纤蛇纹石石棉及代用纤维粉尘的光谱研究与噻唑蓝(MTT)比色法分析

以纤蛇纹石石棉、陶瓷纤维、玻璃纤维、岩棉、硅灰石为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测染毒72h后V79细胞的存活率,并通过吉姆萨染色观察细胞形态学上的变化。不同浓度ρ/(μg.ml-1)的矿物粉尘(100,200,400,600,800,1000)作用72h后,V79存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现大量细胞衰亡,呈现出剂量效应关系,且细胞毒性大小为玻璃纤维>纤蛇纹石石棉>陶瓷纤维>硅灰石>岩棉;形态学观察发现染毒细胞出现空泡、肿胀、裸核、黑褐色颗粒以及胞浆胞核模糊、形态变化等现象,且不同的粉尘对V79细胞的影响不同。总体而言,岩棉是五种粉尘中毒性最低的石棉代用纤维。

四氮唑蓝比色法检测白细胞介素1α对鼠甲状腺细胞增殖的影响

四氮唑蓝比色法检测白细胞介素１α对鼠甲状腺细胞增殖的影响１００８５３北京解放军总医院王坚，罗国春，巴建明关键词白细胞介素－１，甲状腺素，比色法，四氮唑蓝中国图书资料分类号Ｒ３３５．３白细胞介素１（ＩＬ－１）对甲状腺细胞的生长和功能有调节作用。低浓度Ｉ...

氯化硝基四氮唑蓝比色法测定小儿脑脊液乳酸含量及临床应用

氯化硝基四氮唑蓝比色法测定小儿脑脊液乳酸含量及临床应用温州医学院附属二院检验科（３２５０２７）丁红香温州医学院附属一医检验科王明山临床上利用ＣＳＦ常规检验和细菌检查在鉴别脑膜炎病因和判断预后方面有一定的局限性。如：对早期或经部分治疗后的化脓性脑膜炎（...

四氮唑蓝比色法测定血清糖化白蛋白

为了建立用自动生化分析仪测定血清糖化白蛋白的方法，采用聚乙二醇沉淀血清球蛋白，分离出的白蛋白用四氮唑蓝比色法在ＣＯＢＡＳＭＩＲＡ全自动分析仪进行血清糖化白蛋白测定。本法有较好的精密度和准确度，批内ＣＶ３．２％，批间ＣＶ７．４％，回收率９７．２％～１０５．４％。测定１８６例正常人，正常参考范围０．８４±０．２９ｍｍｏｌ／Ｌ，１３６例糖尿病人为１．５２±０．５５ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＜０．００１。采用本法测定基本参数，不仅可以测定血清糖化白蛋白，而且还可同时测定糖化血清蛋白，方法简单易行，是糖尿病监控和筛选的有用指标。

比色法测定果糖胺的方法

目的 :对比色法测定果糖胺的方法进行了探讨 ,建立了一种适合基层使用的方法。方法 :此法降低了对实验设备的要求 ,用此法对 10 0例正常人进行血清果糖胺测定其 χ=(2 5 .36± 4.2 1) μmol/克蛋白 与文献报道的正常参考值 (2 3.5± 3.5 2 ) μmol/克蛋白 无显著差异 (P >0 .0 5 )。结果表明 :本文建立的方法是可行的。

肿瘤细胞计数——单波长噻唑蓝比色分析法

将噻唑蓝（ＭＴＴ）与肿瘤细胞（ＭＧｃ８０－３）共育４～６ｈ，产生ＭＴＴ甲Ｚａ蓝色结晶，溶解后，用酶标比色计采用单一检测波长４９２ｎｍ测定ＯＤ值，可以很好地反映肿瘤活细胞数目的变化，与细胞增殖数目成直线关系。与双波长ＭＴＴ比色分析法、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法比较，三者与肿瘤活细胞数目的相关密切无显著差异，可互相代替；而单波长ＭＴＴ比色分析法具有简单、方便、客观、准确、重复性好、无同位素污染等优点。

