湖北宜昌埃迪卡拉系陡山沱组天柱山卵囊胞--Tianzhushania的新认识

我国南方陡山沱组的渗透矿化微体化石为认识埃迪卡拉动物辐射前的生物多样性,提供了异乎寻常的窗口;其中包括一些被视为早期动物胚胎的磷酸盐化球形化石。但是,一些学者将之与现生Thiomargarita sp.比较,把陡山沱组胚胎解释为巨大氧化硫细菌。湖北宜昌晓峰河剖面陡山沱组中发现Tianzhushania的大型具刺疑源类的膜壳中显示有1、2、4、8、16乃至数百个卵裂细胞标本,表明它们应是真核生物,很可能是在滞育卵囊胞中保存的早期卵裂的动物胚胎。此有力地论证了我国南方埃迪卡拉纪陡山沱组动物胚胎化石的保存,并将动物化石记录推前至632Ma前。为了区别Tianzhushania的已知形态种,新建Tianzhushania fissura sp.nov.和Tianzhus-haniaconferta sp.nov.两个新种,它们分别以含有不同数量卵裂细胞为特征。它们在陡山沱组中、上部的集中保存,可能与海平面变化或其它地质事件密切相关。而这需要更多有效年代地层资料加以合理解释。

人脑内猪囊尾蚴囊胞的扫描电镜观察

目的 报告用扫描电镜观察脑内寄生的猪囊尾蚴囊胞超微结构的结果。方法 患者在右颞肌下颅内减压术中取出 2个猪囊尾蚴囊胞 ,将其囊胞制备成扫描样品 ,在扫描电镜下观察。结果 囊的厚薄不均、表面微毛形态各异 ,见有分泌口。囊壁横断面有圆形管道。囊内面有分泌颗粒、网状纤维及绒球状宿主细胞。结论 有助于探求其结构与功能的关系 。

何氏血竭消聚汤加减治疗妇科囊胞型癥瘕82例

1临床资料 本组82例均为2008-01-2013-12本院中医妇科门诊和住院中医妇科会诊病例,年龄25-67岁,平均49.2岁,病程2月-6年。主证[1]：阴道指诊时可触及不坚而活动呈囊泡状块物,时聚时散,触痛不甚明显,自觉胀痛也不剧,时有带下量多色青,月经或量多,或量减;或经久不孕,面色发白,精神郁闷不振,舌润苔薄,脉弦而滑。

基于全果综合利用的瓯柑囊胞饮料品质提升技术研究

瓯柑(Citrus suavissima Hort. ex Tanaka),浙江省温州市地方特色品种,国家地理标志产品。在我国最早的柑橘类专著《橘录》中就有记载,栽培历史超2400年,被宋元明清四朝列为贡品[1]。柑橘囊胞饮料是在饮料水相中添加柑橘囊胞,形成的一种液固相融的独特饮料门类。因其富含膳食纤维,并具有真实的感观与独特的爆汁口感,深受消费者欢迎。

超高压处理对橙囊胞香气成分的影响

为了了解橙囊胞经超高压处理后香气成分产生的变化及其原因,采用气相色谱-质谱联用分析法检测分析其中的香气成分。结果表明:橙囊胞的主要香气成分为柠檬烯、凡伦橘烯、人参烯、丁酸乙酯、葵醛、香芹酮、芳樟醇和松油醇,其中柠檬烯占62.68%,是最主要的香气成分。超高压处理后,香气成分发生变化,醇类质量分数变化相对较少,烯类和酯类的种类和数量都明显减少,其中柠檬烯经500 MPa高压处理5 min后质量分数下降了89.8%,而醛酮类则都增加,其中香芹酮经300 MPa处理15 min后质量分数增加了13倍,上述影响作用跟高压造成的温度升高有关,同时结果也表明,300 MPa超高压处理5 min的样品更接近对照样品的风味。

桔子囊胞罐头的生产要点及质量评定

柑桔作为人们喜欢的一种水果，随着其种植面积的扩大及产量的提高，以此为原料的加工制品及深加工产品不断涌现，继糖水桔子罐头后，又出现了桔汁、粒粒桔等饮品系列。桔子囊胞罐头的开发生产，既解决了桔子罐头生产中缺陷桔片，破碎桔片的出路，降低了桔子罐头的生产成本...

