四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响

目的:观察四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PTDC)对大鼠肠缺血再灌注后肠组织损伤的影响。方法:36只SD大鼠随机分为3组,每组12只。(1)缺血再灌注组(I/R组),暴露腹腔后夹闭肠系膜上动脉(SMA)60min,开放灌注120min;(2)PTDC组(P组),在肠缺血前5min静脉给予PTDC100mg/kg;(3)假手术组(S组),仅暴露SMA,不行肠缺血再灌注及PTDC注射。所有动物于再灌注120min时处死,行肠组织苏木精-伊红染色观察肠损伤程度并评分;检测肠组织中丙二醛(MDA)含量及髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果:与S组相比,I/R组、P组GSH-PX活性明显降低(P<0.01,P<0.05),MDA含量、MPO活性及小肠损伤评分明显升高(P<0.01,P<0.05)。与I/R组相比,P组小肠损伤评分、MDA含量及MPO活性明显降低,GSH-PX活性明显升高(均P<0.05)。结论:PDTC对大鼠肠缺血再灌注后的肠道有保护作用,该保护作用与抑制中性粒细胞浸润、减少脂质氧化程度及氧自由基有关。

四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯干预大鼠急性胰腺炎核因子-κB的表达及作用

目的探讨核因子-κB(NF-κB)及TNF-α在大鼠急性胰腺炎(AP)中的表达,评价四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对胰腺损伤的保护作用。方法 Wistar大鼠54只,随机分为对照组、模型组、干预组。于造模开始第3、6、12小时麻醉后左心室采血处死,取胰腺组织观察病理变化;采用双抗体夹心ABC-EL ISA法测定NF-κB及TNF-α的含量。结果与对照组比较,模型组大鼠随时间的推移、血清淀粉酶和血浆NF-κB、TNF-α含量及胰腺组织病理学评分显著增高(P<0.01),两指标呈正相关(r=0.483,P<0.05);与模型组比较,干预组血淀粉酶升高幅度和NF-κB、TNF-α含量明显降低,胰腺组织的出血、坏死减轻(P<0.05)。结论 NF-κB激活介导上调TNF-α参与L-精氨酸诱导的AP发生、发展过程;PDTC干预NF-κB激活有效改善胰腺炎症损伤。

抗氧化剂对重症急性胰腺炎大鼠胰腺核因子-κB活化的影响

目的:探索抗氧化剂四氢化吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺核因子-κB(NF-κB)活化的影响及其意义。方法:72只SD大鼠随机分成假手术组(sham operation,SO组)、SAP组和PDTC组。SAP模型采用十二指肠壁穿刺经乳头逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠1mL/kg建立,PDTC组在造模前1h给予腹腔注射PDTC(30mg/kg),术后分4个时段(1、3、6、12h)分批处死动物。应用免疫组化观察胰腺组织NF-κB的活化,并用蛋白免疫印迹法测定胰腺组织中NF-κB的活性水平,同时检测3组大鼠血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平及胰腺组织病理学评分。结果:SAP可诱发胰腺组织NF-κB的激活,PDTC可降低SAP胰腺组织NF-κB的活性水平(P<0.01)。PDTC组血清AMY水平及胰腺组织病理评分明显得到改善(P<0.05),且术后12h,PDTC组血清ALT、CK-MB、BUN水平亦明显低于SAP组(P<0.01)。结论:SAP时,PDTC可能通过抑制胰腺组织NF-κB的活化,从而减轻SAP大鼠胰腺组织的损伤。

