四甲基偶氮唑盐法评价牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的体外细胞毒性

背景:越来越多的新型材料被纳入口腔领域应用的视野,对生物材料进行生物相容性评价是进入临床试验前的重点研究内容。目的:通过体外细胞毒性实验评价自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料的生物相容性。方法:根据ISO标准,采用四甲基偶氮唑盐比色法行体外细胞毒性实验,阴性对照组为DMEM培养液,阳性对照组为含有0.1%苯酚的DMEM培养液,实验组为受试材料的浸提液。测试人牙龈成纤维细胞在牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料浸提液中培养1,3,5d的吸光度值,观察细胞形态变化,计算细胞相对增殖率,判断细胞毒性的级别。结果与结论:实验组体外细胞毒性实验吸光度值均与阴性对照组差异无显著性意义(P>0.05),与阳性对照组差异有显著性意义(P<0.01),自制牙体修复性纳米羟基磷灰石复合材料体外细胞毒性级别为0～1级,初步认为其具有良好的生物相容性。

四甲基偶氮唑盐法用于非小细胞肺癌药敏试验条件的筛选

目的筛选非小细胞肺癌药敏试验的条件。方法取25例非小细胞肺癌患者的瘤细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察9种化疗药物，在不同浓度、不同时间对瘤细胞的敏感性。结果9种化疗药物对瘤细胞的敏感性，有随着药物浓度的增加、作用时间的延长而增高的趋势，但每个药物都有各自的特点。结论非小细胞肺癌细胞MTT法药敏试验的浓度应为临床用药量的计算值，药物作用时间应以48h为宜。

骨肉瘤化疗药物体外四甲基偶氮唑盐药敏的实验研究

目的 探讨卡铂 (CBP)和其它抗骨肉瘤基本药物对OS_732细胞株的抑制作用。方法 应用体外四甲基偶氮唑盐药敏试验 ,选用CBP、顺铂 (CDP)、阿霉素 (ADM)和氨甲喋呤 (MTX) ,参考临床所能达到的血浆最大理论浓度设定不同浓度梯度 ,观察它们对OS_732细胞株的抑制率。 结果 上述药物在体外均有一定的抑瘤作用 ,其中以CDP、CBP、CDP +ADM和CBP+ADM的抑制率较好 (平均值分别为82.86%、80.85%、81.92 %和82.30% ) ,4组间的差别无显著性意义 (P>0.05) ;ADM次之 (66.63% ) ;MTX最差 (30.57% ) ,与前5组比较差别均有显著性意义 (均P<0.01)。 结论 临床使用的几种抗骨肉瘤药物对OS_732细胞株均有一定的抑制作用 。

MTT法检测银杏叶注射液对人脑微血管内皮细胞增殖的影响

[目的]观察银杏叶注射液对体外培养的人脑微血管内皮细胞增殖的影响。[方法]体外培养人脑微血管内皮细胞(HBMEC),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度银杏叶注射液对HBMEC增殖的影响。[结果]与对照组相比较,银杏叶注射液浓度为70 mg/L时,对血管内皮细胞无促增殖作用;浓度为140、210、280、350 mg/L时均具有促进血管内皮细胞增殖的作用,但各组之间相比较无统计学意义。[结论]银杏叶注射液具有促进人脑微血管内皮细胞增殖的作用。

MTT法检测雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖的影晌

目的:研究雷公藤内酯醇对体外培养的牛晶状体上皮细胞增殖的抑制作用。方法:取第4代对数生长期的牛晶状体上皮细胞培养24h后,加入重组人表皮生长因子(终浓度50μg/L)和不同浓度的雷公藤内酯醇(40,20,10μg/L),分别作用6,12,24,48,72h后,采用MTT法观察雷公藤内酯醇对牛晶状体上皮细胞增殖的影响。结果:不同浓度的雷公藤内酯醇,于不同时间作用在处于增殖状态的LECs,其增殖抑制率升高呈现明显的时间及剂量依赖性。结论:雷公藤内酯醇对晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用在防止后囊混浊方面有广阔的前景。

抗病毒药物筛选中两种方法的比较

目的:比较四甲基偶氮唑盐(MTT)法与细胞病变效应(CPE)在筛选抗病毒药物中的异同。方法:在体外用两种方法检测阿昔洛韦(ACV)对细胞毒性作用和抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用。结果:MTT法较CPE法敏感、客观、准确。结论:MTT法是一种快速、敏感、客观和准确的筛选和评价抗病毒药物的方法。

