四分子交联体Tspan-5的研究进展

四分子交联体Tspan-5属于四分子交联体家族TM4SF的成员之一。研究表明，Tspan-5在神经细胞分化成熟、肿瘤细胞转移和破骨细胞生成中发挥重要作用。Tspan-5还表达于绒毛外滋养细胞中，并且影响滋养细胞的侵袭，提示Tspan-5可能在胚胎植入中起着重要作用。此外，研究发现Tspan-5与ADAM10相互作用，通过调节Notch活性进而改变细胞的侵袭和迁移性，这可能是Tspan-5发挥生物效应的分子机制。

四分子交联体5表达上调对结直肠癌细胞转移能力的促进作用观察

目的研究上调四分子交联体5(Tspan-5)表达对结直肠癌细胞转移能力的影响。方法构建Tspan-5基因真核表达载体Tspan-5/pEGFP-C1,采用基因转染技术上调Tspan-5在低转移潜能结直肠癌细胞株LST-R1中的表达,采用Western blotting和激光共聚焦鉴定转染结果。采用异质黏附实验研究LST-R1黏附性改变,趋化运动实验研究运动性改变,穿膜侵袭实验研究侵袭性改变,裸鼠肝转移模型研究肝转移能力改变。结果 Western blotting结果显示稳定转染重组Tspan-5真核表达载体的LST-R1细胞表达Tspan-5/EGFP重组蛋白,激光共聚焦显微镜观察显示重组蛋白定位于细胞膜。异质黏附和趋化运动实验显示,上调Tspan-5表达可显著增强LST-R1细胞在基底膜主要成分Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、纤连蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)、玻连蛋白(VN)上的黏附性(P<0.001)及运动性(P<0.001),并可增强LST-R1细胞的侵袭性(P<0.001)。体内肝转移模型显示,上调Tspan-5表达可显著促进LST-R1细胞在裸鼠体内的肝转移能力(P<0.001)。结论 Tspan-5在结直肠癌细胞的转移中发挥重要作用。

四分子交联体家族成员9在滋养细胞中的表达及其意义

目的探讨四分子交联体家族成员9(TM4SF9)蛋白在滋养细胞中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测TM4SF9蛋白在早孕绒毛,葡萄胎,侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达情况。结果(1)在早孕绒毛,TM4SF9蛋白仅表达于细胞滋养层细胞,而在合体滋养层细胞则未见表达;(2)TM4SF9蛋白在早孕绒毛、葡萄胎和侵蚀性葡萄胎,绒癌中的表达依次增强,强阳性率分别为0,10%,36.4%,100%,差异有统计学意义(P<0.001)。结论TM4SF9蛋白的表达可能与滋养细胞的侵袭行为有关,TM4SF9在滋养细胞肿瘤的侵袭中有一定作用。

四分子交联蛋白-5在母-胎界面表达与不明原因妊娠丢失相关性

目的检测四分子交联体蛋白5(Tspan-5)在母-胎界面中的表达情况,探讨该蛋白在胚胎种植中的作用,分析其与自然流产的相关性。方法观察组选择2018年1月至2020年1月就诊于广东省第二人民医院的稽留流产患者37例。对照组选取年龄和孕周相匹配的正常早孕患者及未妊娠育龄期女性。应用免疫组化法检测Tspan-5在绒毛、蜕膜及子宫内膜中的表达情况。结果Tspan-5在自然流产绒毛中表达水平显著低于正常早孕组,在自然流产蜕膜中表达水平却高于正常早孕组。Tspan-5在未妊娠月经期子宫内膜未见表达,而增生期、分泌期子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞可见表达;正常早孕蜕膜中Tspan-5表达水平略高于增殖期、分泌期子宫内膜,但差异无统计学意义(F=1.26,P=0.296)。结论Tspan-5在自然流产绒毛中表达水平下降,滋养细胞侵袭不足可能与自然流产的发生有关。母胎界面中Tspan-5表达异常与胚胎种植失败或妊娠丢失相关。

Tspan-5在高转移大肠癌细胞系中的表达及其对黏附行为影响的研究

目的:研究四分子交联体5(tetraspanin 5,Tspan-5)在不同转移潜能大肠癌细胞株中的差异表达及其与大肠癌细胞异质黏附能力的关系。方法:用Western-Blotting研究Tspan-5在3种细胞株的差异表达,用RNAi技术下调Tspan-5在高转移潜能LoVo细胞株中的表达,观察其对LoVo细胞在不同基底膜主要成分上黏附行为的影响。结果:Tspan-5在不同转移潜能大肠癌细胞株中存在差异表达,转移潜能最高的LoVo细胞株表达最强,转移潜能最低的LST-R1细胞株表达最弱,下调Tspan-5可显著抑制LoVo细胞在Collageon Ⅳ、Fibronectin、Laminin、Vitronectin上的黏附行为。结论:Tspan-5在高转移潜能的大肠癌细胞中过表达,并可调节大肠癌细胞的基底膜黏附力,其与大肠癌转移的关系值得进一步研究。