抑制核因子κB与妊娠糖尿病大鼠子宫胰岛素抵抗的关系

目的:观察妊娠糖尿病(GDM)大鼠子宫组织中,核因子-κB(NF-κB)及葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达,探讨GDM子宫胰岛素抵抗与抑制NF-κB表达的关系。方法:将30只SD孕鼠随机分为正常妊娠对照(NC)组、妊娠糖尿病(GDM)组和PDTC干预组,每组10只。采用链脲霉素(STZ)腹腔注射建立大鼠GDM模型。PDTC干预组大鼠在建模后每日腹腔注射PDTC(40 mg/kg)。大鼠分娩前及妊娠20 d处死留取子宫标本,观察子宫组织的病理变化。用免疫组化染色法及Western blot法检测子宫组织中GLUT-4与NF-κB的表达变化。结果:GDM组NF-κB的表达明显高于NC组(P<0.01);PDTC干预组NF-κB的表达明显降低(P<0.01)。GDM组GLUT-4的表达明显低于NC组(P<0.01);PDTC干预组GLUT-4的表达与GDM组比较明显升高(P<0.01)。结论:抑制核因子κB的活性能使GDM大鼠子宫组织中GLUT-4的表达升高,提示GDM大鼠子宫胰岛素抵抗的发生可能与核因子κB活化介导的GLUT-4表达下调有关。

抑制核因子-κB对Toll样受体4在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织中表达的影响

目的:观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺组织中Toll样受体4(TLR4)的表达情况。并且应用核因子(NF)-κB活化抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)进行干预,观察阻断NF-κB以后,TLR4在ANP大鼠胰腺组织中表达的变化,探讨ANP中TLR4与NF-κB的关系及NF-κB的活性对TLR4表达的影响。方法:72只SD大鼠随机分为假手术组、ANP组和PDTC预处理组。采用胆胰管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液诱导大鼠ANP模型。PDTC预处理组在建立模型前1h按100mg.kg-1腹腔注射给药。分别于建模后3h、6h、12h将大鼠分批处死。观察胰腺病理,用免疫组化及WesternBlot检测胰腺组织TLR4与NF-κB表达变化,RT-PCR检测胰腺组织TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达。结果:同假手术组相比,ANP组胰腺组织TLR4、NF-κB表达及TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达明显升高(P<0.05);同ANP组相比,PDTC预处理组胰腺组织炎症明显减轻,胰腺组织TLR4、NF-κB表达及TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论:TLR4和NF-κB在ANP大鼠胰腺组织中的表达水平明显增高,PDTC抑制ANP大鼠胰腺组织中NF-κB表达的同时,下调TLR4蛋白水平表达和TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达。TLR4和NF-κB是介导炎症反应的枢纽,因而它们在ANP发生发展中起重要作用。TLR4和NF-κB可能不是简单的上下游关系,其关系还需进一步研究。

PDTC对MPTP帕金森病鼠黑质NF-κB表达的影响

目的研究二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)帕金森病(PD)鼠黑质核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法实验组C57/BL小鼠按体重30 mg/(kg.d)经腹腔注射MPTP共7 d制成PD模型,预防组小鼠按体重40 mg/(kg.d)经腹腔注射PDTC半小时后再经腹腔注射MPTP。观察两组小鼠注射前后行为变化,并采用SABC法检测注射后黑质部NF-κB及酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果实验组小鼠表现出PD的典型症状,预防组则无异常行为表现。实验组小鼠黑质部NF-κB阳性表达较预防组显著,并有明显核易位现象,TH阳性神经元显著减少(均P<0.01)。结论NF-κB参与了MPTP PD鼠发病过程,黑质中NF-κB过度激活是MPTP对小鼠造成损害作用的机制之一。预先使用PDTC对MPTP PD鼠起到一定神经保护作用。

PDTC对重症急性胰腺炎大鼠腺胞细胞凋亡的影响

目的观察胰腺腺胞细胞凋亡在大鼠重症急性胰腺炎中的表达。方法大鼠60只随机分为对照组、模型组、干预组。造模开始第3、6、12 h麻醉后左心室采血处死,取胰腺组织;TUNEL法进行细胞凋亡检测,双抗体夹心ABC-ELISA法测定NF-κB及Bcl-2的含量。结果与对照组比较,模型组大鼠血清淀粉酶、胰腺组织病理学评分、血浆NF-κB、Bcl-2含量显著增高(P<0.01),NF-κB与Bcl-2呈正相关关系(r=0.435,P<0.05);与模型组比较,干预组血淀粉酶升高幅度和NF-κB、Bcl-2含量明显降低,细胞凋亡指数增加(P<0.01)。结论 NF-κB激活介导上调Bcl-2参与L-精氨酸诱导的SAP发生、发展过程;PDTC干预NF-κB激活使大鼠胰腺腺胞细胞凋亡增加,改善胰腺病理损伤。

