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猪繁殖与呼吸综合症病毒四川株分离、鉴定及其病原特性研究 被引量:12
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作者 程安春 汪铭书 +3 位作者 希尼尼根 袁桂萍 周毅 陈孝跃 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第9期15-18,共4页
从四川地区发病仔猪分离到 3株病毒 (SC1、SC2和SC3) ,电镜下可见病毒呈球形 ,有囊膜 ,病毒能在Marc 14 5细胞上生长并致细胞出现CPE ,直径约 5 5nm ,核酸为RNA ,不凝集猪、黄牛、犬、兔、豚鼠、鸡、鸭、鹅的红细胞 ;pH值 2 ,3,4 ,8,9,1... 从四川地区发病仔猪分离到 3株病毒 (SC1、SC2和SC3) ,电镜下可见病毒呈球形 ,有囊膜 ,病毒能在Marc 14 5细胞上生长并致细胞出现CPE ,直径约 5 5nm ,核酸为RNA ,不凝集猪、黄牛、犬、兔、豚鼠、鸡、鸭、鹅的红细胞 ;pH值 2 ,3,4 ,8,9,10处理 30min和 5 6℃处理 6 0min病毒即失去对Marc 14 5细胞的感染能力。经病毒中和实验、特异性单克隆免疫荧光抗体和特异性RTPCR鉴定表明分离毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合症病毒 (PRRSV) ,分离病毒素回归 30日龄仔猪可出现高热和呼吸道症状。研究首次从病原学角度证实美洲型PRRSV在四川的存在 ,利用分离毒制备的疫苗具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 繁殖呼吸综合症 病毒四川株 分离 鉴定 病原性
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四川株多房棘球绦虫EM10(EMII/3)抗原基因的克隆及序列分析 被引量:6
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作者 王昌源 陈雅棠 +2 位作者 余登高 黄爱龙 唐霓 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期374-375,共2页
目前,泡球蚴病尚无特效的防治药物,在许多地区仍严重威胁人畜健康。近年来,国外学者报道了多房棘球绦虫许多重要的抗原或多肽[1,2],其中EMII/3和EM10最受重视。我们对中国四川株多房棘球绦虫EMII/3和EM10抗原基因进行了克隆和序列分析,... 目前,泡球蚴病尚无特效的防治药物,在许多地区仍严重威胁人畜健康。近年来,国外学者报道了多房棘球绦虫许多重要的抗原或多肽[1,2],其中EMII/3和EM10最受重视。我们对中国四川株多房棘球绦虫EMII/3和EM10抗原基因进行了克隆和序列分析,结果如下。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫四川株 EMl0抗原 EMII/3抗原 基因克隆 序列分析
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猪链球菌2型四川株与江苏株对SPF猪的致病性 被引量:11
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作者 崔立 朱建国 +4 位作者 华修国 王姝优 钱华冬 陆承平 吴忠亮 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2006年第1期54-57,共4页
以SPF巴马小型猪为实验动物,分别用猪链球菌2型四川分离株以及江苏分离株进行攻击,通过临床症状观察、病理解剖检查、病原分离鉴定以及病原组织分布检测等,比较二者的致病性。结果表明:四川株攻击猪40 h后出现神经症状,关节肿大和全身... 以SPF巴马小型猪为实验动物,分别用猪链球菌2型四川分离株以及江苏分离株进行攻击,通过临床症状观察、病理解剖检查、病原分离鉴定以及病原组织分布检测等,比较二者的致病性。结果表明:四川株攻击猪40 h后出现神经症状,关节肿大和全身出血等不很明显;病程为6 ̄7 d,而江苏株攻毒后18 h即出现神经症状,20 h即有死亡者,关节肿大和全身出血明显。死后病理解剖观察可见,四川株猪主要表现为肺淤血、肿大以及脑水肿,而未见败血症的变化,全身性出血不明显;而江苏株猪除了肺淤血、肿大以及脑水肿外,出现明显的败血症变化。均分离到与攻击相同的细菌,细菌溶血特性不明显,革兰氏阳性染色典型。细菌在组织中分布不同菌株也有一定的差异。 展开更多
关键词 猪链球菌2型四川分离 猪链球菌2型江苏分离 致病性 SPF巴马小型猪 动物模型
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猪瘟病毒四川分离株E2基因的分子克隆、原核表达及免疫学活性分析 被引量:4
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作者 韩国全 郭万柱 +4 位作者 林华 王利娜 张博 陈弟诗 陈杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期65-71,共7页
分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami... 分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami-TM(DE3)plysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达,Western blotting分析表达蛋白的免疫学活性。试验结果表明,成功克隆了E2基因,共1119 bp,包含有编码E2蛋白的完整序列,编码373个氨基酸;成功构建了CS-FVE2基因完整阅读框、主要抗原区原核表达载体pET-E2(pe)、pET-mE2(pe);蛋白质电泳结果显示,成功表达出约45.32、28.49 ku两目的蛋白,而且表达的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白均能被CSFV阳性血清所识别,具有良好的免疫学反应活性。因此,本试验成功获得CSFV四川分离株E2基因,表达出具有生物学活性的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 四川分离 E2基因 原核表达 免疫学活性
