应用FTA法检测水产品中吸虫囊蚴的初步研究

目的建立一种新的简便、快速FTA法检测水产品中吸虫囊蚴。方法分别用FTA法和试剂盒法提取DNA,用定量PCR检测吸虫ITS2基因,区分淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴、东方次睾吸虫囊蚴和溪蟹中并殖吸虫囊蚴。结果用FTA法能检测到每g水产品中1个吸虫囊蚴,定量PCR技术能区分水产品中3种不同的囊蚴,FTA法和试剂盒法具有相同的检测效果。结论 FTA法能快速检测水产品中吸虫囊蚴,具有简便、快速且敏感性高的优点,适宜海关防疫检验。

福建省淡水溪蟹种类、地理分布及其携带并殖吸虫囊蚴

目的查清福建省淡水蟹类在34个各县市分布及其携带并殖吸虫情况。方法广泛收集各地溪蟹标本并鉴别种类,检查蟹体内感染并殖吸虫囊蚴种类与感染率。结果与结论发现在福建省已报告有福建华溪蟹等17种溪蟹和7种待报告的华南溪蟹属等新种。这些蟹体内发现感染有卫氏并殖等7种并殖吸虫囊蚴,总感染率为43.49%(3483/8009),显示福建省是一个并殖吸虫虫种和第二中间宿主淡水蟹类繁多的省份,人的感染也是此起彼伏的散在发生。

基于核糖体DNA ITS区和COX1基因鉴别华支睾吸虫囊蚴

目的基于核糖体DNA ITS区和COX1基因,PCR鉴别鱼体内华支睾吸虫囊蚴。方法于2013年5月底采集广西横县某水库的麦穗鱼,用消化法从鱼肉组织中分离单个华支睾吸虫囊蚴及其他吸虫囊蚴;PCR检测华支睾吸虫核糖体DNA ITS区和COX1基因,并分析检测的灵敏性和特异性。结果分离到不同发育阶段的华支睾吸虫囊蚴并经PCR检测证实。用针对核糖体DNA ITS区和COX1基因的PCR均能检测到单个华支睾吸虫囊蚴DNA,其特异性扩增条带大小分别为437/549、156/249和195/166 bp。用核糖体DNA ITS1和ITS2区的通用引物和特异性引物扩增华支睾吸虫囊蚴DNA的阳性数之比分别为0.905和0.952。针对COX1基因的特异性扩增均检测到目标DNA,并且扩增条带较亮。用该方法对其他吸虫囊蚴检测的对比试验显示特异性引物均未出现任何非特异性扩增反应;用ITS区通用引物检测其他吸虫囊蚴则显示出严重的非特异性扩增反应。结论通过形态观察结合PCR法识别出了不同发育阶段的华支睾吸虫囊蚴。用华支睾吸虫核糖体DNA ITS区的特异性引物进行PCR检测的灵敏性和特异性均优于相应通用引物。针对COX1基因的特异性PCR检测的灵敏性和特异性与核糖体DNA ITS区的检测结果相当。

广西柳江河鱼类华支睾吸虫囊蚴感染情况

2008年3月～2009年3月,在广西柳江河段上的三江县、融安县、融水县、柳城县、柳州市和象州县设点,采集各地河道内的鱼类,用直接压片法和消化法检查其感染华支睾吸虫的情况。共捕获鱼16204尾,经鉴定分属9科27属35种,其中32种不同程度感染华支睾吸虫,感染率为10.5%,感染度为4.6个/g。麦穗鱼(Pseudoras bora parva)的感染率(21.5%)和感染度(9.9个/g)最高,其次为宽鳍鱲(Zacco platypus),感染率为17.8%,感染度为8.9个/g。各河段感染率间的差异有统计学意义,象州县河段感染率(12.3%)较高,三江县河段(9.1%)和柳州市区河段(9.7%)感染率较低。统计学分析表明,夏、秋两季鱼的感染率较高,春、冬两季较低;中、上水层鱼类的感染率较高,下水层鱼类较低;杂食性和草食性鱼类的感染率较高,肉食性鱼类较低。

