自主研制四极杆-线形离子阱质谱仪测定血清中甲氨蝶呤

本研究基于自主研制的QLIT-6610MD液相色谱-四极杆-线形离子阱-质谱联用仪,建立了准确测量血清中甲氨蝶呤的同位素稀释质谱法。采用甲醇沉淀血清样品的蛋白后测定上清液。通过基质匹配标准曲线定量,在10~5000μg/L浓度范围内,甲氨蝶呤的线性系数R^(2)>0.9990,定量限为10μg/L,质控品精密度优于6.94%,血清样本添加回收率为86.39%~97.84%,变异系数(CV)≤8.04%。应用QLIT-6610MD与AB QTRAP 6500+液相色谱-质谱联用仪同时测定70例临床血清样本,并采用Pearson系数与BLand-ALtman法进行比较。结果表明,2台仪器所测结果一致,QLIT-6610MD可达到三重四极杆质谱仪定量测定血清中甲氨蝶呤的水平,能够满足临床诊断需求,为临床质谱分析提供了一种新的国产仪器选择。此外,本研究还初步探讨了多级碎裂技术(MSn)测定血清中甲氨蝶呤的可能性,为后续研究奠定基础。

超高效液相色谱-四极杆串联离子阱质谱法同时检测动物源性食品中26种新型抗病毒药物

目的建立一种超高效液相色谱-四极杆串联离子阱质谱法(ultra performance liquid chromatography quadrupole tandem ion trap-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)同时检测动物源性食品中多种抗病毒药物的方法。方法样品经三氯乙酸-乙腈(20:80,V:V)溶液提取,Captive EMR-Lipid净化柱净化,采用Waters BEH C18色谱柱分离,UPLC-MS/MS检测,多反应监测-信息关联扫描-增强子离子扫描(multiple response monitoring-information dependent acquisition-enhanced product ion,MRM-IDA-EPI)确证,外标法定量。结果26种抗病毒药物定量限为0.1~5.0μg/kg,相关系数均高于0.99,回收率范围为71%~97%,相对标准偏差为1.3%~10.7%。结论采用新型通过型净化技术及四极杆串联离子阱质谱法,可同时对26种抗病毒药物进行定性、定量检测;采用二级全扫描谱图与谱库检索比对,实现了化合物的确证分析。

基于非标记分析方法应用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱仪鉴定中国仓鼠卵巢细胞膜蛋白

目的 探讨应用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱(Orbitrap fusion lumos)三合一高分辨质谱仪鉴定中国仓鼠卵巢(Chinese hamster overy,CHO)细胞的全蛋白质组和膜蛋白质组的非标记(label-free)分析方法,并评价其应用效果,为研究膜蛋白相关传染病的发生机制提供方法学基础。方法 贴壁培养中国仓鼠卵巢细胞,提取、富集和酶解处于对数生长期细胞的全蛋白和膜蛋白,用高效液相色谱仪联用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱仪对酶解后的多肽进行分析,利用Maxquant软件和Uniprot数据库进行搜库及鉴定,最后对鉴定膜蛋白进行基因本体论(gene ontology,GO)功能分类。结果 全蛋白组一共检测出14 300个肽段,搜库得到2708个蛋白,其中可信蛋白2002个(FDR<1%且特异性肽段>1);膜蛋白组一共检测出13 179个肽段,搜库得到2594个蛋白,其中可信蛋白1873个。在鉴定的全蛋白组和膜蛋白组中定量结果前20的蛋白中,全蛋白组中与膜相关的蛋白有4个,占比20%;膜蛋白组中与膜相关的蛋白有10个,占比50%。在膜蛋白组中,GO功能分类表明分子功能上主要涉及结合和催化活性,在生物学进程上主要涉及细胞进程、代谢过程等。结论 膜蛋白组中与膜相关的蛋白显著高于本实验的全蛋白组,基于非标记分析方法应用Orbitrap fusion lumos的分析技术是鉴定细胞膜蛋白的有效方法。