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猪圆环病毒2型四川分离株全基因组进化分析 被引量:6
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作者 张毅 陈斌 +5 位作者 梁璐琪 邵靓 邓飞 丁梦蝶 陈弟诗 谢嘉宾 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第13期79-84,共6页
为了调查四川地区猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株的遗传多样性,试验对2017年于四川省12个地区分离的28株PCV-2进行全基因组扩增和测序分析,应用Lasergene 7.0和MEGA 6.0软件对分离株的全基因组序列进行比对并构建系统进化树,使用Clustal ... 为了调查四川地区猪圆环病毒2型(PCV-2)流行毒株的遗传多样性,试验对2017年于四川省12个地区分离的28株PCV-2进行全基因组扩增和测序分析,应用Lasergene 7.0和MEGA 6.0软件对分离株的全基因组序列进行比对并构建系统进化树,使用Clustal W方法对ORF2核苷酸和Cap蛋白氨基酸进行比对,并对Cap蛋白型特异性基序及抗原表位的突变情况进行比较分析。结果表明:28株PCV-2四川分离株与参考株之间的同源性为93.9%~99.9%;在进化关系上,3株为PCV-2b基因亚型,24株为PCV-2d基因亚型,1株为重组毒株;PCV-2四川分离株ORF2核苷酸与参考株之间同源性为88.6%~100%,氨基酸同源性为85.9%~100%;PCV-2四川分离株的Cap蛋白型特异性基序及抗原表位在各自亚型内较为保守,在B细胞表位和T细胞表位分别发现9处、2处氨基酸替换,其中位于122 aa和169 aa处的突变值得注意。说明2017年四川省流行的PCV-2以PCV-2d亚型为主,也存在少数的PCV-2b亚型毒株,各亚型毒株变异程度较小,但也存在少量关键位置的氨基酸替换,另外还发现四川省存在PCV-2重组毒株。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 四川分离 全基因组 遗传进化分析 重组
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3个猪链球菌2型四川分离株4个毒力因子基因序列测定与分析 被引量:5
6
作者 蔡振鸿 范伟兴 +5 位作者 赵冉 何海权 王幼明 姜平 李晓成 黄保续 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期901-905,共5页
目的设计了特异性引物对3个致病性猪链球菌2型(Ss2)四川分离株4个主要毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2分别进行了扩增,序列测定与分析结果表明3个Ss2四川分离株均存在4个毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2,其核苷酸序列与1998年江苏分离... 目的设计了特异性引物对3个致病性猪链球菌2型(Ss2)四川分离株4个主要毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2分别进行了扩增,序列测定与分析结果表明3个Ss2四川分离株均存在4个毒力因子基因mrp、epf、sly和orf2,其核苷酸序列与1998年江苏分离株9801及国外参考菌株的同源性均大于99.5%,提示3个四川分离菌株与1998年江苏流行的高毒力菌株可能具有共同的来源。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 毒力因子 核苷酸序列测定 Ss2四川分离 Ss2江苏分离9801
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减蛋综合征病毒四川分离株六邻体蛋白基因的序列分析 被引量:1
7
作者 汪铭书 程安春 +2 位作者 陈孝跃 郭万柱 王小玉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期183-186,共4页
According to the nucleotide sequence of egg drop syndrome virus(EDSV)AV-127 strain (a foreign standard isolate)from the GenBank,a pair of oligonucleotide primers was designed and synthesizedWith use of polymerase ch... According to the nucleotide sequence of egg drop syndrome virus(EDSV)AV-127 strain (a foreign standard isolate)from the GenBank,a pair of oligonucleotide primers was designed and synthesizedWith use of polymerase chain reaction(PCR),the hexon-encoding gene fragment was amplified from the genome of EDSV SG9301 strain that was isolated from Sichuan Province of China and the amplified fragment was directly inserted into pMD-T vectorThe recombinant plasmid harboring the hexon-encoding gene was identified by digestion