糖尿病伴抑郁患者囊泡单胺转运蛋白2基因的多态性

目的:探讨囊泡单胺转运蛋白2基因(VMAT2)多态性与糖尿病患者抑郁状态相关性。方法:糖尿病患者106例,其中合并抑郁(HAMD评分>20分)的患者50例。分析患者的VMAT2基因多态性分布。用logistic回归分析筛选影响抑郁发生的独立危险因素。比较不同基因型的糖尿病合并抑郁患者基线HAMD评分。结果:伴抑郁组rs363371基因位点的GG基因型比率均高于不伴抑郁组(24.0%vs.8.9%,P<0.05)。家庭人均月收入≤3000元、并发症≥2种、rs363371(GG基因型)为糖尿病合并抑郁的独立危险因素(OR=1.86、2.40、1.87,均P<0.001)。rs363371(GG基因型)患者的HAMD评分高于AA基因型、AG基因型[(27.6±3.0)vs.(22.2±2.2),(23.7±2.7),P<0.05]。结论:VMAT2上的rs363371(GG基因型)是糖尿病患者伴发抑郁的危险因素。

囊泡单胺转运蛋白2的研究进展

囊泡单胺转运蛋白2(VMAT2)是囊泡单胺转运蛋白家族(VMATs)成员之一,主要参与单胺类神经递质的转运。VMAT2既可转运突触前释放的神经递质至囊泡中,又可将胞质内有害的单胺隔离到囊泡中。VMAT2功能丧失会导致单胺类囊泡隔离减少,胞浆中单胺聚集。VMAT2缺失会引起亨廷顿病、迟发型运动障碍、帕金森病等中枢神经系统疾病。

囊泡单胺转运蛋白2缺陷小鼠多巴胺相关的帕金森病表现的研究

目的观察特定敲除多巴胺能神经元中囊泡单胺转运蛋白2(VMAT2)相关基因的小鼠体内的单胺类神经递质的变化情况,并测定其帕金森病的相关表现.方法取14月龄C57BL/6N背景小鼠(VMAT2^flox/+小鼠)作为对照组,取特定敲除多巴胺能神经元中50%的14月龄VMAT2的小鼠(VMAT2^-/+小鼠)作为实验组,进行一系列行为学测验(各14只雄性小鼠),并利用高效液相色谱电化学法(HPLC-ED)检测两组小鼠(各5~6只)的脑组织中单胺类神经递质的含量,对多巴胺与帕金森病相关表现的关联性进行评价.结果VMAT2缺陷小鼠体内的多巴胺含量明显减低,而其他单胺类神经递质未见明显变化.该组小鼠表现出类似帕金森病的运动功能受损和嗅觉障碍,但是在其他的非运动方面,包括情绪改变、认知功能、睡眠等,均未发现明显功能异常.结论VMAT2与帕金森病密切相关,而多巴胺更多地参与帕金森病的运动性症状以及嗅觉表现中,对于情绪、认知、睡眠等多种非运动症状的贡献不大,此研究为根据临床表现合理选择神经递质相关药物提供了参考.