基于四极杆-线形离子阱串联质谱技术测量血清25OHD

本研究基于自主研制的QLIT-6610MD四极杆-线形离子阱液相色谱-质谱联用仪,建立了准确测量血清25OHD的同位素稀释质谱法。血清样品用甲醇沉淀蛋白,正己烷液-液萃取,上清液用氮气吹干,初始流动相复溶,QLIT-6610MD测定。采用基质匹配标准曲线定量,25OHD 2和25OHD 3分别在0.78~50μg/L和1.56~100μg/L范围内的线性决定系数R^(2)>0.9999,检出限和定量限为0.06、0.12μg/L和0.02、0.06μg/L,质控品精密度优于4.06%,血清样本添加回收率为99.25%~108.38%,变异系数≤5.10%。用QLIT-6610MD、AB 4500MD和YS EXACT 9900MD 3台液相色谱-质谱联用仪测定50例临床血清,采用Pearson系数和Bland-Altman法分析,3组数据的相关系数R≥0.9980、P<0.01。这表明3台仪器所测结果一致,QLIT-6610MD可以达到三重四极杆质谱仪定量测定血清25OHD的水平,能够满足临床诊断需求,将为临床质谱分析提供一种新型仪器,助力国产质谱仪发展。

四极杆-线形离子阱串联质谱法测量血清中万古霉素

本研究采用自主研制的QLIT-6610MD液相色谱-串联质谱系统,建立了测量血清中万古霉素的高准确度方法。样品经蛋白沉淀和液液萃取后,进入QLIT-6610MD系统分析。样本中的内源性物质在保留时间内对目标物无干扰。结果表明:在1.56~50.0 mg/L范围内,万古霉素的线性关系良好,相关系数(R^(2))≥0.99,检出限和定量限分别为0.19、1.56 mg/L,日内和日间精密度范围分别为1.62%~3.82%和2.07%~5.07%,血清样本的加标回收率为95.97%~97.74%,基质效应归一化因子(CV)≤7.60%,样品保存稳定性CV≤4.26%,进样长时稳定性优于2.13%。通过测定低、中、高质控品对方法进行验证,结果均在靶值范围内。采用QLIT-6610MD、AB API4000和YS EXACT 9900MD 3台液相色谱-串联质谱仪测定42例临床血清样本,经过Deming回归、Bland-Altman分析和Pearson相关性分析,结果具有良好的一致性。本研究证明了自主研制的QLIT-6610MD液相色谱-串联质谱系统能够达到三重四极杆质谱仪的定量水平,可为实时临床分析提供一种新型国产仪器方案。

四极杆-线形离子阱液相色谱质谱联用法快速检测玉米油中黄曲霉毒素

建立了四极杆-线形离子阱液相色谱质谱联用仪(Liquid Chromatography-Quadrupole-Linear Ion Trap Mass Spectrometry,LC-Q-LIT)测定玉米油中4种黄曲霉毒素(黄曲霉毒素B_(1)、黄曲霉毒素B_(2)、黄曲霉毒素G_(1)、黄曲霉毒素G_(2))的分析方法。选择Phenomenex Kinetex C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,2.6μm)分离目标物,分别以0.1%甲酸水-0.1%甲酸甲醇(V/V)为流动相进行梯度洗脱。质谱采用正离子扫描(ESI+)和选择反应监测模式。在玉米油基质中,4种黄曲霉毒素在2.5~50.0 ng·mL^(-1)呈现良好的线性关系(R^(2)≥0.990 3),检测限和定量限在0.5~1.0 ng·mL^(-1)和1.5~2.5 ng·mL^(-1),添加回收率为71.75%~97.87%,RSD≤13.86%。该方法操作简单、快速、成本低且灵敏度高,定性、定量准确,适用于玉米油中黄曲霉毒素的检测分析。

超高效液相色谱-串联四极杆复合线性离子阱质谱法同时识别和测定尿液中毒死蜱代谢物

建立了超高效液相色谱-串联四极杆复合线性离子阱质谱(Ultra performance liquid chromatographytriple quadrupole-linear ion trap mass spectrometry,UPLC-QTRAP)技术结合QuEChERS(Quiek,Easy,Cheap,Effective,Rugged,and Safe)法检测尿样中毒死蜱代谢产物残留的分析方法。采用乙腈提取,PSA和BCB净化,ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱分离,以乙腈-0.2%氨水为流动相梯度洗脱,在电喷雾电离(ESI负离子模式下),使用触发增强子离子扫描方式(MRM-IDA-EPI)对尿样中毒死蜱的代谢产物进行定性和定量分析。方法线性范围为1.0~100.0μg/L,检出限0.10~0.73μg/L。尿样中3种毒死蜱代谢物的平均加标回收率在80.3%~90.1%之间,RSD均小于5%。本方法操作简单、灵敏度高、准确性好、重现性强,利用QTRAP的质谱优势可有效的对色谱峰进行鉴定,有效预防样品的假阳性。本方法已成功应用于人体尿液实际样品中,检出的浓度范围为ND^54.6μg/L。本方法可为复杂基质中化学品的识别和定量提供技术参考。