of restriction endonucleases and PCRThen,a positive clone was sequencedThe result showed that the recombinant plasmid contained the complete sequence of the hexon-encoding gene and the hexon-encoding gene was 2733 base pair long which encoded 910 amino acids, identical with AV-127 strain and AAV-2 strain (an attenuated strain)Comparison with AV-127 strain indicated that there was 9985% homology at the nucleotide levelThe homology of the deduced amino acid sequence with AV-127 strain and AAv-2 strain was over 98%,which indicated that the hexon protein was conservativeBut comparatively,the homology of the hexon protein of SG9301 strain with AV-127 strain was higher(9978%),the homology of the hexon protein of AAV-2 strain with AV-127 strain and SG9301 strain were 9868% and 9846% respectivelyComparison of nucleotides and amino acids suggested that the biological character is consistent with the homologies of nucleotide and amino acid of the hexon(Namely,the homology of the hexon of virulence strain with virulence strain was higher than that of virulence strain with attenuated strain),the hexon was one of the most conserved viral proteins among EDSV 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 四川分离 六邻体蛋白基因 序列分析 腺病毒科
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猪细小病毒四川毒株的生物学特性研究 被引量:1
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作者 肖驰 周淑兰 +1 位作者 付利芝 文心田 《中国兽医科技》 CSCD 1999年第9期15-17,共3页
关键词 细小病毒 四川 生物学特性
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小反刍兽疫病毒四川简阳株N基因的系统进化分析 被引量:2
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作者 张毅 张东 +3 位作者 陈斌 蔡冬冬 裴超信 李春 《四川畜牧兽医》 2019年第2期31-33,35,共4页
为了调查小反刍兽疫病毒四川简阳株(SCJY株)的分子遗传特征,我们对四川简阳发病羊鼻拭子中的小反刍兽疫病毒N基因进行了遗传进化分析。通过RT-PCR、克隆测序获得SCJY株N基因序列,使用DNASTAR软件将其与GenBank中的15条参考株序列进行同... 为了调查小反刍兽疫病毒四川简阳株(SCJY株)的分子遗传特征,我们对四川简阳发病羊鼻拭子中的小反刍兽疫病毒N基因进行了遗传进化分析。通过RT-PCR、克隆测序获得SCJY株N基因序列,使用DNASTAR软件将其与GenBank中的15条参考株序列进行同源性比对,使用MEGA6软件进行系统进化分析。结果显示:SCJY株N基因序列全长1578nt,与参考株的核苷酸同源性为88.9%~100%,氨基酸同源性为92.8%~100%,与2013~2014年小反刍兽疫中国流行毒株高度同源;系统进化分析将16个毒株N基因划分为4个谱系,SCJY株属于Ⅳ系。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 核衣壳蛋白基因 四川简阳 系统进化分析
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒四川变异株致病性分析
10
作者 赵军 周远成 +3 位作者 李萍 黄剑波 朱玲 徐志文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期870-874,共5页
为探究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)四川变异株SC2012和SC2012-2人工感染仔猪的病理学特征及其在组织内的分布情况,本研究将HP-PRRSV SC2012和SC2012-2株接种健康断奶仔猪,观察不同发病阶段仔猪的临床症状;感染后第14 d剖... 为探究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)四川变异株SC2012和SC2012-2人工感染仔猪的病理学特征及其在组织内的分布情况,本研究将HP-PRRSV SC2012和SC2012-2株接种健康断奶仔猪,观察不同发病阶段仔猪的临床症状;感染后第14 d剖检仔猪观察其器官病变情况、组织切片的病理学变化,通过免疫组化方法(IHC)和RT-PCR方法检测PRRSV在组织中的分布情况。结果显示,两组仔猪感染后均未出现显著的呼吸症状,并于感染后3 d^5 d出现轻微腹泻;体温测定结果显示,两组仔猪均出现轻度发热、病毒血症,但SC2012-2组较SC2012组仔猪出现时间提前、病毒滴度高、维持时间长;两组仔猪均能够通过唾液、粪便、鼻分泌物排毒;剖检仔猪肺脏均出现不同程度的间质性肺炎,肝脏表现为肝淤血,其它多个器官均有不同程度的炎性细胞浸润;临床症状和病理损伤等结果表明,SC2012较SC2012-2株毒力弱。组织内病毒分布结果显示,两株病毒均在多个器官中分布,但结合组织病理变化分析显示病毒的分布并不一定导致组织损伤,HP-PRRSV四川变异株的突变对其毒力产生了一定的影响。本研究为进一步对HP-PRRSV SC2012和SC2012-2的研究提供必需参数。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 四川变异 病理学观察 病毒分布