帕金森病非运动症状与纹状体囊泡单胺转运蛋白2密度的相关性

目的探讨帕金森病(PD)患者非运动症状(NMSs)和纹状体部位的囊泡单胺转运蛋白2(VMAT2)密度之间的相关性。方法2018年12月至2019年12月从中山大学附属第一医院共前瞻性招募29名健康受试者[男16名,女13名,年龄(48.8±14.2)岁]和67例PD患者,PD患者包括31例改良Hoehn-Yahr(mH-Y)Ⅱ期患者[男16例,女15例,年龄(53.4±8.5岁)]、36例mH-YⅢ期患者[男19例,女17例,年龄(63.1±8.2岁)]。所有受试者均行18F-氟丙基-(+)-二氢丁苯那嗪[18F-FP-(+)-DTBZ,18F-AV133]PET/CT检查,以枕叶皮质为参照区,测定纹状体各亚区的特异性摄取比值(SURs)。PD患者的NMSs通过临床量表进行评估。组间参数比较采用两独立样本t检验、单因素方差分析(最小显著差异t检验),最后通过Pearson相关分析和多元逐步回归分析来评估纹状体SURs与临床NMSs之间的相关性。结果NMSs统计结果发现,改良mH-YⅡ、Ⅲ期PD患者之间抑郁[(3.51±1.34)与(11.36±3.87)分]、焦虑[(2.35±1.45)与(6.00±3.32)分]、睡眠障碍(132.90±12.26)与(110.34±19.69)分]及生活质量[(7.58±3.37)与(24.01±10.15)分]评分差异有统计学意义(t值:-10.573~5.439,均P<0.05),但2组间认知评分差异无统计学意义(t=1.067,P>0.05)。健康受试者纹状体SURs为1.28±0.22,mH-YⅡ期与Ⅲ期患者纹状体SURs分别为0.65±0.16和0.31±0.14,3组间差异有统计学意义(F=83.11,P<0.05),mH-YⅡ期与Ⅲ期两两比较差异也有统计学意义(t=9.116,P<0.05)。除认知评分外,PD患者NMSs其余评分均与纹状体SURs相关(r值:-0.647~-0.426,均P<0.05)。回归分析结果表明,总纹状体SURs是预测帕金森病睡眠量表(PDSS)及PD非运动症状量表(NMSS)评分的最佳变量(R2值:0.234、0.378,均P<0.001),对侧尾状核SURs是预测汉密尔顿抑郁评定量表(HAMD)评分(R2=0.402,P<0.001)的最佳变量,对侧壳核的SURs是预测汉密尔顿焦虑评定量表(HAMA)评分(R2=0.204,P<0.001)的最佳变量。结论PD患者纹状体VMAT2减少与NMSs之间具有相关性,提示多巴胺供应减少可能在PD发展过程中发挥了重要作用。

囊泡单胺转运体2抑制剂戊苯那嗪的研究进展

戊苯那嗪是一种新型、高选择性囊泡单胺转运体2抑制剂, 2017年4月被美国食品和药物管理局批准用于治疗成人迟发性运动障碍。在为期6周的短期治疗和持续48周的长期治疗临床试验中,戊苯那嗪均显示出对迟发性运动障碍良好的治疗效果,其常见的不良反应有嗜睡和头痛等。

治疗迟发性运动障碍新药——囊泡单胺转运体2抑制剂valbenazine

多巴胺受体阻滞剂通常会诱发迟发性运动障碍,囊泡单胺转运体2(VMAT2)可调节多巴胺从细胞浆摄入囊泡,降低胞浆内的多巴胺含量。valbenazine为一种由Neurocrine公司研发的选择VMAT2抑制剂,已在美国批准用于治疗成人迟发性运动障碍。本文从药物的作用机制、药动学、临床疗效及安全性等方面介绍了valbenazine.

转染VMAT_2基因的CHO细胞抵抗多巴胺毒性作用的研究

目的：探讨囊泡单胺转运体（vesicular monamine transporter-2，VMAT2）对多巴胺（dopamine，DA）毒性的抵抗作用。方法：采用细胞免疫荧光染色法测定VMAT2基因在转染的CHO细胞（VMAT2-CHO）中的表达：MTF比色法检测不同浓度DA作用下的野生型CHO（WT-CHO）和VMAT2-CHO细胞存活率；应用ELISA法DA检测试剂盒测定细胞内DA的水平；采用活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧的水平。结果：VMAT2-CHO细胞内有较强的特异性荧光表达，主要定位在核周区域，胞浆中也有散在的荧光；0．25～0．4mmol／L DA作用72h，VMAT2-CHO细胞存活率显著高于WT-CHO细胞（P〈0．05）；0．4mmol／L DA作用于WT-CHO和VMAT2-CHO细胞24h，VMAT2-CHO细胞内DA为（199．33±15．155）ng／mi，显著高于WT-CHO细胞（141．4±8．784）ng／ml（P〈0．01）；而细胞内活性氧（ROS）水平则由（144．490±5．295）U／106 cells增加至WT-CHO细胞的（217．895±15．885）U／10^6cells（P〈0．01）。结论：转染VMAT2的CHO细胞对DA引起的毒性有显著的抵抗作用。