海洋真菌96F197抗癌活性成分研究

目的对海洋真菌代谢产物中抗癌活性成分进行分离和结构鉴定,并对得到的化合物进行体外抗癌活性评价。方法用硅胶、SephedaxHL-20、ODS柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离,通过化合物的理化性质及各种光谱技术鉴定化合物的结构。采用MTT法测定化合物体外抗癌活性。结果从真菌菌丝体的丙酮提取物中分离得到两个生物碱类化合物和两个甾醇类化合物,分别鉴定为viridicatol(1)、sclerotiamide(2)、22E-5α,6α-环氧麦角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇(3)、22E-5α,8α-桥二氧麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(4)。化合物3和4在50μg·mL-1的质量浓度下可以明显地抑制HepG2、人乳腺癌MCF-7细胞和NCI-H460肿瘤细胞的生长。结论化合物3和4有明显的体外抗癌作用。

氯化镧对人牙龈成纤维细胞增殖的影响

目的:检测不同浓度氯化镧(La3+ )对人牙龈成纤维细胞(HGF)增殖的影响。方法:体外培养HGF,用四唑盐法(MTT)检测6种浓度La3+ (1×10-6、1×10-5、5×10-5、1×10-4、1×10-3及1×10-2 mol/L)对HGF的作用。结果: 1×10-2 mol/L的La3+能抑制HGF的生长, 1×10-6、1×10-5、5×10-5、1×10-4及1×10-3 mol/L的La3+对HGF生长无抑制作用。结论: 1×10-2 mol/L浓度的La3+对HGF增殖有抑制作用, 1×10-4 mol/L以下浓度的La3+对HGF无抑制作用。

肺癌体外药敏试验与临床疗效的相关性

目的 :采用四唑盐 (MTT)药敏试验方法筛选对肺癌的敏感药物并指导临床化疗 .方法 :将 1 4 5例 4种不同类型的肺癌 ,分为MTT试验组和未接受MTT对照组 .接受MTT药敏试验者 ,根据药敏结果指导化疗 ,未接受MTT药敏对照组凭经验化疗 .结果 :体外药敏试验与临床治疗结果的总符合率为 89.3% ;阳性符合率为 90 .9% ;阴性符合率为77.8% ;试验敏感性为 96 .8% ;特异性为 5 3.8% .接受MTT药敏试验者临床治疗有效率明显高于凭经验化疗对照组 .结论 :MTT体外药敏试验与临床治疗敏感性有很好的相关性 。

MTT、MTS、WST-1在细胞增殖检测中最佳实验条件的研究

目的:探讨MTT、MTS、WST-1三种四唑盐在细胞增殖检测中的最佳实验条件。方法:取对数生长期的小鼠黑色素瘤B16细胞,用10%胎牛血清DMEM培养液制成不同浓度的细胞悬液加入96孔培养板中培养24h,分别加入三种试剂后在450nm、492nm和630nm波长处测定OD值,根据不同波长所测OD值的大小确定三种试剂的最佳实验波长。根据细胞浓度与OD值关系曲线确定三种试剂各自的最适细胞浓度。取最适浓度的B16细胞分别加入三种试剂在0.5h、1h、2h和4h四个不同时间点测定吸收值,根据OD值确定最佳的检测时间。结果:MTT、MTS法的最佳波长为492nm,WST-1法为450nm。MTT的最适细胞接种浓度为1.6×103—2.56×104/mL,MTS的最适细胞接种浓度为5×10—6.4×103/mL,WST-1的最适细胞接种浓度为2.5×10—1.6×103/mL。三种方法的最佳测定时间均为4h。结论:MTT、MTS、WST-1分别适用于不同条件下检测细胞的存活与增殖,可为抗病毒及抗癌药物的筛选提供实验依据。

油樟叶挥发油及其主要成分的体外抗肝癌活性

目的探讨油樟叶挥发油及其主要组成成分(1,8-桉叶油素、黄樟油素、γ-松油烯、α-松油烯和松油烯-4-醇)的抗肝癌活性。方法运用体外培养细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)快速比色法,观察油樟叶挥发油的主要组成成分(1,8-桉叶油素、黄樟油素、α-松油烯、松油烯-4-醇和γ-松油烯)对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用,并用软琼脂细胞集落形成实验,观察油樟叶挥发油的主要组成成分对人肝癌BEL-7402细胞形成细胞集落的抑制作用。结果油樟叶挥发油、1,8-桉叶油素、黄樟油素、γ-松油烯、α-松油烯和松油烯-4-醇体外对人肝癌BEL-7402细胞的最大增殖抑制率分别为58.63%、42.83%、90.04%、81.53%、34.83%和31.46%;对人肝癌BEL-7402细胞集落形成的最大抑制率分别为55.13%、61.99%、94.56%、89.54%、62.02%和59.91%。结论油樟叶挥发油及其主要组成成分能不同程度地抑制人肝癌BEL-7402细胞的体外增殖及单个细胞形成细胞集落。其中黄樟油素和γ-松油烯对人肝癌BEL-7402细胞的抑制作用最强。