微小RNA16-5p靶向四分子交联体15基因通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究微小RNA-16-5p(miR-16-5p)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting法)检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞MG63、Saos2、HOS内miR-16-5p、四分子交联体15(TSPAN15)mRNA和蛋白表达。在MG63细胞中转染miR-16-5p或si-TSPAN15,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、TSPAN15、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。Starbase网站预测结合双荧光素酶基因报告实验分析miR-16-5p与TSPAN15的靶向关系。将miR-16-5p和pcDNA-TSPAN1共转染,评估高表达TSPAN15对过表达miR-16-5p诱导的MG63细胞增殖、迁移和侵袭的影响。两组间数据的比较采用t检验。结果与hFOB 1.19细胞(1.00±0.12)相比,MG63、Saos2、HOS细胞中miR-16-5p表达量(分别为0.32±0.05、0.40±0.04、0.45±0.06)明显降低(F=156.204,P<0.05),TSPAN15 mRNA和蛋白水平显著提高(F=71.718、110.350,均P<0.05)。过表达miR-16-5p明显减少MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量及细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量(F=150.136、117.228、154.971、89.479、98.373、130.880,均P<0.05)。敲减TSPAN15明显降低MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量(F=93.206、107.030、109.326、115.625、146.113、139.300,均P<0.05)。过表达miR-16-5p显著降低MG63细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白表达量(F=156.755、181.419,均P<0.05)。miR-16-5p靶向调控TSPAN15的表达。高表达TSPAN15可部分逆转miR-16-5p对MG63细胞内TSPAN15、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-AKT蛋白表达、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量的抑制作用。结论miR-16-5p通过靶向TSPAN15基因并调控PI3K/AKT信号通路,从而抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

TM4SF9在大肠侧向发育性肿瘤细胞株中的表达及意义

目的:研究四分子交联体5(TM4SF9)在大肠侧向发育性肿瘤(laterallyspreadingturmor,LST)、SW480和Lovo细胞中的差异表达,以及TM4SF9表达差异与三个细胞株黏附能力的关系.方法:用基因芯片技术研究3个细胞株的共同差异表达基因,从中筛选出TM4SF9作为研究对象,用半定量RTPCR技术验证基因芯片检查结果,用黏附实验研究3个细胞株黏附性的差异.结果:基因芯片检查发现TM4SF9在3个细胞株中都有表达,Lovo细胞株表达最强,LST表达最弱,半定量RTPCR检查与基因芯片检查结果相符,黏附实验显示TM4SF9表达水平最高的细胞黏附性最强.结论:TM4SF9在LST,SW480,LOVO3个细胞株中存在差异表达,黏附性较强的细胞株表达较高,其与LST特性的关系值得进一步研究.

GnRHa通过影响大鼠子宫内膜异位症Tspan5的表达影响内膜容受性

目的 探讨Tspan5和OPN与子宫内膜容受性的相关性,阐明Tspan5作为评估内异症患者子宫内膜容受性的参考指标的意义。方法 40只实验大鼠随机分为GnRHa降调模型组(n=20)和对照组(n=20)。GnRHa降调模型组:按0.04 mg/kg进行肌内注射,注射浓度为0.25 mg/mL的长效GnRHa的生理盐水1 d,28 d在当日17点按1∶1的比例和正常雄鼠合笼,第2天早晨8点检查,出现阴栓标为怀孕第1日,按此类推。对照组以等量生理盐水代替GnRHa,余同GnRHa降调模型组。子宫内膜标本进行WB、real time-PCR和免疫组化以检测Tspan5和OPN的mRNA表达和蛋白定位。ELISA法检测血清E2、P、CA125水平,分析Tspan5和OPN与血清E2、P、CA125水平的相关性。结果 Q-PCR、免疫组化和免疫印迹均显示,GnRHa降调模型组GnRHa降调前子宫内膜中Tspan5及OPN蛋白的表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。GnRHa降调模型组GnRHa降调后Tspan5及OPN的表达明显下降,接近对照组的表达量(P>0.05)。ELISA法检测血清中E2、P和CA125的表达水平,显示对照组子宫内膜中E2、P和CA125的表达显著高于GnRHa降调模型组(P<0.05)。结论 Tspan5在内异症大鼠的子宫内膜显著高表达,其可能是子宫内膜异位症影响内膜容受性的因素。