香青兰总黄酮对帕金森病模型小鼠黑质DAT和VMAT2蛋白表达的影响

目的:探讨香青兰总黄酮(total flavones of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠中脑黑质内多巴胺转运蛋白表达的效果。方法:C517BL/6J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)制备PD动物模型,多种行为学实验方法评价动物运动功能;尼氏染色观测黑质区多巴胺能神经元的数量;RT-PCR和Western blot检测黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、囊泡单胺转运蛋白2(Vesicular monoamine transporter 2,VMAT2)和多巴胺转运蛋白(Dopamine transporter,DAT)的表达情况。结果:行为学检测表明,TFDM组显著增加小鼠的运动距离(P<0.05),显著增加小鼠的下落潜伏期(P<0.05),明显减少小鼠的爬杆时间(P<0.05);MPTP腹腔注射明显减少了黑质内多巴胺能神经元的数量,TFDM显著的提高了PD模型小鼠黑质内多巴胺能神经元数量;RT-PCR结果显示,TFDM组的TH、VMAT2和DAT的mRNA表达均显著增高(P<0.05);TFDM组TH、VMAT2和DAT蛋白表达均明显上调(P<0.05)。结论:TFDM可能通过上调VMAT2和DAT蛋白的表达,减少DA能神经元丢失,进而改善PD模型小鼠运动功能障碍。

枸橼酸铁铵和铁蛋白对原代培养腹侧中脑神经元VMAT-2和DAT表达影响

目的探究枸橼酸铁铵(FAC)、含铁铁蛋白(Ferritin)和去铁铁蛋白(Apoferritin)对原代培养的腹侧中脑神经元中单胺囊泡转运蛋白-2(VMAT-2)和多巴胺转运蛋白(DAT)表达的影响。方法以FAC、Ferritin和Apoferritin处理原代培养的腹侧中脑神经元24 h后,应用蛋白质免疫印迹(Western Blot)方法检测神经元中VMAT-2和DAT的表达情况。结果FAC、Ferritin和Apoferritin处理的原代腹侧中脑神经元VMAT-2表达较对照组明显降低,差异具有统计学意义(F=4.295,P<0.05),而DAT的表达没有明显变化。结论FAC、Ferritin和Apoferritin能够降低原代培养的腹侧中脑神经元的VMAT-2表达,而对DAT表达没有明显影响。

6-羟多巴胺对嗜铬细胞瘤细胞单胺类神经递质及其合成限速酶基因的作用

目的探讨6-羟多巴胺（6-OHDA）对大鼠嗜铬细胞瘤（PC12）细胞单胺类5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺递质及其合成限速酶基因色氨酸羟化酶（TpH）mRNA、多巴胺B羟化酶（DβH）mRNA和酪氨酸羟化酶（TH）mRNA的影响，及囊泡单胺类转运体（VMAT）功能抑制对上述物质的作用。方法分别用不同浓度6-OHDA（25、50、100、200μmol／L），不同浓度的VMAT功能抑制剂利血平（50、100、400、1600nmol／L）与6-OHDA（100μmol／L）作用于PC12细胞，于不同时间点（0、12、24、36、48h）用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活性，酶联免疫（ELISA）法检测细胞内5-HT、NE、多巴胺递质，并用荧光实时定量PCR（RT-PCR）法检测TpHmRNA、DβHmRNA及THmRNA相对表达量。结果（1）加入不同浓度的6-OHDA时，PC12细胞中细胞活性随6-OHDA浓度增加而下降，并随作用时间的延长浓度降低更加明显。而在100μmol／L6-OHDA组中，随着利血平浓度的增加，细胞活性显著下降，差异有统计学意义。PC12细胞中5-HT浓度随6-OHDA浓度增加下降不明显，但在同一浓度组中随作用时间的延长浓度降低明显，尤其在36h时间点浓度最低。NE随6-OHDA浓度增加显著下降，并随作用时间的延长表达量降低更加明显。多巴胺浓度随6-OHDA浓度增加显著降低，但随作用时间的延长浓度变化不明显。100μmol／L6-OHDA组中，随着利血平浓度的增加，5-HT、NE及多巴胺浓度显著下降，差异有统计学意义。（2）与对照组相比，加入不同浓度的6-OHDA时PC12细胞TpHmRNA、DβHmRNA及THmRNA表达随6-OHDA浓度增加显著下降，并随作用时间的延长表达量降低更加明显，而在100μmol／L 6-OHDA组中，随着利血平浓度的增加（50、100、400、1600nmol／L），TpHmRNA（0．006±0．001、0．003±0．000、0．003±0．000、0．002±0．000），DβHmRNA（0．005±0．002、0．003±0．001、0．002±0．001、0．001±0．000）及THmRNA（0．005±0．002，0．003±0．001，0．002±0．001，0．001±0．000）表达显著下降，差异有统计学意义（F值分别为13．336、9．000、9．393，均P=0．000）。结论6-OHDA能诱导PC12细胞活性降低，诱导5-HT、NE、多巴胺递质浓度及TpHmRNA、DβHmRNA、THmRNA表达的降低，并呈剂量及时间依赖性，VMAT功能抑制加重上述变化。

