低密度脂蛋白受体相关蛋白四核苷酸重复序列基因型检测

为建立一种直接、准确的人低密度脂蛋白受体相关蛋白四核苷酸串联重复序列 (TTTC)n基因型检测方法 ,应用聚合酶链反应和 8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人低密度脂蛋白受体相关蛋白的基因型 ,同时用聚合酶链反应产物直接进行测序。应用该法检测人低密度脂蛋白受体相关蛋白四核苷酸串联重复序列 (TTTC)n基因型 ,共检出 5 / 6、6 / 6、5 / 5型三种基因型和 5、6两种等位基因 ,其判定结果与测序结果完全一致。该方法可直接、准确地确定低密度脂蛋白受体相关蛋白的基因型 ,是大规模人群调查和心脑血管性疾病研究的有力工具。

鲢三、四核苷酸重复微卫星标记的筛选及其特征分析

通过磁珠富集法筛选鲢（Hypophthalmichtys molitrix）的三、四核苷酸重复微卫星分子标记。提取鲢血液大片段基因组DNA,用限制性内切酶Sau3AI进行酶切,蔗糖密度梯度离心收集400~900 bp长度的片段,构建鲢全基因组PCR文库,用生物素标记的微卫星探针（TGA）8、（CAG）8以及（AGAT）6进行筛选,磁珠富集含有微卫星序列的DNA片段,获得含有微卫星的单链序列;将这些序列通过PCR扩增,连接pMD 18-T载体,转入感受态大肠杆菌（Escherichia coli）DH5α,获得微卫星文库;再用γ-32P标记的放射性同位素探针进行二次杂交筛选,获得1 758个阳性克隆,选择测序348个克隆序列中,共含有280个微卫星座位,其中完美型167个（59.64%）,非完美型28个（10%）,混合型85个（30.36%）。Primer 3.0软件设计60对引物,并用珠江水系的野生鲢群体对引物进行多态性位点检测。统计软件分析显示其中22对具有较高的筛选效率和多态性,可作为鲢种质评价等遗传分析的工具。研究亮点：首次利用多碱基（三、四核苷酸重复）探针筛选出微卫星分子标记结合同位素探针进行两次筛选,是开发鲢微卫星分子标记过程中新的尝试与探索。在与其他利用二碱基核苷酸重复探针开发的鲢微卫星分子标记的对比中发现,四核苷酸重复的微卫星比二、三核苷酸重复微卫星具有更高的筛选效率和多态性。

微卫星估价异基因外周血干细胞移植后嵌合状态

目的 用检测 5个四核苷酸重复序列了解异基因干细胞移植后嵌合状态以及预后的关系。方法 PCR扩增12 0份正常人和 10对移植供受者基因组DNA ,据所得片段大小确定 5个微卫星在人群中的多态性及移植后嵌合状态。结果 各微卫星均发现 7个以上等位基因 (7～ 12 )多态性 ,杂合度仅CSF1PO低于 70 %。移植患者中完全嵌合状态 (CC) 8例 ,1例死于GVHD ;混合嵌合状态 (MC) 1例 ,死亡 ;受者型 1例 ,死亡。结论 5个四核苷酸重复序列点多态性可成功检测大多数嵌合状态。

正常人群21号染色体上3个位点的多态性及在染色体数目识别中的应用

目的 探讨正常人群 2 1号染色体 S14 35、 S12 70、 S 3个位点的多态性及三者联合应用于 2 1-三体综合征产前诊断中的可行性。 方法 利用 3个位点的四聚核苷酸重复序列多态性 ,用生物素标记聚合酶链反应 ( PCR) ,扩增 DNA ,检测沈阳地区 6 0例孕中期 ( 18～ 2 2周 )孕妇羊水。 结果 2 1号染色体 S14 35、 S12 70和 S 3个位点杂合率分别为 80 .0 0 % ( 4 8/ 6 0 )、 78.33% ( 4 7/ 6 0 )、83.33% ( 5 0 / 6 0 ) ;3个位点均纯合占 0 .75 %。 结论 正常人群 2 1号染色体上均出现 3个位点的四聚核苷酸重复序列 ,应用 PCR方法可方便和快捷地在 2 4 h内完成 2 1-三体综合征的产前诊断工作。