人口腔鳞癌细胞系对淋巴靶向葫芦素BE聚乳酸纳米微粒的敏感性研究

目的 :探讨人口腔鳞癌细胞系 (Tca8113和BcaCD885 )对颈淋巴结靶向性葫芦素BE聚乳酸纳米微粒 (CuBE_PLA_NP)的敏感性。方法 :用四唑盐显色法 (MTT法 )检测用不同剂量的CuBE_PLA_NP和CuBE在 1～ 8d内 8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性 ,计算出 2种药物在 8个时间点对 2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果 :CuBE_PLA_NP和CuBE对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用 ,其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论 :经改型后的淋巴靶向CuBE_PLA_NP没有降低CuBE成份的抗癌活性 ,同时 ,由于CuBE_PLA_NP具有淋巴靶向性 ,更有利于杀灭口腔癌颈淋巴结转移灶内的癌细胞。

TWEAK反义寡核苷酸对人结肠癌细胞系SW480增殖及侵袭能力的影响

目的观察肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人结肠癌细胞系SW480增殖及侵袭能力的影响。方法合成TWEAK反义寡核苷酸(ASODN)、错义寡核苷酸(SCODN)后转染人结肠癌细胞系SW480,将细胞分为空白对照组、脂质体(LF)对照组、ASODN组、SCODN组;采用MTT法检测肿瘤细胞增殖抑制情况,流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞周期分布,ELISA法检测细胞培养液上清中可溶性TWEAK及其受体成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)的表达,Western blotting法、免疫荧光细胞化学法(IF)检测细胞中的TWEAK及Fn14蛋白的表达,运用Transwell侵袭实验观测结肠癌细胞侵袭能力的变化。结果空白对照组、LF对照组、SCODN组之间结肠癌细胞的增殖情况无明显差异(P>0.05),与对照组相比ASODN组肿瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),且呈剂量-时间依赖关系;转染TWEAK ASODN后,G2+M期细胞比例明显高于对照组(P<0.05),TWEAK及其受体Fn14在结肠癌细胞培养液及细胞内的表达均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);转染TWEAK ASODN后肿瘤细胞侵袭抑制率为31.39%,明显高于对照组(P<0.05);TWEAK及其受体Fn14在结肠癌细胞培养液及细胞内的表达均密切相关(P<0.05)。结论 TWEAK ASODN可能通过抑制TWEAK与其受体Fn14结合干扰肿瘤的发生发展,抑制TWEAK表达能抑制人结肠癌细胞系SW480的增殖与侵袭。

全冠修复材料对人牙龈成纤维细胞的毒性

目的:观察镍铬合金、金合金、铸造陶瓷对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFC)的毒性。方法:制备镍铬合金、金合金、铸造陶瓷的细胞培养基浸提液,采用四唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT法)测定材料对HGFC生长的影响;在材料周围接种HGFC,观察细胞的生长情况。采用Stata9.1软件对实验结果进行析因分析。结果:金合金的细胞相对增殖率为1.016、1.014、0.824、0.796,镍铬合金的细胞相对增殖率为1.028、1.079、0.903、0.809,铸造陶瓷的细胞相对增殖率为1.018、1.030、0.924、0.818。金合金和镍铬合金对细胞相对增殖率的影响有统计学差异(P=0.021),但金合金与铸造陶瓷、镍铬合金与铸造陶瓷之间无统计学差异(P>0.05)。金合金、镍铬合金和铸造陶瓷的细胞毒性级别(cytotoxical grade,CG)为0-1级。倒置显微镜观察3种材料周围均有细胞生长,镍铬合金周围有细胞坏死带产生。结论:镍铬合金与HGFC直接接触引起的细胞损伤比析出的金属离子对细胞损伤大。金合金和铸造陶瓷具有良好的生物相容性。

不同菱角壳提取物抑制肺癌A549细胞生长的研究

目的研究不同菱壳水和乙醇提取物的抗癌活性。方法采用Folin比色法测定不同品种菱壳提取物中多酚的含量,通过MTT法测定二角菱壳、四角菱壳的水提取物、醇提取物对肺癌A549细胞生长抑制作用。结果四角菱壳多酚含量高于二角菱壳,醇提物多酚含量高于水提物;二角菱壳醇提取物对肺癌A549细胞的抑制率高于水提物,差异具有统计学意义(P<0.01);四角菱壳水提物对抑制率高于二角菱壳水提物肺癌A549细胞的生长,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论菱角壳提取物对肺癌A549细胞生长具有较强的抑制作用,且菱角壳的醇提取物优于水提取物,四菱角壳优于二角菱壳。