抗氧化剂对大鼠重症急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的探讨四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对重症急性胰腺炎(SAP)胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法 SD 大鼠72只,随机分为:假手术组(sham operation,SO)、SAP 组和 PDTC 组。SAP 模型采用5%牛磺胆酸钠1 ml/kg 胰胆管逆行穿刺注射建立,PDTC 组在造模前1 h 给予腹腔注射PDTC(100 mg/kg),术后分4个时段(1、3、6、12h)分批进行腹主动脉采血后处死,取胰腺组织作病理切片与液氮冻存。胰腺腺泡细胞的凋亡检测应用 TUNEL 法、电镜以及免疫组化法检测胰腺组织 Caspase-3的表达;核因子(NF)-kB 活化的检测应用免疫组化法。同时观察各组血清淀粉酶、脂肪酶水平及胰腺组织病理学评分。结果 SAP 组各时间点血清淀粉酶及脂肪酶水平及胰腺组织病理组织学计分较 SO 组显著增高(P<0.05)。PDTC 治疗组血清淀粉酶、脂肪酶水平较 SAP 组明显降低;胰腺组织病理组织学评分明显改善。PDTC 治疗后3、6、12 h 胰腺组织 Caspase-3的表达显著高于 SAP 组(P<0.01),而在1 h无统计学差异;各时间点胰腺腺泡细胞凋亡指数显著高下 SAP 组(P<0.01);NF-kB 的活化显著低于SAP 组(P<0.01)。结论 SAP 时,PDTC 可能通过抑制 NF-kB 的活化,从而抑制 NF-kB 介导胰腺细胞的抗凋亡效应,减少胰腺腺泡细胞坏死。

核转录因子-κB参与光气吸入性肺损伤NLRP3炎性小体的表达

目的通过四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂（PDTC）阻断核转录因子-κB（NF—κB）信号传导通路，探讨NF-κB信号通路对光气吸人性急性肺损伤（ALI）大鼠NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）的表达和细胞焦亡的影响。方法采用大鼠光气吸入性肺损伤动物模型。将30只大鼠随机（随机数字法）分为三组，空气对照组（吸入与光气染毒组同等流量的空气）10只，光气染毒组（吸入8．33mg／L纯度为100％的光气5min）10只，PDTC干预组（吸人8．33mg／L纯度为100％的光气5min，腹腔注射NF-κB抑制剂PDTC 100mg／kg）10只。染毒6h后收集血清，支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织。测定中性粒细胞细胞数、蛋白含量和肺湿／干质量比（W/D）。制作肺脏石蜡切片，HE染色观察形态学改变，免疫组织化学检测肺组织中NLRP3蛋白表达水平。RT-PCR方法对肺脏组织中NF-κBp65、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）mRNA的水平进行半定量研究。蛋白质免疫印迹试验（Western blot）技术检测肺脏组织中NF-κBp65、NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白含量。采用双抗体夹心酶标免疫分析法（ELISA法）测定各组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33水平。采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）法检测肺脏组织的细胞焦亡情况。结果成功复制光气吸入性肺损伤模型。染毒6h后HE染色形态学观察发现：光气染毒组肺组织中大量炎性细胞浸润，免疫组织化学染色结果显示：光气染毒组肺组织中可见较多NLRP3阳性细胞。与空气对照组相比，光气染毒组肺脏组织中NF-κBp65、NLRP3和caspase-1mRNA和蛋白表达量明显升高（P〈0．05）；与光气染毒组比较，PDTC干预组NF-κBp65、NLRP3和caspase-1mRNA和蛋白表达量明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。与空气对照组相比，光气染毒组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33蛋白含量明显升高（P〈0．05）；与光气染毒组比较，PDTC干预组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33蛋白含量明显下降，差异有统计学意义（P〈0．05）。TUNEL结果提示光气染毒组肺脏组织细胞焦亡明显增多，经PDTC干预后肺脏组织细胞焦亡明显降低。结论NF-κB信号通路促进大鼠光气吸人性ALI中NLRP3炎性小体的表达和细胞焦亡的发生，通过阻断NF-κB信号通路可下调肺脏NLRP3炎性小体的表达，抑制细胞焦亡进而减轻急性肺损伤。

