猪囊等孢球虫孢子化与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质组学分析

通过比较猪囊等孢球虫孢子化卵囊与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质,以期从蛋白质组学角度研究其发育机制,并为此类球虫的发育机制及该病的免疫预防或化学防治找到新的“关键”分子奠定基础。首先建立哺乳仔猪的猪囊等孢球虫感染模型,然后运用iTRAQ技术,结合LC-MS/MS分析差异表达蛋白质,并采用荧光定量PCR验证iTRAQ数据。结果共鉴定出174个蛋白,差异表达蛋白40个,其中38个蛋白上调表达,2个蛋白下调表达,差异蛋白主要涉及代谢、抗生素的生物合成、次生代谢产物的生物合成和糖酵解/糖异生过程等通路。研究结果为阐明猪囊等孢球虫孢子化发育机制以及发现新的生物标志物提供参考。

新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫的套式PCR检测及感染情况分析

[目的]了解新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫的感染情况。[方法]基于猪囊等孢球虫SSU rDNA基因位点设计引物,采用套式PCR法对采集自新疆7个规模化猪场的801份猪新鲜粪便DNA样本进行检测;对不同养殖场、不同年龄段猪的猪囊等孢球虫感染率进行比较分析,对获得的SSU rDNA序列进行比对分析并构建种系发育进化树。[结果]调查猪场中猪囊等孢球虫感染率为5.74%(46/801),以沙雅县养殖场感染率最高,为14.00%(14/100),不同养殖场猪囊等孢球虫感染率统计学差异极显著(χ^(2)=27.081,df=6,P<0.01)。未断奶仔猪、断奶仔猪、育肥猪和母猪的猪囊等孢球虫感染率分别为14.79%(25/169)、5.78%(13/225)、2.31%(4/173)和1.71%(4/234),不同年龄段猪的猪囊等孢球虫感染率统计学差异极显著(χ^(2)=36.366,df=3,P<0.01)。序列比对和种系发育分析显示,获得的46条猪源囊等孢球虫SSU rDNA序列与安徽省凤阳县猪源猪囊等孢球虫分离株(GenBank登录号:KX808495)SSU rDNA序列的同源性均为100%,处于同一个亚群。[结论]新疆部分地区规模化猪场猪囊等孢球虫感染较常见,应加强检测和防治工作。

龙岩市猪结肠小袋纤毛虫和猪囊等孢球虫的Mini-Flotac方法检测

为了解福建龙岩地区部分猪场猪结肠小袋纤毛虫和猪囊等孢球虫的感染情况,采集龙岩地区规模化猪场与中小型猪场不同年龄阶段的猪粪便共1029份,采用直接涂片法和Mini-Flotac进行检测。结果阳性粪便为457份,总的感染率为44.41.%,感染强度(OPG)范围为150~7800。其中规模化猪场感染率为41.83%(302/722),中小型猪场感染率为50.49%(155/307);猪结肠小袋纤毛虫的感染率为33.43%(344/1029),猪囊等孢球虫的感染率为10.98%(113/1029)。每个年龄阶段结肠小袋纤毛虫均有感染,最高感染率达51.64%;猪囊等孢球虫主要感染怀孕母猪以及幼龄仔猪,最高感染率达50.00%。结果表明,福建龙岩市地区部分猪场主要感染的肠道寄生虫为猪结肠小袋纤毛虫和猪囊等孢球虫。

猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫双重巢式PCR检测方法的建立与应用

为建立同步检测猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫的方法,根据猪囊等孢球虫SSU rRNA和十二指肠贾第虫gdh基因位点建立并优化了一套双重巢式PCR方法,同时对该方法的敏感性、特异性和重复性在临床样品检测中进行验证。结果显示,利用该双重巢式PCR扩增的SSU rRNA和gdh目的产物大小分别为530和432 bp,与单病原巢式PCR的检测结果一致。该方法对猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫的检测下限分别为3.85×10^(-4)和5.51×10^(-3)ng/μL;与毕氏肠微孢子虫、安氏隐孢子虫和大肠杆菌基因组DNA均无交叉反应;利用单巢式PCR和建立的双重巢式PCR方法分别对河南省部分地区的212份猪粪便样品进行特异性扩增,结果显示单巢式PCR与双重巢式PCR检测结果的符合率为100%。本研究首次成功建立了特异性强、灵敏度高的猪囊等孢球虫和十二指肠贾第虫双重巢式PCR检测方法,为猪肠道原虫分子流行病学调查提供了更高效的技术手段。

北京地区猫4种肠道原虫流行病学调查

隐孢子虫和贾第鞭毛虫等原虫不仅可寄生于猫的肠道,同时可引起人类感染。为掌握北京地区猫肠道常见原虫的感染情况,本调查于2021年6—12月共采集628份北京市不同区域猫的粪便样本并提取核酸,对胎儿三毛滴虫ITS1-5.8S rRNA-ITS2基因、蓝氏贾第鞭毛虫核糖体RNA小亚基(SSU rRNA)基因、隐孢子虫SSU rRNA基因和囊等孢球虫线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(mtCOI)基因进行PCR扩增和测序,并统计分析这4种肠道原虫的感染率和感染风险因素;针对蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫阳性样本,根据蓝氏贾第鞭毛虫的β-贾第素(bg)、谷氨酸脱氢酶(gdh)和磷酸丙糖异构酶(tpi)基因以及隐孢子虫的60 kDa糖蛋白(gp60)基因对其进行分子分型。结果显示,北京地区猫肠道原虫的总感染率为20.22%(127/628),混合感染率为16.54%(21/127);其中,胎儿三毛滴虫感染率为10.19%(64/628)、蓝氏贾第鞭毛虫感染率为6.69%(42/628)、隐孢子虫感染率为4.46%(28/628)、囊等孢球虫感染率为3.03%(19/628)。蓝氏贾第鞭毛虫基因型为集聚体B(26/41)、F(12/41)、C(1/41)、AⅠ(1/41)和A/F(1/41),隐孢子虫均为猫隐孢子虫,包括XIXa(23/25)和XIXc(2/25)亚型家族。经分析,纯种猫更易感染胎儿三毛滴虫和蓝氏贾第鞭毛虫(P<0.05),患猫的主要临床症状是腹泻或软便(P<0.01);年龄小于1岁、雌性和未绝育的猫更易感染隐孢子虫(P<0.05或P<0.01);年龄小于1岁、未绝育、未免疫和未驱虫的猫更易感染囊等孢球虫(P<0.01)。结果表明,北京地区猫感染的原虫存在人兽共患基因型,包括蓝氏贾第鞭毛虫集聚体A和B以及猫隐孢子虫亚型家族XIXa和XIXc,有潜在的人兽共患风险。