囊胞性纤维症患者对抗微生物的关键发现

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2007／5／7）报道，英国伦敦西安大略大学医学院的舒伯特医药与牙医教育学校的微免专家Miguel Valvano教授及其同事发现一个能够有效对抗伯克霍尔德氏茵（Burkholderia cenocepacia）的方法。

血浆胞外囊泡中LncRNA Linc01305在乳腺癌中的表达及意义

目的:筛选乳腺癌(breast cancer,BC)血浆胞外囊泡中差异表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA),并验证其诊断BC的价值。方法:采用电镜、粒径分析、Western blot检测等方法鉴定血浆样本中制备的胞外囊泡。对8例BC病人和8例健康人的血浆胞外囊泡进行LncRNA测序分析。qRT-PCR测定65例BC病人和65例健康对照样本以及鉴别诊断疾病乳腺纤维腺瘤、乳腺囊性增生病、浆细胞性乳腺炎病人的胞外囊泡中Linc01305的表达水平。qRT-PCR检测乳腺癌细胞系中Linc01305的表达水平。qRT-PCR检测BC病人术前与术后血浆胞外囊泡中Linc01305的表达水平。统计分析BC病人血浆胞外囊泡Linc01305的表达量与临床病理特征的相关性。结果:电镜、粒径分析、Western blot检测发现典型的胞外囊泡特征。测序结果显示Linc01305在BC病人血浆胞外囊泡中的表达水平高于健康人,qRT-PCR结果确认了测序结果,并且Linc01305在乳腺癌细胞系中高表达(P均<0.01),而在BC病人手术切除肿瘤后表达降低(P<0.01)。BC病人血浆胞外囊泡Linc01305的高表达与BC的肿瘤大小、TNM分期、浸润深度和淋巴结转移相关。血浆胞外囊泡Linc01305诊断BC病人的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.7712(P<0.0001)。结论:Linc01305在BC病人血浆胞外囊泡中高表达,且与肿瘤大小、TNM分期、浸润深度和淋巴结转移相关,有望成为BC新的诊断标志物。

日本血吸虫胞外囊泡的提取、鉴定及对人肝星状细胞影响的初探

旨在探讨日本血吸虫(Schistosoma japonicum)胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)的提取方法及特性。本研究利用尺寸排阻法收集Sj EVs,通过透射电镜、蛋白质谱对Sj EVs的形态学、蛋白谱进行解析并对鉴定到的蛋白进行生物信息学分析。将PKH67绿色荧光标记的Sj EVs与人肝星状细胞LX-2共孵育,观察细胞摄取Sj EVs的情况,并对细胞中虫源miRNAs及细胞内纤维化因子进行检测,初步探讨Sj EVs对肝星状细胞的影响。结果表明:Sj EVs呈圆形或椭圆形囊泡结构,内含EVs标志蛋白。生物信息学分析结果显示,Sj EVs蛋白可能与细胞进程、代谢等途径密切相关。Sj EVs与人肝星状细胞LX-2共孵育结果显示,LX-2细胞可成功摄取Sj EVs,且定量反转录PCR(RT-qPCR)结果显示LX-2细胞中部分虫源miRNAs显著升高,纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原纤维α1(Collagen typeⅠalpha 1,Col1α1)和Ⅲ型胶原纤维α1(Collagen typeⅢalpha 1,Col3α1)极显著升高,提示肝星状细胞活化。综上,本研究为解析Sj EVs在宿主肝纤维化中的作用提供了依据,为进一步探究Sj EVs的潜在功能奠定了基础。