NF-κB信号通路在急性肾损伤小鼠细胞凋亡中的作用

目的通过四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂（PDTC）阻断核转录因子-KB（NF—KB）信号传导通路，探讨NF．KB信号传导通路对急性肾损伤（AKI）小鼠细胞凋亡的影响。方法将18只C57BL／6小鼠随机（随机数字法）分为3组：正常组、AKI组和PDTC组，采用夹闭双侧肾蒂45min后再开放的方法建立小鼠AKI模型，PDTC组在再开放时腹腔注射NF—KB抑制剂PDTC50mg/kg，操作均在南京医科大学鼓楼临床医学院动物实验中心洁净手术区进行。于造模后48h采外周血用生化检测仪检测尿素氮和肌酐，并取肾组织采用HE染色观察各组肾组织病理改变，运用免疫组化法测定肾组织中NF—KB-065、Bcl-2、TNFRl、caspase-3的含量，采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）法检测肾脏细胞凋亡指数。样本均数间的两两比较采用t检验。结果（1）PDTC组较AKI组肾组织损害减轻，肾脏病理PMlers评分、尿素氮及肌酐水平均显著降低[（2．83±0．41）vs．（4．50±0．55）分，（61．65±3．06）VS．（77．78±5．82）mmo^L，（74．33±9．83）VS．（152．00±16．55）μmoL／L，P=0．000，0．000，0．000]。（2）AKI组肾组织匀浆中NF—KB活性均较正常组显著升高[（35．83±3．06）％VS．（3．88±0．75）％，P=0．000]，PDTC组较AKI比较NF—KB活性显著降低[（20．33±2．34）％VS．（35．83±3．06）％，P=0．000]。（3）PDTC组较AKI组肾组织凋亡细胞数显著降低[（16．67±1．15）％VS．（28．00±2．01）％，P=0．001]。（4）PDTC组较AKI组促凋亡蛋白easpase-3、TNFRl水平显著降低[（7．00±1．26）VS．（11．00±1．26），（5．55±0．82）VS．（9．75±0．76），P=0．000，0．000]，而抗凋亡蛋白bel．2水平则显著升高[（10．50±1．38）VS．（1．83±0．98），P=0．000]。结论NF—KB信号传导通路促进AKI小鼠细胞凋亡的发生，特异性阻断NF—KB信号通路可减轻肾脏细胞凋亡，改善肾功能。

血管生成素-1在光气急性肺损伤中的作用

目的观察大鼠光气染毒后Ang—1，NF—κB水平变化，探讨Ang—1在光气所致大鼠急性肺损伤中的作用机制。方法（1）大鼠随机（随机数字法）分为光气组和空气组。（2）大鼠分为光气组、PDTC组和空气组。（3）大鼠气体和药物处理后常规饲养到预定时刻取肺计算湿／f质量比值，BALF白细胞数、总蛋白和血清Ang-1水平。测动脉血气，检测肺组织Ang-1和NF-κB水平。结果（1）光气染毒后48h内血清Ang-1随着时间延长有降低趋势。（2）干预实验中，①光气组肺损伤指标与空气组比较均增高（P〈0．05）；②光气组血清Ang-1、动脉血氧分压与空气组比较均降低（P〈0．05）；③光气组肺损伤程度与干预组比较均增高（P〈0．05）；④光气组血清Ang-1、动脉血氧分压与PDTC组比较均降低（P〈0．05）。⑤肺蛋白印迹与免疫组化结果一致，结果显示：空气组Ang-1表达正常；光气组Ang-1表达明显减少；PDTC组与光气组相比Ang-1表达增高，与空气组相比表达减少。空气组NF—κB表达正常；光气组NF—κB表达明显增高；PDTC组与光气组相比NF—κB表达降低，与空气组相比表达增高。结论（1）光气染毒后48h内随着时间延长，血清Ang-1水平降低。（2）Ang-1通过NF—κB信号传导通路，减轻炎症因子介导的炎症反应，减轻肺脏内皮通透性，减轻急性肺脏损伤。

