕霉素处理后的同基因耐受性DC对TRALI发病小鼠进行干预后,小鼠的死亡率显著下降。当用异基因耐受性DC(雷帕霉素处理后)产生的EVs进行干预组的肺湿/干比率、胸腔积液和体温与仅用LPS和H2Kd抗体处理组小鼠没有显著性差异。来源于耐受性细胞异基因EVs与LPS联合后不诱发小鼠的TRALI,但是EVs干预后的死亡率与注射浓度呈正相关。结论雷帕霉素处理后的同基因DC对感染后TRALI具有保护作用,并且该耐受细胞的异基因细胞外囊泡联合LPS后本身并不引起呼吸窘迫现象,当这种异基因外囊泡体输注联合抗白细胞抗体时,却加重了TRALI的死亡风险。本研究数据提示,异基因外囊泡体的应用与输血同时进行时,也许可能会加重TRALI死亡风险。

细胞外囊泡在牙周炎中的双重作用

细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是指来源于人、动物、植物和微生物的细胞旁分泌脂质双层亚细胞颗粒,存在于脊椎动物的生物体液中。EVs通过传递各种信号分子,介导牙周组织细胞间的信息交流和物质传递。多项研究报道了来自牙周致病菌的EVs可引发牙周炎,加重对牙周组织的破坏,甚至传播到远隔器官引起全身性疾病。然而,牙源性间充质干细胞衍生的EVs已被证实可以调节牙周局部免疫微环境,促进牙周组织的再生和修复,可被用于牙周炎的“无细胞”治疗。该文阐述了EVs在牙周炎中的双重作用机制,并对EVs在牙周炎治疗中的应用策略进行了综述。

小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA在非酒精性脂肪性肝病中的作用

小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)是由细胞分泌的一种细胞外囊泡,产生于多泡体,多泡体与质膜融合并释放到细胞外基质。由于小细胞外囊泡可以携带分子质量相对较小的核酸、蛋白质、脂质,能够执行细胞间物质传递、细胞间通讯等功能。因此,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅参与细胞正常生理过程,也可以在多种疾病的发生发展过程中起重要作用。本文综述了小细胞外囊泡在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用,小细胞外囊泡及其携带的非编码RNA不仅有望成为NAFLD诊断的标志物,同时也具有治疗NAFLD的潜在作用,或能为治疗NAFLD提供新思路。

CTAB/SDBS水基囊泡相磁流体制备及稳定性研究

以阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)和阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠(SDBS)为原料复配自发形成囊泡相,并以其为微反应器,Fe^(2+)和Fe^(3+)在囊泡内发生反应,得到平均粒径为20m的Fe_(3)O_(4)纳米晶囊泡分散液作为水基磁流体。采用广角X射线衍射(XRD)、X射线光电子能谱(XPS)、透射电镜(TEM)、扫描电镜(SEM)、磁滞回线(VSM)等对合成的Fe_(3)O_(4)纳米晶以及磁流体进行分析表征。结果表明,以合适的阴阳离子表面活性剂获得的囊泡相为微反应器形成的水基囊泡相磁流体,在室温稳定性优良,静置60h其稳定性系数仍然可达97%。在磁场反复作用后,囊泡相水基磁流体仍具有良好的稳定性,其中的Fe_(3)O_(4)纳米粒子颗粒均匀,具有超顺磁性特征,磁饱和度达到59emu/g。

增加革兰阴性菌外膜囊泡产量的研究进展

外膜囊泡(OMVs)是由革兰阴性菌释放的一种囊泡状结构,在革兰阴性菌的生长、感染以及与周围环境交流等过程中发挥重要作用。由于OMVs无活性、不能复制且具有良好的免疫原性,被广泛应用于新型疫苗的研究。但天然OMVs产量低,无法达到规模化生产的要求,OMVs产量提升是OMVs疫苗产业化要解决的关键核心技术问题。本文主要从细菌基因改造、生长培养条件优化和OMVs生产纯化工艺优化3个方面对提升OMVs产量的研究进行综述,以期为OMVs疫苗产业化研究开发提供参考。

植源性和乳源性胞外囊泡对慢性炎症的调控机制

胞外囊泡(EVs)是由动、植物细胞所分泌的一种囊泡复合体,富含不同种类脂质、蛋白质和RNA等活性组分,使其具有多种生理活性。炎症是机体在外界刺激下所表现出的一种免疫反应,当促炎因子和抗炎因子比例失衡时,机体会表现为慢性炎症。研究表明,植源性EVs中的外泌体样纳米囊泡(ELNs)和乳源性EVs因内含不同种类活性组分,故可通过抑制促炎细胞因子的分泌,上调抗炎因子及免疫细胞因子的表达,延缓机体慢性炎症反应及相关炎症性疾病的发生。基于此,本文归纳多种植源性ELNs和乳源性EVs的提取及表征方法,重点探讨植源性ELNs和乳源性EVs对机体炎症的调控作用,即从抑制核因子-κB(NF-κB)、氧化应激及相关丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路传导,调节肠道微生物组成及促进肠道干细胞生长,调控巨噬细胞相关通路的传导等方面进行综述,为植源性ELNs和乳源性EVs生物活性相关研究提供借鉴。