细菌胞外囊泡与宿主的互作机制研究进展

细菌胞外囊泡(BEVs)是一类由细菌分泌的可携带和转运各种物质的纳米级颗粒,在母源细菌与宿主互作中发挥重要作用。研究发现,BEVs可携带母源细菌源抗原成分参与免疫反应信号通路,实现对宿主的免疫调节作用,为疫苗开发提供了新思路;肠道中的BEVs可刺激黏蛋白产生,增强肠道屏障效应、降低肠道炎症,既能作为修复肠炎患者肠道屏障功能的潜在药物,也可作为评估肠道损伤情况的标志物;BEVs还可通过调节糖和脂质代谢的信号通路调节宿主代谢。反过来,宿主也能影响细菌及其BEVs的分泌。本文综述了BEVs的组成及其在宿主免疫调节、肠道屏障功能和代谢过程中作用机制,以期为BEVs在临床和生产应用中提供参考。

多房棘球蚴囊泡来源EVs及其emu-miR-10-5p促进小鼠肝星状细胞活化

目的明确多房棘球绦虫囊泡来源胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)及其emu-miR-10-5p在体外调节HSCs活化中的作用。方法小鼠腹腔注射原头节构建继发性多泡型包虫病模型,以小鼠体内病灶为材料培养多房棘球绦虫囊泡并进行PCR鉴定。透射电镜观察培养囊泡组织中胞外囊泡结构。差速-超速离心法分离囊泡培养上清中EVs,透射电镜、纳米粒径以及Western blot对分离EVs进行鉴定。CCK-8检测不同浓度EVs作用后HSCs活力。EVs作用于HSCs后RT-qPCR和Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平。生物信息学分析确定emu-miR-10-5p为特异性miRNA。过表达emu-miR-10-5p后EdU检测HSCs增殖,RT-qPCR个Western blot检测细胞中α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平。干扰囊泡组织中emu-miR-10-5p后提取培养上清液中EVs作用于HSCs后,检测HSCs细胞中α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平。结果成功通过小鼠体内病灶材料培养出多房棘球蚴囊泡,经PCR扩增特异性基因证实为多房棘球绦虫来源。TEM观察培养囊泡表面有较多的囊状结构。通过差速-超速离心分离出多房棘球蚴囊泡来源EVs,并经TEM证实为球形、膜状结构。囊泡来源EVs能被HSCs内化,并促进HSCs增殖和活化。通过综合分析多房棘球绦虫感染小鼠血清、棘球蚴组织、棘球蚴囊泡来源EVs、生发层细胞、原头节miRNA测序结果,发现emu-miR-10-5p在上述成分中均存在表达,并通过RT-qPCR证实emu-miR-10-5p在多房棘球蚴囊泡来源EVs中存在的量较高。进一步研究证实过表达emu-miR-10-5p能促进HSCs增殖,增加HSCs中α-SMA、Collagen I和CollagenⅢmRNA及蛋白表达水平。而干扰囊泡中emu-miR-10-5p后从培养上清液中提取的EVs未增加α-SMA、Collagen I和CollagenⅢmRNA及蛋白表达水平。结论多房棘球蚴囊泡来源EVs及emu-miR-10-5p能够促进HSCs活化。

母乳胞外囊泡促进乳双歧杆菌BB-12生长的转录组学分析

胞外囊泡是母乳中的重要功能成分之一,作者所在实验室前期研究发现,母乳胞外囊泡能够显著促进乳双歧杆菌BB-12的生长,但具体机制不清楚。作者采用超速离心法与超滤法相结合从母乳中提取胞外囊泡,通过纳米颗粒追踪技术、透射电镜以及蛋白质免疫印迹法对母乳胞外囊泡进行了鉴定表征。利用转录组学技术分析母乳胞外囊泡促进乳双歧杆菌BB-12生长的关键基因。研究发现,添加母乳胞外囊泡后,乳双歧杆菌BB-12菌体中ABC寡肽转运系统相关基因pstC、pstA、metI,淀粉和蔗糖代谢相关基因BIF_02090,磷酸戊糖途径相关基因prsA、BIF_01321,D-氨基酸代谢相关基因murD、BIF_02122,乙醛酸和二羧酸代谢相关基因pccA的表达显著上升。结果表明,母乳胞外囊泡可能作为一种新型益生元促进婴幼儿肠道中双歧杆菌的生长,为母乳胞外囊泡在新一代母乳化奶粉中的开发应用提供了理论依据。