氯化硝基四氮唑蓝显色检测超氧阴离子自由基的研究

将超氧化钾(KO2)溶解于二甲基亚砜(DMSO)和十八冠醚混合溶剂中可以制备稳定的超氧阴离子自由基(O2-.)的溶液,在该溶液体系中O2-.与氯化硝基四氮唑蓝(nitroblue tetrazolium,NBT)可以定量反应生成蓝色的单甲臢(monoformazan),用分光光度法进行检测。研究证实:单甲臢在DMSO溶液中的最大吸收波长为680 nm;反应时间和反应温度对测定结果有一定的影响。NBT与O2-.反应5 min较为适宜;由于低温条件下O2-.较为稳定,故测定温度维持在20℃左右。反应后体系吸光度与O2-.量之间的线性方程为:A680=(-0.071±0.015)+(2.607±0.037)X,r=0.999 8,其中X为O2-.的量,标准偏差为1.4%。抗坏血酸对O2-.清除效果的验证实验表明,该方法可应用于实验室抗氧化剂的筛选与研究。

MTT法快速测定人表皮细胞的生长增殖

目的 建立一种快速测定体外培养表皮细胞生长增殖的方法.方法 利用MTT只被活细胞还原成紫色颗粒的特性,通过比色分析测定吸光度值,用于检测细胞的数量与活性；并与3H－TdR掺入法进行比较.结果 表皮细胞量在0．125～2．0×105细胞／孔时与所测定的吸光度值呈一良好线性关系(r＝0．9689).用MTT法测定人表皮细胞在二种不同培养基中生长增殖与3H－TdR掺入法所测结果意义一致.结论 MTT法用于测定表皮细胞的生长增殖简便、迅速。

温石棉、纳米SiO2、硅灰石及人造纤维粉尘的细胞毒性研究

以温石棉、纳米SiO_2、硅灰石及人造纤维(陶瓷纤维、玻璃纤维、岩棉)6种粉尘为受试物,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测染毒72 h后V79细胞的存活率,并通过吉姆萨染色观察细胞形态学差异,评价6种粉尘对细胞的影响。结果表明,不同质量浓度的矿物粉尘(100μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、600 μg/mL、800 μg/mL、1 000 μg/mL)作用72 h后,V79存活率下降,细胞增殖受到抑制并出现大量细胞坏死,呈现出剂量-效应关系,且对细胞存活的影响从大到小排列为纳米SiO_2、玻璃纤维、温石棉、陶瓷纤维、硅灰石、岩棉;形态学观察发现接触纳米SiO_2的V79细胞很难找到完好的,形态变化最为严重,岩棉粉尘对V79细胞形态影响比其他5种粉尘弱,多数细胞形态正常,6种粉尘对细胞形态学的影响从大到小分别为纳米SiO_2、玻璃纤维、陶瓷纤维、硅灰石、温石棉、岩棉。

常用化疗药物对不同组织类型非小细胞肺癌体外药敏实验

目的探讨三种组织类型的非小细胞肺癌(NSCLC)对5种临床常用化疗药物的敏感性。方法28例临床肺部肿瘤标本制备成组织细胞悬液,在体外(96孔细胞培养板内)培养,24 h后加入化疗药物。应用四氮唑蓝比色(MTT)法检测各孔的吸光度值并计算出肿瘤细胞对所试药物的敏感率。结果肺腺癌对异环磷酰胺、丝裂霉素、顺铂的敏感率分别为75%、83%和75%;鳞癌对异环磷酰胺、丝裂霉素、顺铂的敏感率均达到80%。肺腺癌、鳞癌对紫杉醇的敏感率不高,而腺鳞癌对该药的敏感率可达100%。肺腺癌对阿霉素的敏感率仅为33%,肺鳞癌对该药也无明显反应性。结论不同组织类型非小细胞肺癌对5种化疗药物的敏感性存在显著差异。

雄黄对乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药的逆转及机制研究

目的 探讨中药雄黄对乳腺癌多药耐药细胞系 (MCF 7/ADM )的逆转作用及可能的逆转机制。方法 药物敏感试验采用四氮唑蓝 (MTT)比色法 ,细胞内药物浓度测定采用荧光分光光度法 ;基因表达水平检测采用RT -PCR法。结果 雄黄在 0～ 2 5 μg/ml浓度范围内对MCF 7/ADM细胞未见明显毒副作用 ;15 μg/ml、2 5 μg/ml雄黄逆转倍数分别为 2 0倍和 2 8倍 ,并能明显抑制mdr 1基因的转录水平。 结论 雄黄可以逆转MCF 7/ADM细胞的多药耐药性 ,并呈剂量依赖性 ;可能的逆转机制为下调mdr