嫩江流域齐齐哈尔段野生淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染现状

于2013年5～11月从嫩江流域齐齐哈尔段的绰尔河、雅鲁河、乌裕尔河、阿伦河和音河采集野生淡水鱼,直接压片法检查华支睾吸虫囊蚴感染情况,人工消化法获取囊蚴。40只雌性昆明小鼠感染华支睾吸虫囊蚴（30～40个/鼠）,36d后解剖小鼠,收集肝胆管内的虫体,醋酸洋红染色后,镜下观察。共采集到9种1175尾野生淡水鱼,华支睾吸虫囊蚴总感染率为51.2%（602/1 175）。除鲶鱼外,其他鱼种均有不同程度感染,其中蛇鮈感染率最高,为82.7%（91/149）;葛氏鲈塘鳢的感染率最低,为7.1%（6/84）。不同鱼种间感染率差异有统计学意义（P〈0.05）。乌裕尔河段野生淡水鱼感染率最高,为65.7%（218/332）;阿伦河段和音河段感染率最低,均为24.1%（67/278）（P〈0.05）。鲫鱼和麦穗鱼全身各部位（除脑外）均易感,蛇鮈的感染部位主要在鱼鳞,在拉氏鱥的脑组织内首次发现囊蚴感染。感染小鼠实验结果显示,小鼠肝胆管内发现华支睾吸虫成虫,感染率为85.0%（34/40）。镜下清晰可见华支睾吸虫吸盘、消化系统和生殖系统等结构。

感染并殖吸虫囊蚴唐氏华南溪蟹新种(Huananpotamon tangi sp．nov)记述(十足目：溪蟹科)

目的本文记叙了采自福建省延平区和三元区的华南溪蟹属Huananpotamon一新种——唐氏华南溪蟹。除留模式标本及"平台"标本外,其他的均作寄生虫检查,模式标木存福建省疾病预防控制中心。孳生于海拔400-800m的小溪中。延平区和三元区两地新种蟹体内分别感染卫氏并殖吸虫二、三倍体型及斯氏并殖吸虫囊蚴,感染率为20.0%(2/10)和33.33%(7/21),平均每只蟹检出3.6个和4.3个囊蚴。本种与铲肢华南溪蟹近似,但后者第一腹肢末节呈铲形,而新种呈不等边三角形。

华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库的构建及鉴定

目的 构建华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库,为筛选特异诊断抗原和疫苗候选抗原奠定基础。方法提取华支睾吸虫囊蚴总RNA;用Clontech公司SMARTTM cDNA文库构建试剂盒并按其操作方法进行,进行反转录合成双链cDNA。PCR产物经蛋白酶K消化、纯化后,进行SfiI酶切;用ChromaSpin 400柱将酶切产物进行分级分离,经1.1％琼脂糖凝胶电泳鉴定,回收0.4～4kb的组分,并与λTriplEx2载体连接;连接产物经体外蛋白包装,产生未扩增文库;检测未扩增文库滴度和重组效率后,进行文库的扩增,并测定扩增文库的滴度;随机挑取9个噬菌斑,用载体克隆位点两端的引物进行PCR扩增,以检测所构建的cDNA文库的质量。结果 未扩增文库滴度达7.0×107pfu/ml,扩增文库滴度达2.5×108pfu/ml;用载体两端的引物进行PCR鉴定,结果显示:扩增文库中,含1kb以上的占30％左右,1kb～500bp占69％。结论已成功地获得一高质量的华支睾吸虫囊蚴cDNA表达文库。

辽西地区野生淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况

从辽西女儿河、辽河和狗河采集野生淡水鱼共1 131尾,直接压片法检查华支睾吸虫囊蚴感染率,人工消化法检查感染度。结果显示,6种淡水鱼全部感染华支睾吸虫,麦穗鱼的感染率最高(82.8%,216/261),洛氏鱥的感染率最低(1.5%,2/137)。感染度最高的为鲈塘鳢(平均2 390个/尾),最低的为洛氏鱥(平均30个/尾)。以狗河和女儿河的野生淡水鱼感染率为高。

γ射线控制华支睾吸虫囊蚴感染性的效果

用0-0.20 kGy钴-60γ射线对含华支睾吸虫囊迹的鱼体和从鱼体中分离所得的囊蚴(离体囊蚴)分别进行照射,观察照射囊蚴在宿主(动物)体内发育的能力。囊蚴以灌胃法感染豚鼠或大鼠。用粪检虫卵和尸剖动物检查虫体的生物学方法,判定控制华支睾吸虫囊蚴感染性的最小有效剂量。结果表明,照射离体囊蚴的最小有效剂量为0.05kGy。照射鱼体组织内囊蚴的半数致死量为0.05kGy,最小有效剂量为0.15kGy。我国北方、中部和南方的该虫株囊蚴对钴-60γ射线的敏感性无显著差异,认为用钻-60γ射线0.15kGy剂量可完全控制鱼体中华支睾吸虫囊蚴的感染性,因而辐照技术可作为预防医学中的一种方法。

斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段的克隆和序列分析

目的 克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,获得其序列 ,并进行序列分析。方法 利用简并引物 ,进行RT PCR ,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。结果 RT PCR扩增出了一 5 0 0bp左右的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 498bp。推导出的氨基酸序列长 166;氨基酸序列的同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。