十溴联苯醚暴露通过胞外囊泡装载miR-221促进三阴性乳腺癌细胞转移

目的:探讨环境污染物十溴联苯醚(BDE-209)暴露促进三阴性乳腺癌(TNBC)恶性进展的机制。方法:将TBNC细胞分为空白对照组和BDE-209暴露组。超速离心法提取胞外囊泡,分别应用扫描电子显微镜和蛋白质印迹法对提取的胞外囊泡进行鉴定,采用纳米颗粒跟踪技术检测胞外囊泡生成量,细胞划痕实验和Transwell小室实验检测与胞外囊泡共培养后TNBC细胞的迁移能力和扩散能力,定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测囊泡中的miR-221表达水平,蛋白质印迹法检测共培养后TNBC细胞中基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达水平。结果:与空白对照组比较,2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209暴露可显著增加胞外囊泡的生成(均P<0.05),其中200.00 ng/mL BDE-209暴露诱导释放的胞外囊泡共培养的细胞迁移率较空白对照组提高86%,穿膜细胞数提高至1.32倍,miR-221表达水平提高至2.71倍,MMP9表达水平提高至1.62倍(均P<0.05)。转染抗miR-221抗体能降低BDE-209暴露诱导生成的胞外囊泡内miR-221表达水平,使BDE-209促进MDA-MB-231细胞迁移的能力被显著抑制。结论:BDE-209暴露可通过增加胞外囊泡的生成及装载miR-221增强TNBC细胞的迁移能力,促进TNBC细胞转移。

原代成骨细胞来源胞外囊泡促进破骨细胞分化

目的:观察原代成骨细胞来源胞外囊泡(OB-EV)对破骨细胞增殖、分化的作用,探究胞外囊泡参与成骨细胞和破骨细胞之间通信的可能分子机制。方法:采用酶消化法分离原代成骨细胞,并以β-甘油磷酸钠、抗坏血酸、地塞米松成骨诱导液诱导培养,通过碱性磷酸酶染色及茜素红S染色鉴定成骨细胞分化及矿化功能。收集成骨细胞培养上清液,采用超速离心法提取囊泡分泌物,并通过透射电镜观察囊泡形态,蛋白质印迹法鉴定胞外囊泡表面特征性标志物肿瘤易感基因101(TSG101)、ALG-2相互作用蛋白X(Alix)和分化抗原9(CD9)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测OB-EV对RAW264.7的增殖作用。进一步通过蛋白质印迹法检测OB-EV与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)联合作用后RAW264.7破骨分化标志物的表达水平。将OB-EV处理的小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察并比较破骨细胞数,明确OB-EV对破骨细胞分化的影响。结果:透射电镜观察提取的OB-EV呈直径为30~150 nm的双层杯状结构,且TSG101、Alix、CD9呈阳性表达。CCK-8实验结果显示高浓度(20μg/mL以上)OB-EV抑制RAW264.7增殖(P<0.05)。蛋白质印迹法检测发现RAW264.7中c-Fos、活化T细胞核因子(NFATc1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)等破骨细胞分化标志蛋白表达明显增加,且随OB-EV浓度增加而增加(P<0.05)。此外,将OB-EV与RANKL联合作用于BMM,结果显示TRAP阳性细胞较RANKL对照组显著增多(P<0.05)。结论:OB-EV可促进破骨前体细胞向破骨细胞分化,但高浓度OB-EV会抑制细胞增殖。

