鸭坦布苏病毒囊膜糖蛋白结构域3(ED3)单克隆抗体的制备及其中和活性分析

目的以纯化的重组鸭坦布苏病毒(DTMUV)囊膜糖蛋白结构域3(ED3)蛋白作为免疫原,制备ED3蛋白的单克隆抗体并研究其中和活性。方法利用反转录PCR扩增DTMUV AH-F10株ED3基因,构建重组表达载体pET32a-ED3并转化至表达菌株Rosetta,诱导表达后利用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合,采取有限稀释法筛选杂交瘤细胞并大量制备单克隆抗体。利用Western blot法、间接免疫荧光法、ELISA及分型试剂盒对单克隆抗体进行鉴定并通过病毒中和试验检测抗体中和效价。结果成功表达DTMUV ED3蛋白,并制备3株ED3蛋白的鼠源单克隆抗体B9D10C7、B9D7B8G10、B9D7B8F11,其亚型分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,腹水间接ELISA检测抗体效价均达到1∶51200,且能够识别DTMUV的E蛋白,具有一定的中和活性。结论获得3株特异性强、敏感性高的DTMUV ED3的单克隆抗体。

白细胞介素3对猪瘟病毒E_2基因疫苗免疫增强作用的研究

以昆明系小白鼠为试验动物，观察了白细胞介素３（ＩＬ３） 对猪瘟病毒Ｅ２ 囊膜糖蛋白（ ＨＣＶ Ｅ２） 基因疫苗免疫效果的增强作用。用ＤＮＡ 重组技术将ＨＣＶ Ｅ２ 基因和小白鼠ＩＬ３ 基因克隆到ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ 质粒，因在两者之间有脑心肌炎病毒（ＥＭＣＶ） 的核糖体进入位点（ＩＲＥＳ） 片段，可得到ＨＣＶ Ｅ２ 基因和小白鼠ＩＬ３ 基因双表达质粒ｐＩＲＳＴ ＩＬ３ ，用ｐＩＲＳＴＩＬ３ 免疫小白鼠后，经ＥＬＩＳＡ 法检测免疫小白鼠血清中抗ＨＣＶ Ｅ２ 抗体效价。结果显示，ＩＬ３ 能显著提高ＨＣＶ Ｅ２ 基因疫苗的免疫效果，表明ＩＬ３ 可作为ＨＣＶ Ｅ２ 基因疫苗的细胞因子佐剂。