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禽传染性支气管炎病毒四川分离株M基因的克隆及真核表达载体构建
11
作者 杨帆 王红宁 +2 位作者 李春 吴琦 周生 《四川畜牧兽医》 2003年第B09期19-19,共1页
膜蛋白是禽传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白,可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,能诱导细胞介导的免疫反应,但其免疫生物学功能尚不清楚。本研究选择禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBWJ,通过RT-PCR扩增获得其膜蛋白基因M基... 膜蛋白是禽传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白,可能存在着具有重要免疫作用的抗原决定簇,能诱导细胞介导的免疫反应,但其免疫生物学功能尚不清楚。本研究选择禽传染性支气管炎病毒中国分离株SAIBWJ,通过RT-PCR扩增获得其膜蛋白基因M基因并插入到PGEM-T载体中,获得重组质粒PGEM-M,将重组质粒中的克隆片段进行序列测定及分析。对PGEM-M进行双酶切获得M基因片段,克隆到真核表达载体pcDNA3.1+中,通过菌落PCR、双酶切证明获得了M基因的真核表达质粒。利用DNAstar软件将IBVSAIBwj株的膜蛋白基因的核苷酸序列与GenBank中的国内外参考毒株进行比较,其核苷酸序列的同源率为91.6%~98.8%,氨基酸序列的同源率为91.6%~99.6%。糖基化位点的增加和减少对M蛋白的抗原性产生很大的影响。在M蛋白近N端含有两个糖基化位点,第一个跨膜疏水区距离亲水区大约20个氨基酸。SAIBwjM基因核苷酸、氨基酸进化关系可以看出,SAIBwjM与国内外参考株的同源性均较高,因此可能具有交叉保护性抗原,可望用于制备诊断试剂及制备基因工程疫苗。由于IBV变异较大,常规疫苗不能产生完全保护力。在IBV的免疫保护机制中,细胞免疫起着关键的作用,近年来一些研究者已经进行了IBVDNA疫苗的研究,并取得了一定的进展。IBV的S1基因真核表达质粒可同时诱? 展开更多
关键词 禽类 传染性支气管炎病毒 四川分离 M基因 基因克隆
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猪Ⅱ型圆环病毒四川分离株鉴定及其ORF2基因序列分析
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作者 王新 郭万柱 +6 位作者 朱玲 徐志文 颜其贵 王印 王小玉 罗燕 周婷 《畜牧市场》 2009年第11期21-22,共2页
猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV),属于圆环病毒科(Circoviridae),圆环病毒属(Circovirus),血清型为PCV—1和PCV-2。PCV—1首先由Tis2cher于1974年从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得,PCV-2首先由Clark报道了是断奶仔猪多... 猪圆环病毒(Porcinecircovirus,PCV),属于圆环病毒科(Circoviridae),圆环病毒属(Circovirus),血清型为PCV—1和PCV-2。PCV—1首先由Tis2cher于1974年从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得,PCV-2首先由Clark报道了是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原, 展开更多
关键词 猪圆环病毒 四川分离 基因序列分析 ORF2 断奶仔猪多系统衰竭综合征 PCV-2 鉴定 传代细胞系
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基于线粒体细胞色素b基因的细颈囊尾蚴种群遗传多样性研究 被引量:3
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作者 郝桂英 杨光友 +3 位作者 古小彬 阳爱国 杨应东 王淑贤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期119-125,共7页
为探讨我国细颈囊尾蚴种群之间的遗传相似性及与其他带科带属绦虫的亲缘关系,用线粒体细胞色素b(Cyt b)基因全序列研究了分离自我国四川和云南2省7地区猪、山羊和绵羊共33个细颈囊尾蚴的遗传变异,并用MEGA 4.0程序NJ法和PAUP 4.0程序MP... 为探讨我国细颈囊尾蚴种群之间的遗传相似性及与其他带科带属绦虫的亲缘关系,用线粒体细胞色素b(Cyt b)基因全序列研究了分离自我国四川和云南2省7地区猪、山羊和绵羊共33个细颈囊尾蚴的遗传变异,并用MEGA 4.0程序NJ法和PAUP 4.0程序MP法绘制种系发育树。本研究结果显示:细颈囊尾蚴分离株的Cyt b基因全长为1 068bp,共检测到22个单倍型,单倍型间核苷酸相似性较高(97.3%~99.9%),其与带科带属其他5种绦虫的相似性均在82%以下。系统发育树显示,7个不同地域的细颈囊尾蚴聚为一支,分为3个亚群,且与地理区域、宿主没有直接的相关性,呈现混杂的分布格局,未形成明显的地理分支或宿主分支。研究结果表明:细颈囊尾蚴Cyt b基因存在一定的遗传差异,但种内相对保守,与其他带科绦虫种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的标记,并为细颈囊尾蚴的种群遗传学研究及其与其他带科绦虫病的鉴别诊断的建立奠定基础。 展开更多