淡水鱼虾华支睾吸虫囊蚴感染情况调查

采集吉林省白城地区镇赉县周边6个鱼塘的各种鱼类,用直接压片镜检法和人工消化法分别对采集回来的麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴的情况进行统计调查,结果表明,感染率最高、感染强度最大的鱼塘是四方坨六分场。随即对四方坨六分场鱼塘中各种鱼类华支睾吸虫囊蚴感染情况也采用同样方法进行调查,结果显示,感染率最高的是麦穗鱼、银飘鱼、尖头鱥,均为100%;其次是细鳞鱼,为80%;其他种类的鱼虾均未检测到有华支睾吸虫囊蚴寄生。

不同剂量的华支睾吸虫囊蚴感染大鼠的实验研究

目的观察不同剂量的华支睾吸虫囊蚴感染后大鼠粪便中虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分离采自疫区麦穗鱼体内的囊蚴,分别以50、100和200个囊蚴经口感染3组大鼠,同时设对照组。生理盐水涂片法检查大鼠粪便中虫卵,虫卵检出率达100%时宰杀动物,取肝脏作组织切片。结果感染组大鼠感染后第20d粪便虫卵检出率为78.8%;第30d为90.9%;第40d为96.9%;第45d检出率为100%。对照组均未检出虫卵。结论感染后第45d虫卵检出率达高峰;200个囊蚴可作为动态观察宿主状态的感染剂量。

华支睾吸虫囊蚴在大鼠不同消化液的脱囊试验

目的研究华支睾吸虫在大鼠不同部位消化液内的脱囊情况。方法以大鼠的新鲜胃液、十二指肠液、小肠上段液、小肠中段液、小肠下段液和大肠液作为脱囊液,模拟体内消化道环境,观察华支睾吸虫囊蚴在30min后的脱囊情况。如果脱囊率小于10%,重复试验,把作用时间延长为4h,其他条件相同。结果华支睾吸虫囊蚴在胃液中30min不能脱囊,延长时间至4h仍未见脱囊;在十二指肠液、小肠上段液、小肠中段液、小肠下段液和大肠液中30min均能大量脱囊,脱囊率分别在97.7%、94.6%、95.9%、91.7%、93.8%,各组间没有显著性差异;脱囊的幼虫活力较好。结论华支睾吸虫囊蚴在胃液中4h内不能脱囊,能在肠液中30min内成功脱囊,脱囊幼虫活力较好;采用新鲜肠液模拟体内环境也是华支睾吸虫囊蚴体外脱囊的一种好方法。

肝片形吸虫囊蚴培育及其中间宿主的研究

本文报告了广西肝片形吸虫中间宿主的种类为小土蜗螺和斯氏萝卜螺。对不同剂量毛蚴感染中间宿主椎实螺的存活率，椎实螺的繁殖及其对干旱的抵抗力；尾蚴的逸出时间、数量；囊蚴对终宿主山羊羔的感染情况及其特点进行了观察。

超高压对肝吸虫囊蚴杀灭作用的研究初报

当前生活水平日益提高,人们吃腻了熟食,开始向食生猛海鲜方向发展。所谓生猛,即强调鲜、活、生、嫩。如炝、涮、灼、烫、醉、渍、糟、烤、甚至于生食。“杀生鱼”(生鱼片)则是最常见的一种生食食品,但是在东南亚,特别是我国肝吸虫流行广泛,危害严重,有23个省市自治区有此病流行,人群感染率5.9～35％,患病后引起肝区不适,阻基性黄胆。

深圳市南山区食用淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况调查

目的了解深圳市南山区食用淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况,为疾病控制部门采取预防措施提供参考资料。方法取6种常见淡水鱼鱼肉,采用直接压片法和人工消化法检查囊蚴,再将囊蚴感染家兔进一步确证。结果共采集标本336份,其中白鲩(Ctenopharyngodonidellus)116条,鲫鱼(Carassiusauratus)82条,鲈鱼(Percocyprispingi)72条,鳊鱼(Parabramispkinesis)28条,鲤鱼(Cyprinuscarpio)25条,鲢鱼(Hypophthalmictuthysmolitrix)13条,大多数来自本地养殖场,但也有少数淡水鱼从中山、广州、东莞等地运来。结果发现所有该市产的淡水鱼均未检出华支睾吸虫囊蚴,而在来自中山的1条白鲩中,共查出囊蚴1440个,阳性鱼感染度为7.1个/g,总体感染率为0.3%。结论深圳市本地产食用淡水鱼均未受华支睾吸虫囊蚴感染,但少数来自周边地区的淡水鱼仍有感染。