亚洲黑熊四川亚种Ursus thibetanus mupinensis线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ基因的克隆与初步分析

根据已报道的部分哺乳动物线粒体细胞色素C氧化酶(Cytochrome C Oxidase)亚基Ⅲ基因(mtCOXⅢ)的相关信息设计引物,运用PCR技术,首次从亚洲黑熊四川亚种(以下简称四川黑熊,Ursus thibetanus mupinensis)的肌肉组织总DNA中成功克隆了mtCOXⅢ基因的编码序列,并对其进行了初步分析.结果表明:四川黑熊mtCOXⅢ基因序列全长784 bp,ORF是783 bp,编码261个氨基酸的蛋白质,该蛋白的等电点为6.47,分子量为29840.6 Da.四川黑熊的mtCOXⅢ与已报道的部分哺乳动物的mtCOXⅢ基因具有很高的同源性.进一步分析发现,四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ功能位点的位置、种类和数量均与已报道的部分哺乳动物具有很高的相似性.

四川黑熊(Ursus thibetanus mupinensis)线粒体NADH脱氢酶亚基1基因(ND1)的序列分析

以四川境内的四川黑熊(Ursus thibetanus mupinensis)为研究对象,根据已报道的若干物种的NADH脱氢酶亚基1基因(ND1)序列信息设计引物.运用PCR技术从四川黑熊毛囊组织的总DNA中扩增出ND1基因序列.采用GenScan、Blast2·1、ORF finder和Clustal W等软件分别对DNA序列进行预测、相似性比较、ORF查找以及多序列比对,并利用PredictProtein软件对蛋白质进行预测和结构分析.结果表明;PCR扩增所得DNA序列长度为957bp,包含了ND1基因,其ORF为957bp,编码317个氨基酸,编码蛋白的分子量为35·6×103Da,pI为7·83.四川黑熊的ND1基因序列及其所编码的氨基酸序列与其它熊、浣熊和小熊猫等动物的ND1基因序列和对应的氨基酸序列具有较高的相似性.

亚洲黑熊四川亚种(Ursus thibetanus mupinensis)线粒体ATP合酶和亚基基因克隆及序列分析

根据已报道的部分哺乳动物线粒体ATP合酶F0亚基的相关信息设计引物,运用PCR技术,首次从亚洲黑熊四川亚种(Ursus thibetanus mupinensis)的肌肉组织总DNA中成功克隆了线粒体ATP合酶F0亚基8(ATP8)和亚基6(ATP6)的序列,并对其进行了初步分析。结果表明:PCR扩增产物的总长度为942 bp,其中842 bp为四川黑熊ATP8和ATP6基因的编码区。ATP8和ATP6基因存在一段长43 bp的重叠区域。ATP8基因长204 bp,编码67个氨基酸残基的蛋白质,其蛋白分子质量为7.9 KD,等电点为10.35;ATP6基因长682 bp,编码226个氨基酸残基的蛋白质,其蛋白分子质量为24.8 KD,等电点为10.63。四川黑熊线粒体ATP合酶F0亚基8和亚基6与其他已报道的部分哺乳动物具有很高的同源性。以基因序列为数据构建的进化树表明四川黑熊和美洲黑熊的亲缘关系最近。本研究为在分子水平上探究黑熊线粒体基因组的遗传特点,探究物种进化关系和物种多样性提供了科学参考。

四川黑熊线粒体12S和16S rRNA基因的克隆及序列分析

利用哺乳动物线粒体基因的保守序列设计引物,采用PCR方法,首次从亚洲黑熊四川亚种(Ursusthibetanus mupinensis)的肌肉组织总DNA中扩增出了线粒体12S rRNA和16S rRNA基因并进行了序列测定及分析.结果表明,四川黑熊12S rRNA基因长965 bp;16S rRNA基因长1 580 bp.通过进一步的序列分析表明,四川黑熊的12S rRNA和16S rRNA基因有较高的进化速率,与美洲黑熊、棕熊、北极熊、眼镜熊及大熊猫的相应基因相比较有较大差异,其中与美洲黑熊的同源性相对较高.

四川黑熊ND3、ND4L和tRNA-Arg基因的克隆和序列分析

克隆并测定了四川黑熊(Ursus thibetanus mupinensis)线粒体基因组764 bp的片段,根据序列同源性比较,该DNA片段包括2个蛋白质编码基因:ND3和ND4L基因,以及1个tRNA-Arg基因.四川黑熊的ND3基因和ND4L基因的DNA序列和所编码的氨基酸序列与马来熊、棕熊、美洲黑熊和北极熊的同源性分别为:90%和95%、93%和97%、91%和96%、93%和97%;89%和98.98%、88%和98.98%、89%和100%、89%和98.98%.与棕熊、美洲黑熊和北极熊tRNA-Arg(CGA)的同源性分别为95.65%、94.20%和94.20%.拓扑结构比较显示,四川黑熊的ND3基因所编码的氨基酸序列比美洲黑熊的少了1个蛋白激酶C磷酸化位点.