PDTC对急性坏死性胰腺炎大鼠急性肺损伤的影响

目的:探讨四氢化吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠急性肺损伤的影响。方法:36只成年SD大鼠随机均分为:假手术组,ANP组,PDTC预处理组。ANP模型采用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠的方法,PDTC预处理组在造模前l h腹腔注射PDTC(30 mg/kg)。术后6 h处死动物,经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AMs),用流式细胞仪检测AMs凋亡情况,免疫组化和Western blot法测定AMs中NF-κB和CYLD活性水平;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α和IL-1β含量;同时行肺组织病理学检查和肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平检测。结果:假手术组肺组织未见病理改变,ANP组和PDTC预处理组肺组织均出现充血、水肿、炎性渗出等病理改变,但PDTC预处理组病变程度轻与ANP组;ANP组肺组织的MPO活性,以及BALF的TNF-α,IL-1β含量较假手术组明显升高(均P<0.05),而PDTC预处理组上述指标的升高被明显抑制,与ANP组比较,差异有统计学意义(均P<0.05);假手术组,ANP组,PDTC预处理组AMs凋亡率分别为(3.47±1.45)%,(1.16±0.31)%,(1.80±0.60)%,各组间差异有统计学意义(均P<0.05);免疫组化显示,AMs中的NF-κB在假手术组、ANP组、PDTC预处理组分别呈弱阳性、强阳性、中等阳性表达;假手术组,ANP组,PDTC预处理组AMs的NF-κB的相对表达量分别为0.08±0.03,0.18±0.06,0.13±0.04,各组间差异均有统计学意义(均P<0.05),3组CYLD的相对表达量分别为0.32±0.09,0.15±0.05,0.26±0.08,假手术组与ANP组间差异有统计学意义(P<0.05),但与PDTC预处理组间差异无统计学意义(P>0.05);ANP组,PDTC预处理组AMs中NF-κB与CYLD的表达活性均呈负相关(r=-0.708,r=-0.481,均P<0.05)。结论:PDTC可能通过抑制NF-κB的活化从而诱导ANP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡,并增强NF-κB负性调控因子CYLD的表达,进而减轻肺损伤。

核因子-κB抑制剂对胶质瘤干细胞放疗增敏的作用

目的探讨核因子-κB（NF-κB）抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对胶质瘤干细胞（GSLC）放疗增敏的作用和机制。方法用无血清悬浮培养方法培养胶质瘤干细胞U87-sph，并用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）测定干细胞标志物的表达。用Westernblot比较放疗后不同时间点U87与U87-sph中NF-κB及p-NF-κB表达。用膜联蛋白V（AnnexinV）-异硫氰酸荧光素（FITC）／碘化丙锭（PI）双染方法检测单独PDTC、单独放疗、PDTC联合放疗等不同分组的U87和U87-sph的凋亡率。采用Westernblot检测U87-sph在PDTC联合放疗时凋亡相关蛋白及NF-κB通路蛋白的表达。结果RT-PCR检测U87-sph中干细胞标志物的表达较其亲本细胞株增加。Westernblot结果显示x射线照射后不同时间点，U87-sph中p-NF-κB／p65表达明显增加（P=0．001），且呈时间依赖性。而在U87细胞中变化不明显（P=0．059）。U87-sph的单独PDTC处理组，单独放疗组和PDTC联合放疗组的凋亡率与对照组比较依次增加（1．10±O．07）倍（P=0．651）、（1．49±0．12）倍（P=0．009）、（3．20±0．19）倍（P=0．005）。PDTC联合放疗组的凋亡率与单独PDTC组、单独放疗组比较均明显增加（P=0．003，P=0．004）。Westernblot结果显示U87-sph的PDTC联合放疗组中剪切型半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-8与剪切型Caspase-3表达均明显增加；U87．sph在单独PDTC作用时，p-NF-κB、P-抑制因子KB（p-κB）表达均降低，单独放疗时，两者均增强，而在PDTC联合放疗时，两者表达是降低的；U87-sph中细胞FLICE抑制蛋白（cFLIP）的表达趋势与p-NF-κB相同。结论放疗后GSLC中NF-κB通路明显激活。PDTC可以通过抑制放疗后GSLC中NF-κB通路的激活从而诱导GSLC凋亡。