AnxA5在成骨细胞胞外囊泡介导骨形成中的作用及机制研究

目的骨质疏松是一种以骨量减少、骨密度降低为主要特征的疾病,常伴随着骨组织中力学微环境的改变。胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是胞间通讯的重要信使,在骨形成过程中发挥至关重要的作用。本研究拟基于骨质疏松模型探索成骨细胞EVs在骨形成中的作用及其机制。方法通过双侧去卵巢构建骨质疏松小鼠模型,收集正常和骨质疏松成骨细胞释放EVs与骨髓间充质干细胞共培养,通过茜素红染色检测其成骨能力的变化。蛋白质组学检测EVs内容物组分变化。采用MC3T3-E1构建敲降膜联蛋白A5(Annexin A5,Anx A5)的成骨细胞株,通过Western blot检测成骨分化标志物的表达,通过NTA和BCA检测EVs的释放,通过TEM、免疫荧光检测EVs的黏附。通过尾静脉给骨质疏松小鼠注射Anx A5重组蛋白检测骨质量的变化。结果发生骨质疏松后,成骨细胞EVs的促矿化能力显著减弱。内容物组分分析发现,与正常小鼠相比,骨质疏松小鼠成骨细胞EVs中Anx A5表达显著减少。敲除Anx A5后,成骨细胞MC3T3-E1形成矿化结节的数量显著减少;EVs的释放数量减少,EVs的ALP活性减弱,EVs与细胞外基质的黏附数量也明显变少。将Anx A5注射入骨质疏松小鼠后,小鼠的骨密度、骨小梁数量等均显著增加。结论Anx A5通过介导骨矿化过程中胞外囊泡的释放和黏附促进骨形成。

肿瘤细胞胞外囊泡DNA特征分析

从肺腺癌A549细胞培养上清液中分离胞外囊泡(EVs),通过动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)分析得到EVs的大小约为100 nm,并在样品中检测到EVs的特异性标记TSG101。通过琼脂糖凝胶电泳检测发现,胞外囊泡DNA(evDNA)分子片段的大小在12 kb左右。根据evDNA测序数据选择特定evDNA开展PCR试验,实现其有效检测。对EVs进行脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase I)或ATP依赖的DNA酶(PS酶)处理,证实evDNA以线性方式存在于囊泡外侧。通过末端转移酶(TdT)向evDNA末端添加poly-dA,使用oligo-dT珠对其进行捕获,进一步证明其线性表面分布。此外,建立TetO-DNA/TetR-GFP可视化系统,在荧光显微镜下观察到TetR-GFP蛋白与EVs上TetO-DNA的结合。流式细胞术和PCR试验证实,可用TetR-GFP蛋白实现对携带TetO-DNA EVs的富集。本研究证实了evDNA以线性的形式分布在EVs表面,为进一步研究其生物学功能提供了重要基础。

脂肪间充质干细胞来源的胞外囊泡治疗急慢性肝损伤研究进展

肝病包括急性肝衰竭(ALF)、慢性肝病以及终末期肝病等,各类肝病极大危害了人类健康,目前ALF和终末期肝病治疗的金标准仍是肝移植,但受到供肝短缺、免疫排斥、终身免疫抑制治疗等限制,急需寻找新的替代疗法。间充质干细胞(MSCs)具有强大的增殖能力与多向分化潜能,可以减轻肝损伤、修复肝组织,具有良好的应用前景。

基于胞外囊泡治疗诊断学智能药物递送工具

胞外囊泡(EVs)作为细胞外的膜颗粒,在细胞间信号传导中起着至关重要的作用。研究表明,EVs有可能用作特定器官(如内耳)的生物标志物或药物递送系统。在压力与健康状态下,EVs释放的分子不同,这些活性分子能够识别机体的患病状态。研究表明,可以利用EVs将药物输送到难以到达的器官,如耳蜗感觉毛细胞和大脑,因为它们能够穿过血迷路和血脑屏障。在本综述中,我们总结了有关EVs的生物组成和发生、分离技术、表征手段、作为药物输送载体的潜在治疗应用、药物加载方法及在听觉系统内耳治疗的应用潜力。