关键词 细颈囊尾蚴 线粒体细胞色素B基因 遗传多样性 四川株 云南
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中国西部不同地区泡球蚴对小鼠的感染性研究 被引量:1
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作者 杨晨晨 马磊 +5 位作者 吴熙然 李志强 寿玺 张春 魏琴 姜涛 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第2期208-214,共7页
目的建立不同地区泡球蚴腹腔感染小鼠动物模型,分析并比较3种不同地区泡球蚴对小鼠的感染性。方法 40只BALB/c小鼠分为4组:对照组(10只)、EM-1组(青海株,10只)、EM-2组(新疆株,10只)和EM-3组(四川株,10只),建立小鼠腹腔感染动物模型,18... 目的建立不同地区泡球蚴腹腔感染小鼠动物模型,分析并比较3种不同地区泡球蚴对小鼠的感染性。方法 40只BALB/c小鼠分为4组:对照组(10只)、EM-1组(青海株,10只)、EM-2组(新疆株,10只)和EM-3组(四川株,10只),建立小鼠腹腔感染动物模型,180 d后称重,处死,计算感染率,分离原头蚴,将各组小鼠的肝脏用4%多聚甲醛固定,HE染色,统计原头蚴个数,分别于感染后7 d,1、3、6个月采用小鼠眼内眦静脉取血,测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、嗜酸性粒细胞(EOS)水平和白细胞(WBC)、红细胞(RBC)及血小板(PLT)的含量。结果 3种不同地区的泡球蚴腹腔感染小鼠血常规和肝功能指标差异无统计学意义。不同地区的泡球蚴对小鼠的致病性存在差异,其中EM-2感染小鼠后,肝脏原头蚴数量最多;EM-3的原头蚴数量最少。EM-2组小鼠感染率最高(77.8%);EM-3感染率最低(62.5%)。经HE染色后,实验各组的肝组织低倍镜下可见散在的大小不等的囊泡,EM-2感染小鼠肝细胞坏死最为明显,肝脏坏死损伤面积大。结论该研究成功建立了3个不同地区的泡球蚴腹腔感染动物模型,不同地区的泡球蚴对小鼠的致病性存在差异,其中以新疆株的感染力最强,四川株的感染力最弱。 展开更多
关键词 泡型包虫病 原头蚴 腹腔感染 新疆 青海 四川株
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汉坦病毒四川分离毒株SN7——HTN的新亚型 被引量:3
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作者 姚智慧 董关木 +4 位作者 俞永新 张佳柯 刘学成 张灵麟 阎侗有 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期79-82,共4页
目的 对四川省社鼠分离株SN7进行生物学和分子生物学鉴定。方法 应用单克隆抗体抗原性分析和空斑减少中和试验 (PRNT)和PCR分型方法分析、克隆测定了SN7株的M和S片段基因 ,并同汉坦病毒其他病毒株进行比较。结果 单克隆抗体和PRNT、... 目的 对四川省社鼠分离株SN7进行生物学和分子生物学鉴定。方法 应用单克隆抗体抗原性分析和空斑减少中和试验 (PRNT)和PCR分型方法分析、克隆测定了SN7株的M和S片段基因 ,并同汉坦病毒其他病毒株进行比较。结果 单克隆抗体和PRNT、PCR分型方法均无法对SN7株定性 ,序列分析表明SN7毒株与现有的HTN型毒株M片段同源性为 80 .2 %~ 87.1% ,差异高达 12 .9%~ 19.8% ;S片段为 76 .6 %~ 92 .0 % ,差异也高达 8%~ 2 3.4 % ,而与SEO毒株M片段的同源性为 70 .0 %~ 71.6 % ,S片段为 71.0 %~ 72 .2 % ,SN7株病毒可以定型为HTN型病毒。结论 SN7株为HTN型的新亚型毒株。 展开更多
关键词 汉坦病毒属 亚型 免疫逃逸 四川分离毒SN7
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PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的形态学观察 被引量:4
16
作者 刘伍梅 汪铭书 +5 位作者 程安春 周毅 刘芳 张平英 李雪梅 陈孝跃 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第3期61-63,共3页
关键词 PRRSV感染 形态学观察 细胞凋亡 可能机制 体外培养 四川分离 致病机制 透射电镜
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禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立 被引量:1
17
作者 余冲 黄勇 +3 位作者 田明星 石敏 李敏 赵芳芳 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期363-370,共8页
根据禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至p... 根据禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至pMD-19T载体,进行测序和比对;将基因片段按正确的阅读框架定向克隆至pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,包涵体洗涤纯化,探讨以重组gp90蛋白为包被抗原初步建立检测REV的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.结果表明:1)REV-SC1株gp90核苷酸序列与在GenBank上已发表序列的同源性最高为99%,于231位、870位发生了2个碱基突变;2)SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约为45 ku,与预期分子质量大小相符;免疫印迹(Western-blot)结果表明重组蛋白具有生物学活性;3)间接ELISA检测方法的最佳抗原包被质量浓度为1.5 mg·mL-1,一抗稀释度为1∶320,临界值为0.126;特异性、敏感性试验结果良好.综上,本试验成功表达了REVgp90蛋白,并对其在ELISA检测方面的应用作了初步探讨. 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒四川分离 GP90基因 克隆表达 间接酶联免疫吸附试验