胰岛素促进体外兔角膜缘干细胞的增殖

目的从原代培养获得角膜缘干细胞(LSCs),探讨不同浓度胰岛素对角膜缘干细胞增殖作用的影响。方法取兔角膜组织体外培养获得角膜缘干细胞,并行免疫组织化学及透射电镜鉴定。5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L及100mg/L胰岛素作用后,以四甲基偶氮唑盐法检测胰岛素对角膜缘干细胞增殖能力的影响。结果 5mg/L和10mg/L浓度的胰岛素有促进角膜缘干细胞增殖的作用,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);5mg/L与10mg/L组比较也有显著差异(P<0.05);20～100mg/L组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论胰岛素促进培养角膜缘干细胞的增殖,最适宜浓度为5mg/L。

靶向叉头框蛋白J2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建及其对肝癌细胞转化生长因子β/Smads表达和增殖的影响

目的构建靶向叉头框蛋白J2(FOXJ2)的规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因敲除质粒,探讨干扰FOXJ2基因后对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的信号通路转化生长因子β/Smads家族蛋白(TGF-β/Smads)表达和增殖的影响。方法设计小鼠FOXJ2的小向导RNA(sgRNA)序列,与PX458载体连接并转化感受态大肠埃希菌,挑取单克隆扩增提质粒。利用脂质体将重组质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs转染入肝癌细胞Hepa1-6,对照组只转染空载体,48 h后RT-PCR检测对Hepa1-6细胞FOXJ2的抑制作用,同时检测FOXJ2被抑制后TGF-β和Smads的表达情况;MTT法检测干扰FOXJ2后对肝癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建3个FOXJ2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs,其中质粒PX458-FOXJ2-sgRNA2可以有效抑制FOXJ2的表达,同时检测到干扰了FOXJ2的细胞的TGF-β、Smad2和Smad4的表达均高于对照组,差异显著;并且FOXJ2被抑制组肝癌细胞的增殖能力明显提高。结论小鼠肝癌细胞中的FOXJ2基因在一定程度上抑制TGF-β、Smad2和Smad4基因的表达,抑制细胞的增殖,推测在体情况下,肝癌细胞的增殖和TGF-β信号通路的激活与FOXJ2基因的负调控有一定的相关性,FOXJ2可以作为肝癌预防和治疗的靶点分子进行干预。

TNP-470联合5-FU抑制结肠癌生长的实验研究

背景与目的:新生血管生成是肿瘤生长转移的一个重要条件,本研究通过体内外实验观察血管生成抑制剂TNP-470联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对结肠癌生长的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测TNP-470和5-FU对LOVO细胞的生长抑制效应,用Burgi法分析联合用药效果。建立结肠癌皮下移植瘤模型,观察TNP-470单独或联合5-FU对移植瘤的生长抑制作用,采用免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,抗Ⅷ因子抗体标记计数肿瘤微血管密度(MVD)。结果:TNP-470和5-FU对体外培养的LOVO细胞的生长具有抑制作用,半数抑制浓度(IC50)分别为55.8ng/ml和4.6ng/ml,Burgi法分析表明两者联合应用具有协同效应,LOVO细胞生长进一步受到抑制。体内实验表明:各治疗组肿瘤的生长明显受到抑制,而联合治疗组抗瘤作用进一步增强。联合治疗组和5-FU组肿瘤组织中VEGF的表达较对照组显著减少,联合治疗组和TNP-470组肿瘤组织中的MVD与对照组比较也显著降低。结论:TNP-470能够抑制LOVO细胞及其皮下移植瘤的生长和新生血管形成,与5-FU联合应用具有协同作用,可提高抗瘤效应。

中药“龙泉复方”的不同配伍对肿瘤细胞系HepG-2和EC-1增殖的影响

通过MTT（四甲基偶氮唑盐）法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定＂龙泉复方＂有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明：对抑制HepG-2细胞增殖有效作用的浓度：七味单方（马钱子、山慈菇、喜树果、龙葵、石上柏、青黛、紫菀）浸膏混合物和龙葵单方浸膏均〈125μg/mL,七味药物复方总浸膏为250~1000μg/mL;对抑制EC-1细胞增殖有效作用的浓度：三味药物混合浸膏（马钱子,喜树果、青黛提取的浸膏的混合物）〈50μg/mL和150~400μg/mL,七味单方混合浸膏〈25μg/mL和50~400μg/mL,喜树果单方浸膏为25μg/mL和50~200μg/mL;3种浸膏促进EC-1细胞增殖的浓度依次为：50~100、25~50、25~50μg/mL.通过对EC-1荧光染色观察发现诱导细胞凋亡的有效作用浓度：七位单方浸膏混合物为5~10μg/mL,三味药复方混合浸膏为10~25μg/mL,喜树果约为50μg/mL.研究结果提示,药物浓度范围和细胞系的不同导致其效果也不尽相同,临床应据具体情况调整,使之用药少效果佳.