四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用及机制研究

目的:研究中药四季青水煎液对铜绿假单胞菌生物被膜生成、毒力因子分泌的抑制作用并探讨其作用机制。方法:将四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养,观察四季青水煎液在亚抑菌浓度下对细菌生长的影响;将铜绿假单胞菌培养3天构建生物被膜模型,加入不同浓度的四季青水煎液共同培养,于不同时间取样,经结晶紫染色后570 nm处测定生物被膜的光密度(OD值);将不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养18 h,经氯仿提取后于540 nm处测定绿脓菌素光密度(OD值),与刚果红反应后,492 nm处测定弹性蛋白酶光密度(OD值);用荧光定量PCR法检测四季青水煎液作用于铜绿假单胞菌后Las I/R和Rhl I/R基因的表达;用LC-MS/MS法测定不同浓度四季青水煎液与铜绿假单胞菌共同培养48h,72 h后培养液中细菌信号分子3-oxo-C12-HSL和C4-HSL的浓度及与生物被膜生长及毒力因子分泌的关系。结果:在亚抑菌浓度下四季青水煎液不影响铜绿假单胞菌的生长,但能显著抑制铜绿假单胞菌生物被膜生成和毒力因子分泌。其减毒作用机制可能是四季青中含有铜绿假单胞菌群体感应系统抑制成分,抑制了该系统中上游信号分子3-oxo-C12-HSL与LasR基因的结合,从而阻断了下游基因的启动。结论:四季青水煎液能通过影响铜绿假单胞菌群体感应系统中信号分子对相关基因进行调控,从而降低铜绿假单胞菌的致病性。

四季青水煎液外用抗炎作用

目的：观察四季青水煎液外用对小鼠耳廓肿胀模型及大鼠足趾肿胀模型的抗炎作用。方法：取雄性昆明种小鼠50只,随机分成5组,分别在每只小鼠右耳廓正反两面分别涂抹相应药液,敷以大剂量、中剂量、小剂量的四季青水煎液0.05 mL（每耳0.075 g,每耳0.05 g,每耳0.025 g）,京万红组小鼠在其右耳廓正反两面涂京万红软膏（每耳0.06 g）,生理盐水组小鼠右耳廓正反面涂质量分数0.9%氯化钠注射液0.05 mL,然后通过用二甲苯涂抹小鼠耳廓复制小鼠耳廓肿胀模型,观察四季青水煎液外用对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响;取雄性SD大鼠,按体质量随机分成5组,分别在大鼠右后足趾包裹大剂量、中剂量、小剂量四季青水煎液的药物0.5 mL（每足0.75 g,每足0.50 g,每足0.25 g）;京万红组大鼠右后足趾包裹京万红膏（每足0.3 g）;生理盐水组大鼠右后足趾包裹同体积质量分数0.9%氯化钠注射液。然后以新鲜蛋清液皮下注射大鼠足趾复制大鼠足趾肿胀模型,观察四季青水煎液外用对其的抗炎作用。结果：两种急性炎症模型复制成功。与生理盐水组相比,大剂量、中剂量、小剂量的四季青水煎液组小鼠的耳廓肿胀度分别为（5.76±0.62,6.15±0.56,6.56±0.43）mg,均能显著降低小鼠耳廓肿胀度（P〈0.01）;与生理盐水组相比,在给予蛋清0.5-6.0 h后,大剂量、中剂量四季青水煎液组和京万红组均可显著降低蛋清所致大鼠足趾肿胀（P〈0.01）;在给药第6小时,大剂量、中剂量四季青水煎液组大鼠的足趾肿胀度分别为（0.17±0.07,0.22±0.03）mL,可显著降低大鼠足趾肿胀度（P〈0.01）,而小剂量四季青水煎液组大鼠的足趾肿胀度为（0.28±0.07）mL,有抑制蛋清所致大鼠足趾肿胀的趋势（P〉0.05）。结论：四季青水煎液外用对急性炎症有很好的抑制作用。