四川黑熊NADH脱氢酶亚基4基因的序列分析

目的探讨黑熊线粒体ND4基因的序列特点。方法根据已报道的若干物种的NADH脱氢酶亚基4基因(ND4)设计引物。运用PCR技术从四川黑熊毛囊组织的总DNA中扩增出ND4基因。并对ND4基因进行分析。结果PCR扩增所得DNA序列长度为1402bp,该序列包含了ND4基因,其ORF为1377bp,编码459个氨基酸,编码蛋白的分子量为51.5×103,pI为9.37。四川黑熊的ND4基因序列及其所编码的氨基酸序列与美洲黑熊、马来熊、棕熊、北极熊、人、大鼠、小鼠和狗等其他哺乳动物的ND4基因序列和对应的氨基酸序列具有较高的相似性,分别为68%～91%和71%～95%。拓扑结构预测显示四川黑熊ND4基因的蛋白质上分别存在N-糖基化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、N-酰基化位点、亮氨酸拉链以及富含亮氨酸的区域。结论哺乳类动物的ND4基因具较高的保守性,而其所编码的蛋白在功能上具有高度的一致性。

四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的克隆及序列分析

目的探讨四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的特征。方法根据已经报道的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochromecoxidasesubunitⅠ,COXⅠ)基因设计引物、PCR扩增和直接测序,并用软件对四川黑熊及其他几个物种的COXⅠ基因序列及COXⅠ蛋白的氨基酸序列进行了分析。结果四川黑熊COXⅠ基因长1605bp,编码含514个氨基酸残基的前体蛋白。碱基的含量分别为A26.9%,C23.1%,G18.3%,T31.8%。起始密码子为“ATG”,终止密码子为“TAA”。蛋白质等电点为6.29,分子质量为57.2×103。以四川黑熊和已报道的其他6种动物的COXⅠ基因序列为数据构建的分子系统发育树表明在所比较的其他3种熊类中,四川黑熊和美洲黑熊的亲缘关系最近;在牛,狗和大鼠中,四川黑熊与狗的亲缘关系最近。结论四川黑熊COXⅠ基因的DNA序列和蛋白的氨基酸序列和其他动物的相应序列有很高相似性,表明COX基因在所比较的几个物种中具有高度保守性。

四川黑熊RPS16亚基基因的克隆与序列分析

根据已报道的部分哺乳动物RPS16基因的相关信息设计引物,运用RT-PCR技术,从四川黑熊的肌肉组织总RNA中对核糖体蛋白亚基RPS16基因的表达序列进行克隆、测序和分析.结果表明:四川黑熊RPS16基因的表达序列全长为481bp,开放阅读框(ORF)为441bp,编码146个氨基酸,相对分子质量为16.4KDa,pI为10.81.拓扑预测显示含有6个类型的功能位点:1个依赖cAMP和cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,3个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶II磷酸化位点,2个N-糖基化位点,1个乙酰化位点及1个核糖体蛋白S9信号位点.进一步分析发现,四川黑熊RPS16基因与已报道的大熊猫、牛、野猪、人、小家鼠和褐家鼠等6个哺乳动物物种的表达序列及其编码的氨基酸序列有很高的相似性,说明RPS16基因具有高度的遗传稳定性和功能一致性.

四川九顶山自然保护区野生黑熊种群生存力初步分析

依据黑熊种群的相关参数,借助旋涡软件(vortex8.41),对四川九顶山自然保护区野生黑熊的种群动态进行了模拟分析.结果表明:在没有近亲繁殖、食物歉收和人类诱捕等灾害影响的情况下,九顶山黑熊种群数量100年内稳步增长:而在加入近亲繁殖和灾害等因素时,种群数量下降,其中人为诱捕是致黑熊种群数量下降的主要因素.据此,提出了相应的保护性建议.