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Prevalence and patterns of drug-resistance mutations among HIV-1 patients infected with CRF07_BC strains in Sichuan province,China 被引量:1
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作者 Ling Su Xia Zhou +4 位作者 Dan Yuan Hong Yang Dongbing Wei Guangmin Qin Shu Liang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2014年第4期237-241,共5页
Little information is available on the prevalence of drug-resistance mutations in patients harboring the human immunodeficiency virus type 1(HIV-1) circulating recombinant form(CRF)07_BC variant in Sichuan, China. Thi... Little information is available on the prevalence of drug-resistance mutations in patients harboring the human immunodeficiency virus type 1(HIV-1) circulating recombinant form(CRF)07_BC variant in Sichuan, China. This study examined 375 plasma samples from patients with HIV-1 who were infected with the CRF07_BC strain, including 104 drug-naive participants and 271 in whom antiretroviral therapy(ART) had failed. Only one participant in the drug-naive group had a drug-resistance mutation(M46L), compared with 31.73% of those in whom ART had failed. Further analysis showed that 19.56% of strains contained mutations conferring resistance to non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors(NNRTIs) alone, 0.74% were resistant to nucleoside reverse transcriptase inhibitors(NRTIs) alone, and 11.44% were dual-resistant to both NRTIs and NNRTIs. The most common mutation in the ART-failure group was M184V(35.88%), K103N(45.01%), Y181C(17.33%), and G190S/A(15.88%). The percentages of HIV-1 strains resistant to lamivudine, emtricitabine, efavirenz, etravirine, and nevirapine were 10.70%, 10.70%, 28.04%, 7.75%, and 26.20%, respectively. To explore site variants possibly related to drug resistance, variations in the ancestor/consensus CRF07_BC sequences from the therapy-naive and ART-failure groups were compared, and seven mutations at six positions were identified as being significantly differently distributed between the two groups(p<0.05). Detailed sequence data will provide information on CRF07_BC genetic characterizations, and improve our understanding of antiretroviral susceptibility and the evolution of drug-resistance mutations. This will be valuable in developing and implementing local public-health approaches for HIV drug-resistance prevention and treatment. 展开更多
关键词 HIV-1 CRF07_BC drug resistance SICHUAN China
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