高效液相色谱-四极杆串联线性离子阱质谱法测定水产品及饲料中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物

提出了高效液相色谱-四极杆串联线性离子阱质谱法测定水产及饲料中的孔雀石绿、结晶紫及其代谢物(隐色孔雀石绿、隐色结晶紫)的方法.样品经乙腈提取,Agilent XDB C18色谱柱分离,四极杆串联线性离子阱质谱进行检测.以氚代孔雀石绿、氘代隐色孔雀石绿、氘代结晶紫、氘代隐色结晶紫为内标物.4种化合物的线性范围均为0.05～5.0 μg·L-1,检出限(3S/N)均为0.5μg·kg-1.以空白样品为基体做加标回收试验,计算得4种化合物的回收率在93.3％～120％之间,相对标准偏差(n=6)在1.4％～18％之间.另外,还采用数据相关采集模式结合增强离子扫描模式对4种化合物进行定性分析,可对试样中4种化合物在定量同时进行定性确证.

超高效液相色谱-串联四极杆-线性加速离子阱复合质谱法检测加工肉制品中6种合成着色剂

建立了加工肉制品中6种合成着色剂检测的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。样品经甲醇-5%氨水（3∶7）混合溶液提取,正己烷除脂,经Oasis WAX固相萃取小柱净化,6种着色剂经Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱分离,以甲醇和0.02 mol/L乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾负离子（ESI-）模式电离。结果表明：6种色素在0.05~5.0μg/m L范围内呈良好的线性关系,相关系数（r）均大于0.991;酱牛肉样品中3个浓度添加水平平均回收率为83.5%~96.8%;相对标准偏差为3.84%~9.26%。该方法应用Qtrap特有的MRM-IDA-EPI扫描模式,可实现化合物的进一步确证。

超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法同时测定药食同源中药材中6种玉米赤霉醇类真菌毒素

目的建立超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法同时测定药食同源中药材中6种玉米赤霉醇类真菌毒素的分析方法。方法样品经乙腈-甲酸-水(80:1:19,V:V:V)提取,MLJ-1多重基质吸附型固相萃取柱净化,Waters BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,电喷雾负离子模式电离,质谱扫描模式为多反应监测-信息关联扫描-增强子离子(multiple response monitoring-information dependent acquisition-enhanced product ion,MRM-IDA-EPI),外标法定量。结果6种玉米赤霉醇类真菌毒素在0.1~20.0ng/mL范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.994,平均加标回收率为83.4%~99.7%,相对标准偏差为2.7%~7.4%,6种真菌毒素检出限为0.3~0.5μg/kg。结论本方法应用超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法特有的MRM-IDA-EPI扫描模式,可同时实现6种玉米赤霉醇类真菌毒素的准确定性、定量分析及可疑峰筛查、确证。

超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法测定肉制品中非法添加的碱性工业染料

目的建立超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法检测肉制品中7种工业染料的方法。方法样品经醋酸乙腈提取, WCX固相萃取柱净化, C18色谱柱分离,以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,电喷雾正离子模式电离,多反应监测(multiple response monitoring, MRM)→信息相关采集(information dependent acquisition, IDA)→增强子离子扫描(enhanced product ion, EPI)模式检测,外标法定量。结果 7种碱性工业染料在0.01~2.00μg/mL范围内均呈现良好的线性关系,相关系数(r)均大于0.995。检出限为0.4~3.6μg/kg,平均加标回收率为68.9%~99.9%,相对标准偏差为4.8%~8.4%。结论本方法应用超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱特有的MRM-IDA-EPI扫描模式,可同时实现化合物的准确定性、定量分析及可疑峰筛查、确证。