保存时间对血浆胞外囊泡及囊泡蛋白的影响

目的:探讨不同保存时间对血浆胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)及肿瘤相关蛋白PD-L1表达的影响。方法:使用离心和免疫吸附的方法,选取回顾性研究常用的-80℃存放1个月、1年、3年、5年的血浆EVs与新鲜血浆EVs进行对比;使用透射电镜对提取的EVs的形态进行观察;用NTA检测各组EVs的大小及数量;用ELISA试剂盒测定EVs上肿瘤标志性蛋白PD-L1的表达情况。结果:不同存储时间的血浆总蛋白水平及平均粒径大小无显著差异。而保存时间超过1年,EVs形态出现变形、聚集和碎裂等变化。随着保存时间的延长,EVs上的标志性蛋白CD63逐年减少。保存3年和5年的样本中肿瘤标志蛋白PD-L1水平明显降低。结论:存储时间对EVs表面蛋白及肿瘤标志蛋白影响较大。在以EVs为对象的研究中,需尽量采用随访设计,提取新鲜的血浆样本进行检测。在回溯性研究中,尽量选取样本库中保存一年以内的样本进行检测。

干细胞来源的细胞外囊泡治疗急性缺血性卒中的研究进展

急性缺血性卒中(AIS)具有致残率高、病死率高、复发率高的特点。基于细胞外囊泡的无细胞疗法,尤其是干细胞来源的细胞外囊泡(SC-EVs),由于具有与干细胞相似的再生能力及优于干细胞的血脑屏障穿透力和低免疫原性,为AIS的治疗提供了新的视角。本文将对SC-EVs治疗AIS的作用机制和临床研究进展作一述评,以期为AIS的治疗提供新的思路。

罗伊氏乳酸菌外囊泡对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症的影响

该文拟研究罗伊氏乳酸菌外囊泡对脂多糖诱导的奶牛子宫内膜炎上皮细胞的影响。超速离心法提取乳酸菌外囊泡并观察其表征图像;使用PKH-26标记外囊泡,检测BEEC对其的摄入;使用实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附试验,检测外囊泡对LPS诱导的BEEC炎症反应中PCNA、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、NF-κB水平的影响。结果显示,BEEC能摄入乳酸菌外囊泡,同时外囊泡能够促进BEEC的增殖;在LPS诱导的BEEC细胞炎症中,外囊泡能够有效抑制TNF-α、IL-β、IL-6的释放和NF-κB的磷酸化水平,并且能够促进IL-10的分泌和释放。罗伊氏乳酸菌外囊泡能够通过调节炎性因子的释放,进而缓解BEEC细胞的炎症反应。

神经元来源细胞外囊泡促进神经干细胞的神经生成

背景:已有研究表明,神经干细胞能够分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞等。间充质干细胞来源细胞外囊泡被证实能够透过血脑屏障到达中枢神经损伤部位,促进神经修复。然而,神经元来源细胞外囊泡是否促进神经干细胞向有益于神经生成的方向分化,帮助神经修复,还不是很明确。目的:探究神经元来源细胞外囊泡是否有利于神经干细胞向神经生成的方向分化。方法:用胰酶消化法从新生SD大鼠大脑皮质中提取神经元和神经干细胞。收集培养神经元的细胞上清,提取神经元来源细胞外囊泡。将培养10 d的神经干细胞与神经元来源细胞外囊泡或PBS共培养7 d,采用免疫印迹、免疫荧光和RT-qPCR技术分别检测神经元、神经干细胞、少突胶质细胞和星形胶质细胞特异性标志蛋白的表达。结果与结论:神经干细胞与神经元来源细胞外囊泡共培养后,高表达神经元特异性蛋白β3微管蛋白、神经丝蛋白200和少突胶质细胞特异性蛋白髓鞘碱性蛋白,低表达星形胶质细胞特异性标志蛋白胶质纤维酸性蛋白。这些结果说明,神经元来源细胞外囊泡能够促进神经干细胞向神经元和少突胶质细胞分化,抑制其向星形胶质细胞分化。