辛伐他汀对大鼠血管外膜成纤维细胞增殖迁移和胶原合成的影响

为观察辛伐他汀对血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成的影响 ,用组织贴块法培养SD大鼠的血管外膜成纤维细胞 ,以四氮唑蓝比色法测定细胞增殖 ,以Sarkar方法测定血管外膜成纤维细胞迁移距离 ,以3 H 脯氨酸掺入法测定胶原合成。结果发现 ,随着辛伐他汀浓度增高血管外膜成纤维细胞的A4 90值呈递减趋势 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4mol/L组的A4 90值分别为 0 .2 91± 0 .0 11、0 .2 6 5± 0 .0 0 6、0 .2 34± 0 .0 0 8和 0 .2 14± 0 .0 0 6 ,与对照组(0 .335± 0 .0 18)差异显著 (P均 <0 .0 1) ;随着辛伐他汀浓度增高血管外膜成纤维细胞的迁移距离呈递减趋势 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4mol/L组的迁移距离分别为 6 .5± 1.1mm、5 .3± 1.2mm、4 .1± 1.0mm和 2 .9± 0 .9mm ,与对照组 (8.1± 1.8mm)差异显著 (P均 <0 .0 1)。随着辛伐他汀浓度的增高的3 H 脯氨酸掺入率呈递减趋势。 10 -7、10 -6 、10 -5及 10 -4mol/L组血管外膜成纤维细胞的3 H 脯氨酸掺入率分别为 (cpm/ 5 0 0 0细胞 ) 385± 5 1、2 72± 4 8、16 1± 38和 14 1± 36 ,与对照组 (6 5 5± 5 8)差异显著 (P均 <0 .0 1)。此结果提示 ,辛伐他汀可以剂量依赖地抑制血管外膜成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成 ,这可能对改善血管重塑有一?

白细胞介素1α对鼠甲状腺细胞增殖的影响

目的 :观察 TSH存在和缺乏时白细胞介素 - 1α( IL- 1α)对鼠甲状腺细胞增殖的影响。 方法 :FRTL - 5细胞培养 ,经不同浓度 IL - 1α(含 TSH或不含 TSH)孵育 ,用四氮唑蓝 ( MTT)比色法检测细胞增殖。 结果 :在无 TSH条件下 IL- 1α2 0～ 2 0 0 0 k U/ L,对 FRTL- 5细胞无明显促增殖作用 ;在 TSH存在时 IL- 1α2 0和 2 0 0 k U/ L 对 FRTL- 5细胞增殖亦无明显抑制作用 ,IL- 1α2 0 0 0 k U/ / L则可显著抑制 TSH介导的 FRTL- 5细胞增殖。 结论 :本研究提示较高浓度的 IL-1α能抑制

阳和汤含药血清体外对肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响

目的:采用血清药理学的方法,观察阳和汤对SMMC-7721细胞生长增殖的影响,探索该复方对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用。方法:设空白对照组、阳性对照组、阳和汤组,分别制备成含药血清与体外培养的肝癌SMMC-7721细胞共孵,采用倒置显微镜观察各组SMMC-7721细胞生长形态变化以及用MTT法检测各组含药血清作用24h、48h、72h后对肝癌SMMC-7721细胞的增殖影响情况和抑制率。结果:与同时段内空白对照组比较,阳性对照组以及阳和汤组均使SMMC-7721细胞生长形态发生明显改变,细胞呈现生长不良状态,数量减少;MTT实验结果显示阳性对照组、阳和汤组含药血清对体外培养的SMMC-7721细胞作用24h、48h、72h后,与同时段内空白对照组比较,细胞OD值均显著下降(P<0.01),细胞生长增殖抑制率分别为18.65%、27.40%和30.88%(P<0.01)。结论:结果表明阳和汤含药血清对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用,其抑制作用呈现时间-效应关系。