基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道离子阱串联质谱的冷链贮藏过程中滩羊肉的脂质组学研究

该文建立了超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道离子阱串联质谱(UHPLC-Q-Orbitrap MS/MS)结合脂质组学分析滩羊肉在冷链贮藏过程中脂质变化规律和脂质分子碎裂机理的方法。样品经异丙醇提取后,采用质谱全扫描模式和二级扫描模式对目标物质进行定性。共鉴定出48个变化显著性脂质,包括8个脂肪酰基肉碱、23个磷脂酰胆碱(PC)、3个溶血性磷脂酰胆碱(LPC)、13个磷脂酰乙醇胺(PE)、1个溶血性磷脂酰乙醇胺(LPE)。含量差异表现为部分PC、PE和脂肪酰基肉碱在前12 d短暂性升高,12 d后开始降低,而LPE和LPC在整个冷链贮藏期间表现为上升趋势。PC、PE和脂肪酰基肉碱短暂性的积累易导致大量的脂质氧化反应,进一步阐明最佳冷链时间为12 d。该方法适用于复杂基质中脂质分子的分离与定量,为肉及肉类产品在冷链贮藏过程中的脂质变化规律研究及质量控制提供了依据。

液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法检测中药材中7种真菌毒素

目的:建立中药材中7种真菌毒素的液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法测定方法。方法:样品经乙腈-甲酸-水(75:1:24)提取,MLJ-1多重基质吸附型固相萃取柱净化,Shim-pack GIST C18色谱柱分离,流动相为乙腈和0.01mol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)梯度洗脱,电喷雾正离子模式电离,质谱扫描模式为多反应监测-信息关联扫描-增强子离子扫描(MRM-IDA-EPI),外标法定量。结果:经方法学验证,方法的回收率、精密度均符合要求。结论:本方法应用相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱特有的MRM-IDA-EPI扫描模式,可实现中药材中7种真菌毒素准确的定性、定量分析及可疑峰筛查、确证。

高效液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱仪测定盐酸决奈达隆中两种基因毒性杂质的痕量残留

建立了高效液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱仪（HPLC-QTRAP-MS/MS）测定盐酸决奈达隆药物中两种基因毒性杂质（杂质C和D）痕量残留的分析方法。盐酸决奈达隆药物以0.1%甲酸水溶液-乙腈（20∶80）溶解后，分别采用Agilent Extend-C18色谱柱（1.8 μm，2.1 mm×50 mm）或YMC Pack-CN色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）进行分离，以0.1%甲酸水和乙腈作为流动相分别进行梯度洗脱，电喷雾正离子（ESI＋）扫描方式下选择离子监测（SRM）模式对样品进行检测。结果表明，杂质C和D在1.0~50 μg/L范围内线性关系良好，检出限（S/N=3）分别为0.20 μg/L和0.30 μg/L，定量下限（S/N=10）分别为0.80 μg/L和1.0 μg/L。该方法操作简单、灵敏度高、重现性好，可用于盐酸决奈达隆药物中两种基因毒性杂质痕量残留的测定。

高效液相色谱-三重四极杆-离子阱串联质谱法在食品分析中的应用

三重四极杆-离子阱串联质谱(quadruple/linear ion trap mass spectrometry, Q-Trap MS)不仅具有一般三重四极杆质谱的特征离子提取功能,而且具有线性离子阱的离子捕获、富集等功能,可以大大提高复杂基质中的检测选择性和灵敏度; Q-Trap MS技术独特的多反应监测-信息依赖性采集-增强子离子扫描模式可以同时获得多反应监测数据以及感兴趣的二级全扫描质谱图,通过自建谱库比对可进行未知物的筛查确证及化合物结构分析。因此Q-Trap MS技术在食品科学领域发挥着越来越重要的作用。本文主要对高效液相色谱-三重四极杆-离子阱串联质谱法在食品痕量分析、高通量快速筛查、化合物确证、降低基质效应及化合物结构分析方面的应用进行了概述,以期为Q-Trap MS技术在食品中的进一步发展应用提供参考。

超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法筛查和定量玉米中5种链格孢菌毒素

目的建立超高效液相色谱-四极杆串联离子阱复合质谱法(ultra performance liquid chromatography-Q-trap-tandem mass spectrometry,UPLC-Q-Trap-MS)对玉米中的5种链格孢菌毒素同时进行筛查和定量的分析方法。方法使用改进型QuEChERS法对玉米样品进行提取和净化,以多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)作为探针检测,并通过信息依赖性采集(information dependent acquisition,IDA)触发增强型子离子扫描(enhanced product ion scan,EPI)模式,采用外标法定量。结果玉米中5种链格孢菌毒素的检出限为0.017~0.720μg/kg,定量限为0.057~2.400μg/kg,并且在1.0~200.0 ng/mL的线性范围内良好,相关系数r≥0.9929。在样品基质中分别添加20、40和200μg/kg 3个水平的标准品进行加标回收试验,5种链格孢菌毒素的平均回收率为80.6%~104.7%,相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)为1.57%~8.27%(n=6)。结论该方法具有操作简单、灵敏度高、准确度高的特点,适合于玉米中5种链格孢菌毒素的同时快速筛查与准确定量。