基于蛋白质保留膨胀显微镜对微囊泡进行荧光成像的实验研究

目的:探讨蛋白质保留膨胀显微镜(proExM)与小鼠下颌骨来源微囊泡(MVs)的相容性,观察膨胀后MVs表面标志物的分布情况并精确识别其细胞来源。方法:采用差速离心法分离小鼠下颌骨来源MVs;利用透射电子显微镜、Western blot、纳米颗粒跟踪分析技术对MVs进行观察鉴定;对MVs表面蛋白CD9、CD63、碱性磷酸酶(ALP)、破骨细胞相关受体(OSCAR)进行免疫荧光染色;采用proExM技术对免疫荧光染色后的MVs进行膨胀放大;测量膨胀系数并利用激光共聚焦显微镜观察膨胀前后MVs的形态以及荧光染色情况。结果:差速离心法分离得到的小鼠下颌骨来源MVs符合MVs鉴定标准;在该实验流程下,通过凝胶的膨胀实现小鼠下颌骨来源MVs的4倍膨胀;膨胀后MVs线剖面上CD9、CD63的荧光强度分布呈现多峰;相较于膨胀前,膨胀后MVs表面标志物CD9、CD63的曼德斯共定位系数(MCC)1方差变大(P<0.01),MCC2方差变小(P<0.05),皮尔森相关系数(PCC)方差变大(P<0.01);膨胀后实现对成骨细胞分泌的MVs以及破骨细胞分泌的MVs的精准识别;膨胀后测得小鼠下颌骨来源CD9+MVs中,成骨细胞来源MVs占比11.11%,破骨细胞来源MVs占比3.70%。结论:该实验流程可在小鼠下颌骨来源MVs的观测中提高分辨率,为揭示MVs表面蛋白分布的异质性,精准识别组织MVs的细胞来源建立一种标准实验流程。

不同来源的细胞外囊泡在肝细胞癌发生进展中的作用

肝细胞癌(HCC)是最常见的原发性肝癌类型,也是癌症相关死亡的第三大原因,严重威胁人体健康,成为目前亟待解决的临床难题。细胞外囊泡(EV)是一种含有多种成分的膜囊泡,在HCC的发生和进展中发挥着重要作用,本文通过总结不同来源的EV对HCC的影响,分析EV对HCC的作用机制,以期为HCC的诊断及治疗提供新视角。

细菌外膜囊泡结构、分泌特性及致病机制

外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)是革兰阴性菌在生长过程中释放到胞外的囊泡状结构,被认为是细菌的“远程武器”,其功能主要是攻击宿主组织并帮助细菌定植、损害宿主细胞功能、调节宿主的防御,因此OMVs在细菌致病过程中发挥着重要作用。囊泡中的物质通过与细菌释放出的自诱导物化学信号分子结合,可以驱使细菌或者囊泡在内环境中发挥特殊功能,如群体感应、生物膜形成、获取营养、抗生素抗性、应激反应、对抗其它微生物的竞争或防御、微生物群落状态、核酸转移、水平基因转移、毒素和毒力因子的递送等,且在细菌生长周期发挥着不可或缺的作用。本文主要综述OMVs结构、分泌特性及其致病机制的最新研究进展,为深入研究细菌的致病机制以及开发新的抗菌策略提供理论指导。

细胞外囊泡在急性心肌梗死治疗中的研究进展

在医学技术蓬勃发展的今天,心血管疾病尤其是冠心病,仍然是目前全球发病率和死亡率最高的疾病之一[1-2]。而其中急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)又是冠心病最主要的死亡原因。在针对此疾病的治疗手段中,广泛的再灌注治疗的策略对于限制梗死面积、改善长期心脏功能及降低心肌梗死患者的死亡率有着显著的效果[3-4]。然而,心肌缺血再灌注不可避免地会对心脏产生进一步损伤。既往的研究表明,心肌再灌注损伤的存在削弱了50%再灌注如经PCI治疗后限制心肌梗死的效率[2,5]。

日本血吸虫胞外囊泡的提取、鉴定及对人肝星状细胞影响的初探

旨在探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum)胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)的提取方法及特性。本研究利用尺寸排阻法收集Sj EVs,通过透射电镜、蛋白质谱对Sj EVs的形态学、蛋白谱进行解析并对鉴定到的蛋白进行生物信息学分析。将PKH67绿色荧光标记的Sj EVs与人肝星状细胞LX-2共孵育,观察细胞摄取Sj EVs的情况,并对细胞中虫源miRNAs及细胞内纤维化因子进行检测,初步探讨Sj EVs对肝星状细胞的影响。结果表明:Sj EVs呈圆形或椭圆形囊泡结构,内含EVs标志蛋白。生物信息学分析结果显示,Sj EVs蛋白可能与细胞进程、代谢等途径密切相关。Sj EVs与人肝星状细胞LX-2共孵育结果显示,LX-2细胞可成功摄取Sj EVs,且定量反转录PCR(RT-qPCR)结果显示LX-2细胞中部分虫源miRNAs显著升高,纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原纤维α1(Collagen typeⅠalpha 1,Col1α1)和Ⅲ型胶原纤维α1(Collagen typeⅢalpha 1,Col3α1)极显著升高,提示肝星状细胞活化。综上,本研究为解析Sj EVs在宿主肝纤维化中的作用提供了依据,为进一步探究Sj EVs的潜在功能奠定了基础。