对苯二甲酸对NIH-3T3细胞间隙连接通讯功能的影响

目的 研究对苯二甲酸 (TPA)对NIH 3T3细胞间隙连接通讯 (GJIC)功能的影响。方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法及划痕标记示踪技术 (scrape loadinganddyetransfer,SLDT) ,以 0、 12 5、 2 5 0、 5 0 0、 10 0 0、 2 0 0 0 μg/ml的剂量染毒细胞 ,同时设立溶剂对照及阳性对照 ,观察TPA对GJIC的影响。结果 TPA对细胞GJIC功能抑制随着染毒剂量增大和染毒时间延长而逐渐增强 ,呈现剂量 效应和时间 效应关系 ,在 2 5 0 μg/ml或更高剂量染毒 1h或更长时间时 ,细胞GJIC功能被明显抑制 ,在染毒 8h时各剂量组细胞GJIC功能抑制效应均最显著 ;去除TPA后 ,GJIC功能有恢复倾向 ,但在 12h内仍不能恢复至正常水平 ;加入哺乳动物肝脏微粒体酶 (S9)能加重TPA对细胞GJIC功能抑制作用。结论 TPA原形及其代谢产物对NIH

体外视网膜母细胞瘤细胞对不同化疗药物的敏感性分析

【目的】研究视网膜母细胞瘤(retinoblastma,RB)细胞对化疗药物的体外敏感性,以制定合理的RB临床个体化化疗方案。【方法】应用3-(4,5)-双甲基-2噻唑-(2,5)-二甲基溴化四氮唑蓝(MTT)体外药敏法,测定35例RB患儿瘤细胞对常用的阿霉素、长春新碱、鬼臼乙叉苷、卡铂、甲氨喋呤、放线菌素D和噻替哌共7种化疗药物的敏感性。【结果】RB的药敏可评价率是86.7%。同一种药物对不同的肿瘤细胞有不同的抑制率,7种药物的最高抑制率是卡铂(91.8%)、噻替哌(90.7%)、放线菌素D(89.7%)、鬼臼乙叉苷(88.4%)、阿霉素(86.61%)、甲氨喋呤(58.66%)、长春新碱(54.95%);最低的直接抑制率均是0。【结论】不同RB个体的瘤细胞对不同的化疗药物有不同的敏感性,体外药敏试验筛选敏感化疗药物对临床RB个体化治疗有应用价值。

化毒补虚方含药血清对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的实验研究

目的:观察不同浓度、不同时间化毒补虚方诱导肺腺癌细胞A549的抑制增殖作用及促进凋亡作用。方法:应用四氮唑蓝比色法(MTT法)检测化毒补虚方对人肺腺癌细胞增殖的影响,同时筛选出起有效抑制作用的浓度;并应用倒置显微镜观察细胞形态的变化及荧光显微镜、透射电子显微镜(TEM)观察细胞超微结构的变化。结果:MTT实验显示化毒补虚方抑制肺腺癌细胞增殖,其中50%浓度含药血清组对A549细胞抑制作用明显,在48 h达作用高峰;观察细胞形态及超微结构发现A549细胞形态发生明显改变,并可见凋亡小体。结论:化毒补虚方通过杀伤肺腺癌细胞、诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。

紫杉醇、顺铂对绒癌耐药细胞抑制作用的观察

目的 探讨紫杉醇(Paclitaxel)、顺铂(Cisplatin)对耐药人绒毛膜癌细胞株JAR/KSM的体外抑制作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,观察不同浓度的紫杉醇、顺铂对人绒癌JAR细胞株和耐药人绒癌JAR/KSM细胞株的抑制作用,分析耐药株和非耐药株对紫杉醇和顺铂的敏感性。结果 JAR细胞和JAR/KSM细胞对紫杉醇和顺铂均敏感,两药单独使用时,随着药物浓度增加其抑制作用也增加。耐药细胞林和非耐药细胞株对两药的敏感性无显著性差异。结论 对KSM耐药的人绒毛膜癌细胞株和非耐药人绒毛膜癌细胞株对化疗药物紫杉醇、顺铂均具有敏感性。

流动注射分析法测定氢化可的松片剂、注射剂的含量

根据氢化可的松在碱性溶液中，受热还原四氮唑蓝生成蓝色的双甲化合物，在525nm波长处测定其吸收度。采用单管路系统，流速为3．85ml／min，进样100μl，检测限可达1μg／ml，每小时可进行90次测定，精确度分别为0．6％（注射剂），0．4％（片剂）。