转染VMAT_2基因的中国仓鼠卵巢细胞对毒物抵抗作用的研究

目的:研究毒物鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对野生型及转染囊泡单胺转运蛋白(VMAT2)基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的毒性作用。方法:将不同浓度的MPP+、鱼藤酮与野生型CHO细胞(WT-CHO)和转染VMAT2基因的CHO细胞(VMAT2-CHO)共同培养,采用细胞MTT比色法和形态学观察,探讨毒物对细胞的毒性作用,通过激光共聚焦显微镜观察毒物对2种细胞的细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响。结果:VMAT2-CHO在一定时间(72 h)内对MPP+(0.2-2.0 mmol/L)和鱼藤酮(0.05-1.0μmol/L)的毒性有抵抗作用(P<0.05)。结论:VMAT2可以抵抗一定浓度的MPP+和鱼藤酮引起的神经细胞毒性作用。

神经递质在抽动秽语综合征中的作用研究进展

抽动秽语综合征(TS)是儿童期的一种慢性神经精神障碍疾病.TS患者脑内存在皮质-纹状体-丘脑-皮质(CSTC)回路及其相互连接的大脑区域异常,CSTC回路中5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)等神经递质的紊乱是导致发病的主要原因,目前临床上治疗TS的主要靶点均是针对神经递质受体的改变.本文主要通过分析单胺类神经递质(MNTs)与氨基酸类神经递质在TS发病机制中的作用,为治疗TS寻找更多的途径和靶点.

过表达VMAT_2的CHO细胞可抵抗rotenone和MPP^+的毒性作用

目的为研究毒物鱼藤酮(rotenone)和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)对野生型及过表达囊泡单胺转运蛋白(VMAT2)的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的毒性作用。方法将不同浓度的MPP+r、otenone与野生型(WT-CHO)和过表达VMAT2的CHO细胞(VMAT2-CHO)共培养,通过形态学改变和MTT比色法检测细胞活力来观察毒物的毒性作用。结果VMAT2-CHO细胞活力明显增强,第5~7天VMAT2-CHO数量约为WT-CHO的3倍。0.2~2.0 mmol/L的MPP+(P<0.05)和0.05~1.0μmol/L rotenone(P<0.01)作用72 h,VMAT2-CHO的存活率高于WT-CHO,细胞中毒后的形态改变不如WT-CHO明显。结论过表达VMAT2的CHO细胞对MPP+和rotenone的毒性作用有抵抗。

