微囊藻毒素MC-LR对肝细胞毒性机理研究

目的 研究微囊藻毒类MC -LR的肝脏毒性机理。方法 采用四唑盐比色试验和流式细胞术检测微囊藻毒素MC -LR对原代培养的肝细胞和Hela细胞生长、细胞周期和凋亡的影晌。结果 微囊藻毒素在极低浓度时表现为抑制细胞生长或细胞毒作用 ,高浓度时可促进细胞生长。MC -LR导致肝细胞发生典型的凋亡样变化和细胞周期G2 /M期阻滞。提示微囊藻毒素可能具有影响肝细胞周期的作用 ,可诱导肝细胞增殖 ,同时又能诱导肝细胞凋亡。流式细胞术结果表明微囊藻毒素对Hela细胞周期有类似影晌趋势 ,但其程度远不如对肝细胞的影响明显。结论 微囊藻毒素对肝细胞的特异性作用可能是其肝脏毒性的机理之一。

白背叶提取物A的体外抗肿瘤活性研究

目的观察白背叶提取物A对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法采用四唑盐比色试验(MTT法),以半数抑制浓度(IC50)为评价抗肿瘤活性强度的指标,分别对HL60人白血病细胞、Hela人宫颈癌细胞、A375人黑色素瘤细胞、MCF7人乳腺癌细胞4种常见的人恶性肿瘤细胞进行抗肿瘤活性的筛选。结果白背叶提取物A在浓度为10μg/ml时对HL60(P<0.05)、Hela(P<0.05)、A375(P<0.05)、MCF7(P<0.01)即有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01),其IC50分别为29.64,30.36,36.65,42.81μg/ml。结论白背叶提取物A对以上4种肿瘤细胞的增殖均有抑制作用。

光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的抑制

目的研究光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC 7721 生长的抑制作用。方法以四唑盐比色试验(MTT)法检测二萜类化合物对SMMC 7721细胞生长的抑制率,用相差倒置显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡率及多药耐药基因1(MDR1)的表达水平。结果5~25μM的二萜类化合物对SMMC 7721细胞有较强的抑制作用,与浓度呈线性相关,并呈时间依赖性,72 h半数抑制浓度(IC50)为19 41μM ,20μM的药物作用于SMMC 7721 细胞48 h,流式细胞术检测细胞周期阻滞于G0 ~G1 期,细胞凋亡率为24 95%;在相差倒置显微镜下观察到细胞凋亡的特征形态改变,MDR1表达明显下调,且随药物浓度的增加MDR1 表达水平逐渐下降。结论光叶番荔枝中二萜类化合物对人肝癌细胞株SMMC 7721 有显著的抑制作用,可诱导癌细胞凋亡,明显下调MDR1的表达,具有逆转多药耐药性的作用。

内皮抑素基因表达产物对血管内皮细胞生长的抑制作用

目的探讨逆转录病毒介导内皮抑素基因转移的方法及其表达产物人内皮抑素对人血管内皮细胞的作用。方法以逆转录病毒为载体,转导内皮抑素基因至肺腺癌A549细胞,获得含内皮抑素基因的A549/Endo细胞。PCR方法检验外源性内皮抑素基因在宿主细胞中的整合。培养A549/Endo细胞,收集上清液。ELISA法检测上清液中内皮抑素的浓度,四唑盐比色试验(MTT)、流式细胞术(FCM)、原位细胞凋亡(TUNEL)观察该上清液对血管内皮细胞EA hy926 的抑制作用。结果PCR法证实A549/Endo细胞基因组中整合有外源性内皮抑素基因。A549/Endo细胞(1×105/ml)培养48h后,上清液中内皮抑素含量为(348±120) pg/ml,MTT法显示含内皮抑素的上清液能明显抑制EA hy926细胞的生长。FCM、TUNEL法显示内皮抑素可诱导EA hy926 凋亡。结论逆转录病毒能高效介导内皮抑素基因转移,内皮抑素基因表达产物能明显抑制人血管内皮细胞的生长,诱导其凋亡。

cyclinD1和CDK4在低氧心肌中的表达及意义

目的研究低氧心肌细胞周期及缺氧过程中细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)表达的变化,探讨缺氧心肌在凋亡前是否存在增殖能力和自身修复。方法采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,建立心肌缺血模型,实验分正常对照、缺血6 h和缺血12 h三组;以四唑盐比色试验(MTT)检测心肌细胞活力,流式细胞术测定细胞周期,免疫组化检测cyclinD1和CDK4表达。结果与对照组比较,心肌细胞缺氧处理6 h后,细胞周期中S 期比例增高(P<0 01),12 h后,S期比例下降(P<0 05);cyclinD1胞浆表达和CDK4 胞核表达增加。结论在缺氧所致死亡、凋亡过程中心肌细胞经历了一定程度的增殖过程,cyclinD1 和CDK4 表达增加参与了细胞增殖,缺氧损伤可刺激心肌细胞增殖能力。

人参皂甙Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞增殖及细胞外基质的影响

目的:观察人参皂甙Rg1对转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞增殖及细胞外基质的影响。方法:MTT法测细胞增殖情况。ELISA法测定培养细胞上清液中Col-Ⅰ,Col-Ⅲ和FN的含量。结果:在10～40ng/mL浓度范围内时间、剂量依赖性的促进肾小管上皮细胞增殖,减少转化生长因子-β1诱导的肾小管上皮细胞对Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN的分泌。结论:G-Rg1能够促进TGF-β1诱导下的肾小管上皮细胞的增殖,可能与抑制ECM的分泌有关。