人脐带间充质干细胞源胞外囊泡对屋尘螨诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞源胞外囊泡(human umbilical cord mesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles, hUCMSC-EVs)对屋尘螨(house dust mite, HDM)诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:超高速离心法提取hUCMSC-EVs;透射电镜观察hUCMSC-EVs形态;蛋白质印迹法检测胞外囊泡标志物肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)表达。将15只雌性BALB/C小鼠随机均分为3组,每组5只,分别为对照组(不做任何处理)、HDM组(HDM处理)和HDM+EVs组(HDM+hUCMSC-EVs处理);苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色法分别观察各组小鼠肺脏气道炎性细胞浸润和杯状细胞化生;收集各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)并对总细胞和嗜酸性粒细胞进行计数;ELISA法检测BALF中IL-4和IL-13含量;蛋白质印迹法检测肺脏中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和闭锁连接蛋白1(ZO-1)表达。将人支气管上皮BEAS-2B细胞株分为对照组和EVs组(DIO标记的hUCMSC-EVs处理),共聚焦显微镜观察细胞对DIO标记的hUCMSC-EVs的内吞情况。另将BEAS-2B细胞分为3组:对照组、HDM组(HDM处理)、HDM+EVs组(HDM+hUCMSC-EVs处理),蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和ZO-1表达。结果:hUCMSC-EVs呈杯托样膜性结构且表达HSP70和TSG101。与HDM组相比,HDM+EVs组小鼠气道炎性评分、PAS评分、BALF中总细胞和嗜酸性粒细胞数、IL-4和IL-13含量均显著下调(P均<0.01),而肺脏组织中E-cadherin和ZO-1表达明显增加(P<0.05)。体外实验显示hUCMSC-EVs可被人支气管上皮BEAS-2B细胞内吞;与HDM组相比,HDM+EVs组BEAS-2B细胞中E-cadherin和ZO-1表达明显增加(P<0.01或<0.05)。结论:hUCMSC-EVs可显著改善HDM诱导的小鼠气道周围炎性细胞浸润和气道杯状细胞化生。

circCdr1as通过胞外囊泡介导在急性心肌梗死后心肌细胞损伤修复中的作用研究

探讨circCdr1as通过胞外囊泡介导在急性心肌梗死后心肌细胞损伤修复中的机制。方法 设H9C2心肌细胞组、细胞囊泡组、circCdr1as囊泡组,各组细胞每孔设6个平行样,培养72h。试验结束后,测定细胞增长率、单克隆形成数目、凋亡水平,心肌酶水平以及circCdr1as、STAT3水平。结果 细胞囊泡组OD值、存活率水平、单克隆形成数目、circCdr1as mRNA、STAT3 mRNA蛋白表达水平与H9C2心肌细胞组比较,无统计学意义(P>0.05);circCdr1as囊泡组OD值、存活率水平、单克隆形成数目、circCdr1as mRNA、STAT3 mRNA蛋白表达水平明显高于H9C2心肌细胞组、细胞囊泡组(P<0.01)。细胞囊泡组凋亡率、心肌酶CK、LDH与H9C2心肌细胞组比较,无统计学意义(P>0.05);circCdr1as囊泡组凋亡率、心肌酶CK、LDH明显低于H9C2心肌细胞组、细胞囊泡组(P<0.01)。结论 心肌介导的 circCdr1as 通过激活 TRIM59/STAT3 信号传导诱导心肌细胞增殖;在治疗心肌细胞缺失的心脏病时,心肌细胞间 circCdr1as 递送的潜力是急性心肌梗死后心肌细胞修复的合理替代策略。