亚洲黑熊四川亚种线粒体NADH脱氢酶亚基5和亚基6基因的克隆与初步分析

[目的]克隆与分析亚洲黑熊四川亚种线粒体NADH的脱氢酶亚基5和亚基6基因(ND5和ND6)。[方法]根据已报道的部分熊科动物ND5和ND6基因序列的相关信息设计引物,运用PCR技术,首次从亚洲黑熊四川亚种的肌肉组织总DNA中成功克隆了ND5和ND6基因的编码序列,分析了其序列特征,并与已报道的9种熊科动物进行比较分析。[结果]该克隆片段包括ND5和ND6两个基因共2456bp,共编码781个氨基酸,与9种熊科动物的ND5和ND6具有很高的同源性;该克隆片段ND5和ND6的蛋白分子量分别为68.2621和19.0386kDa,等电点分别为9.19和4.25,与9种熊科动物的均十分接近。[结论]四川黑熊与9种熊科动物的ND5和ND6基因及其编码蛋白具有很高的相似性,在功能上具有一致性,尤其与东北黑熊在功能上具有高度一致性。

四川省乐山市黑熊资源调查

四川省乐山市黑熊资源调查蒋少林，敖良义，杨剑英，范金，李远华乐山市林业局乐山６１４０００乐山教育学院乐山市黑熊资源分布广泛，栖息地面积大，生活环境复杂多样，各县（区）黑熊种群密度差异悬殊。近年来部分县区随着生产建设的需要、旅游业的开发，破坏和影响了黑...

拯救黑熊在龙桥

黑熊,被国际濒临灭绝动物贸易公约(CITES)列为一类保护动物。在中国,有近6000多只黑熊生活在被禁锢的养熊场里成为商人赚钱的“摇钱树”。熊胆,熊掌、熊皮、熊脂等成了有利可图的原材料。更令人震惊的是,众多憨态可掬的黑熊长达几十年被关在铁笼里,其胆囊被植入生锈、粗糙的金属导管抽取胆汁,有的甚至被活活折磨致死……这时,一位生于英格兰、曾被英国《读者文摘》评为“时代英雄”的谢罗便臣(JillRobinsonMBE)第一个为黑熊发出了拯救的声音。经过不懈努力,而今在中国四川,一个以最终在中国完全终止养熊业作为长期奋斗目标的“拯救黑熊”行动拉开了帷幕……

拯救黑熊

2000年7月，亚洲动物基金与中国有关政府部门签订了一个开创性的协议，率先拯救四川省内条件最恶劣的养熊场中500头受难黑熊，并为将来在中国彻底淘汰活熊取胆业和推动熊胆中草药替代而努力。这是中国政府与国外动物权益保护组织达成的第一个协定，协议的主要内容，就是政府帮助亚洲动物基金拯救条件恶劣的养熊场中被取胆的黑熊。

四川的野生黑熊

黑熊(Selenarctos thibetanus)又名亚洲黑熊,广泛分布于东亚地区.在我国,黑熊已被列为国家二级重点保护野生动物.四川省是黑熊的重要产地.本文根据调查、了解,对四川的野生黑熊作一系统介绍.生物学特征四川的野生黑熊,一般体长1.5米左右,体重140-160公斤,最重个体可达200公斤以上.头宽阔,吻较短,鼻端裸露.耳较长并被有长毛.胸部有一个明显的新月形白斑。

营救棕熊

2005年7月底暑假期间，四川省成都市新都区龙桥镇亚洲黑熊救护中心的谢罗便臣女士和四川省林业厅野生动物保护处的邓祥遂带领中心工作人员举行了一个欢迎仪式——又有两只棕熊在此落户。直接促成此事的是成都理工大学学生张原和王晶，如果没有他们两人的努力，这两只可爱的棕熊也许早已命丧黄泉……

触动心灵的一天——参观四川龙桥黑熊救护中心有感

今天，是我和同学们受到巨大触动的一天。我们去了四川龙桥黑熊救护中心，切身体会了黑熊的可怜处境。

博乐

“熊出没”之四川公路遇黑熊下山散步 6月30日，四川崇州鸡冠山乡琉璃村二组附近的公路上，出现一只成年黑熊，让正在公路上驱车前进的10位村民放慢了车速，陪着这位“不速之客”走完6分钟约600米的路程。

开心果“黑猫”

来自亚洲动物基金四川龙桥黑熊救护中心的专家给"黑猫"检查身体。专家们向黄长学介绍了黑熊救护中心的情况和黑熊的相关知识,希望他尽快将"黑猫"送到中心喂养。小黑熊当然可爱,但随着它一天天长大。

关注动物的生命尊严——访四川龙桥黑熊救护中心

几年前,从成都一家报纸看到一个特殊葬礼的报道。这是一只虽被救助但最终病死的黑熊的葬礼。报道配有大幅照片,葬礼上那位泪流满面的英国护士给我留下极深印象。文章透露,我国尚有许多黑熊被囚禁在狭小铁笼中供人抽取胆汁,境况极其悲惨。亚洲动物基金会在四川建立了一个永久性的黑熊救护中心,今年春天我有机会去了位于新都龙桥的黑熊救护中心。