^(18)F-FDG联合^(18)F-DTBZ PET/CT显像对伴快速眼动睡眠期行为障碍帕金森病的诊断价值

目的通过^(18)F-FDG脑代谢联合^(18)F-9-氟丙基-(+)-二氢丁苯那嗪[FP-(+)-DTBZ,简称DTBZ]脑囊泡单胺转运蛋白2(VMAT2)PET/CT显像研究伴或不伴快速眼动睡眠期行为障碍(RBD)的帕金森病(PD)患者显像的特点,分析其对此类PD的应用价值。方法前瞻性收集2022年7月至2023年6月于郑州大学第一附属医院行^(18)F-FDG、^(18)F-DTBZ PET/CT显像且经临床确诊的原发性PD患者50例,其中伴RBD的PD患者18例[PD-RBD(+)组;男16例、女2例,年龄(59.2±9.3)岁],不伴RBD的PD患者32例[PD-RBD(-)组;男16例、女16例,年龄(57.7±10.2)岁],同时纳入与PD患者年龄匹配的健康对照者10名[男5名、女5名,年龄(60.3±9.6)岁]。以枕叶皮质为参考脑区,获得双侧纹状体、尾状核、前壳核、后壳核、伏隔核、黑质等脑区的^(18)F-DTBZ特定摄取值比(SUR),纹状体前-后摄取梯度与其他半定量指标。采用单因素方差[最小显著差异(LSD)-t检验]、Kruskal-Wallis秩和检验(Bonferroni法校正)、两独立样本t检验及Mann-WhitneyU检验分析数据;采用Pearson相关或Spearman秩相关行相关性分析;另行ROC曲线分析;应用统计参数图(SPM)比较伴或不伴RBD的PD患者全脑葡萄糖代谢差异。结果与PD-RBD(-)组相比,PD-RBD(+)组简易精神状态检查量表(MMSE)评分、PD睡眠量表(PDSS)评分均明显降低(z值:-3.12、-3.08,均P<0.01),其肢体症状重侧的对侧纹状体前-后摄取梯度也明显降低(t=-2.73,P=0.009),SPM分析显示其对侧前额叶葡萄糖代谢升高(t值:3.11~3.57,均P<0.001)。2组在双侧纹状体、尾状核、前壳核、后壳核、伏隔核、黑质的SUR均明显低于健康对照组(F值:6.24~147.61,H值:8.66~24.43,均P<0.05;事后检验:LSD-t检验及Bonferroni法校正,均P<0.01)。在PD-RBD(-)组中,对侧纹状体前-后摄取梯度与统一PD评分量表(UPDRS)评分及改良Hoehn-Yahr(mH-Y)分期呈负相关(r=-0.35,P=0.048;rs=-0.39,P=0.026);ROC曲线分析显示以对侧纹状体前-后摄取梯度鉴别PD-RBD(+)和PD-RBD(-)时的AUC为0.706(95%CI:0.562~0.851,P=0.016),灵敏度和特异性分别为59.4%(19/32)、16/18。结论PD-RBD(+)组患者的对侧纹状体VMAT2前-后摄取梯度降低更明显,且2组脑代谢存在差异,提示伴与不伴RBD的PD患者可能存在不同的神经病理改变和不同的病理生理机制,^(18)F-DTBZ PET/CT显像可为疾病亚型的鉴别诊断提供影像学依据。

利血平对转染VMAT_2基因的CHO细胞抵抗鱼藤酮及多巴胺毒性作用的研究

目的研究单胺囊泡转运蛋白-2(VMAT2)抑制剂利血平(RE)作用于转染VMAT2基因的中国仓鼠卵巢细胞(VMAT2-CHO)时,VMAT2-CHO对鱼藤酮(Rotenone)、多巴胺(DA)的毒性抵抗作用。方法采用MTT比色法检测RE与不同浓度Rotenone及DA共同作用下的VMAT2-CHO细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果Rotenone对VMAT2-CHO细胞有毒性作用,随浓度增大,细胞存活率下降;Rotenone和DA对细胞有协同毒性作用。随DA浓度增大,VMAT2-CHO细胞产生的ROS增加;VMAT2抑制剂利血平增加DA的毒性,使同样浓度的DA诱发VMAT2-CHO细胞产生的ROS增加,存活率下降。结论RE使VMAT2功能抑制时DA在胞浆内聚集,触发DA内源性毒性,通过氧化应激系统而发挥毒性作用。DA内源性毒性可协同环境毒物Rotenone增加对细胞的毒性作用。

治疗亨廷顿舞蹈症和迟发性运动障碍新药:deutetrabenazine

deutetrabenazine为丁苯那嗪的氘取代物,通过抑制囊泡单胺转运蛋白2 (VMAT2)发挥药理作用,由梯瓦(Teva)公司开发,用于治疗亨廷顿病舞蹈症和迟发性运动障碍。本文从药效学、药动学、临床疗效及安全性等方面介绍了该药物。