超高效液相色谱-四极杆线性离子阱质谱法同时检测石蒜属3种生物碱

基于超高效液相色谱-串联四极杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS),建立了一种同时检测石蒜属植物中加兰他敏(Gal)、力可拉敏(Lycm)和石蒜碱(Lyc)含量的方法。提取液超声波辅助提取离心后,经Waters ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以水溶液(0.1%甲酸)-乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.2 m L/min,在正离子扫描下以MRM模式进行分析。结果表明,Gal、Lycm和Lyc在0.5~500μg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数达0.999 9~1.000 0,可在6.0 min内得到检测结果,Gal、Lycm和Lyc的保留时间分别为2.86、2.31、1.95 min。3种物质的加标回收率为97.2%~98.6%,相对标准偏差为0.8%~4.3%。应用此方法测得石蒜属12个种的Gal、Lycm和Lyc含量分别在21.98~496.77、0.17~467.21、9.34~4 510.18μg/g干重之间,3种物质含量在种间差异均较大。

高效液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱仪测定盐酸黄酮哌酯中的1-(2-羟乙基)哌啶残留

建立了盐酸黄酮哌酯中1-(2-羟乙基)哌啶的高效液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱(HPLC-QTRAP-MS/MS)定量分析方法。盐酸黄酮哌酯药物用0.1%甲酸溶解后,经Agilent ZORBAX SB-Aq C_(18)(2.1 mm×100mm,1.8μm)色谱柱分离,以乙腈-0.1%甲酸水作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾正离子扫描方式,以选择反应监测(SRM)模式进行检测。结果表明,1-(2-羟乙基)哌啶在10~100μg/L范围内线性关系良好(r=0.999 7),加标回收率为98.9%~106.8%,相对标准偏差(RSD)均不大于3.0%,方法检出限(S/N=3)为6.0mg/L,方法定量下限(S/N=10)为20 mg/L。该方法简单、灵敏、准确,适用于盐酸黄酮哌酯中1-(2-羟乙基)哌啶残留的测定。

超高效液相色谱-四极杆线性离子阱串联质谱法测定他达拉非原料药中潜在基因毒性杂质的含量

目的建立超高效液相色谱-四极杆线性离子阱串联质谱法测定他达拉非原料药中潜在的基因毒性合成工艺杂质T2的含量。方法采用Waters ACQUITY UPLC-AB SCIEX QTRAP 5500液质联用仪,ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以0.02 mol·L^(-1)乙酸铵(含0.1%乙酸)-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.35 mL·min^(-1),进样量5μL,柱温25℃。ESI正离子多反应监测(MRM)模式测定,离子对为m/z 427.1→135.0,外标法定量。结果该杂质在0.10~80 ng·mL^(-1)内与峰面积线性关系良好。检测限和定量限分别为25 pg·mL^(-1)和80 pg·mL^(-1),加样回收率在90%~110%,精密度、稳定性试验的RSD值均小于10%,说明该方法适用于他达拉非潜在基因毒性杂质T2的检测。含量测定结果显示,TDLF01、TDLF02原料药中T2杂质含量低于检测限,符合毒理学关注阈值的要求。结论该方法快速、灵敏、准确,可用于他达拉非原料药中潜在基因毒性杂质T2的含量测定。

超高效液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱法同时测定不同产地何首乌中10种核苷类成分

建立了何首乌药材中10种核苷类成分（尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷、腺苷、2＇-脱氧胞苷）的超高效液相色谱-串联四极杆/线性离子阱质谱（UPLC-QTRAP-MS/MS）同时测定的分析方法。不同产地何首乌样品用超纯水在室温下超声提取,提取液经高速离心处理,取上清液,经Waters Atlantis T3色谱柱（2.1 mm×150 mm,3μm）,以甲醇-5 mmol/L醋酸铵（含0.1%冰醋酸）为流动相,0.4 m L/min梯度洗脱,采用正离子多反应监测（MRM）模式测定。10种核苷在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.99,检出限为1.05~9.68 ng/m L;平均加标回收率为97.8%~104.8%,相对标准偏差（RSD）在1.8%~5.0%之间。该方法简便、灵敏、准确,为何首乌药材内在质量的评价和控制提供了可靠的检测方法。