虫草菌丝调节AMPK/SirT1信号通路对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的作用

目的研究虫草菌丝(cultured mycelium Cordyceps sinensis,CMCS)对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型小鼠肝腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1(AMPK/SirT1)信号通路的作用机制。方法将C57BL/6小鼠(n=40)按体重分层随机分为5组:正常对照组、CMCS对照组(3.0 g/kg)、模型对照组、CMCS 1.5 g/kg组(1.5 g/kg)和CMCS 3.0 g/kg组(3.0 g/kg),采用腹腔注射10%CCl4(2 mL/kg)诱导小鼠肝损伤模型。造模与给药2周后,检测血清ALT、AST、TBil水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝炎症;天狼星红染色观察肝胶原沉积;Jamall’s法检测肝羟脯氨酸(Hyp)含量;流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测肝组织IL-6、MCP-1、IFN-γ、TNF、IL-10、IL-12p70水平;免疫组化观察肝组织CollagenⅠ和SirT1表达情况;RT-qPCR检测肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1和p53水平。结果CCl4染毒2周后,模型对照组血清ALT、AST、TBil水平均明显升高(P<0.05);HE染色和天狼星红染色分别提示肝内大量炎症细胞浸润和胶原沉积;肝Hyp含量及IL-6、MCP-1、TNF表达明显增多(P<0.05),IL-10和IL-12p70表达明显减少(P<0.01);免疫组化染色提示肝组织Collagen I表达增多;SirT1在肝窦间隙表达减少,在胶原沉积处表达增多;RT-qPCR检测提示肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达下降,p53表达增多(P<0.05)。CMCS可显著降低纤维化小鼠血清ALT、AST水平;降低肝组织IL-6、MCP-1、TNF表达(P<0.05),上调IL-10、IL-12p70水平(P<0.05);减少肝炎细胞浸润、胶原形成和Hyp含量,促进肝窦内SirT1表达,上调肝Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达(P<0.05);减轻肝内CollagenⅠ、p53表达(P<0.05)。与CMCS 1.5 g/kg组相比,CMCS 3.0 g/kg组抑制肝炎症、胶原沉积及上调AMPK/SirT1表达更为明显(P<0.05)。结论CMCS可通过上调AMPK/SirT1信号通路而发挥抗CCl4诱导小鼠肝纤维化的作用。

40%四氯化碳大鼠慢性肝损伤模型的研究

目的 :研究 4 0 %四氯化碳致大鼠慢性肝损伤病理变化过程 ,完善 4 0 %四氯化碳慢性肝损伤的动物模型。方法 :雄性Wistar大鼠 80只 ,随机分为对照组和实验组。对照组每周两次给予溶剂玉米油 ,实验组每周两次给予 4 0 %四氯化碳 ,0 1ml/ 10 0g bw。于实验第 1、 3、 6、 8周染毒 4 8h后将动物处死 ,取肝组织作常规HE、Masson和Retculin染色 ,光镜下观察病理变化。结果 :染毒 1周后 ,中央静脉周围出现较多坏死肝细胞 ,并伴有气球样变和脂肪变性。染毒 3周后 ,气球样变和坏死进一步增多 ,并形成桥接坏死 ,局部网状纤维支架塌陷。染毒 6周后出现肝纤维化。染毒第 8周出现肝硬化。结论 :4 0 %四氯化碳使肝组织严重坏死 ,从而致肝组织第八周就出现明确的肝硬化。

不同浓度四氯化碳诱导小鼠肝纤维化模型的比较

目的对比观察不同剂量四氯化碳(CCl_4)诱导小鼠肝纤维化模型的效果,探索一种稳定可行且较为高效的肝纤维化小鼠造模方法。方法将60只C57BL/6J小鼠随机分为正常组和模型组,模型组小鼠分别腹腔注射体积分数10%的CCl4(5 mL/kg)以及体积分数20%的CCl_4(1 mL/kg),每周2次,连续8周。分别在造模2周、4周、6周、8周注射后处死小鼠,进行HE染色和Masson染色,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,以及肝匀浆氧化/抗氧化指标,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)和超氧化物岐化酶(SOD)变化,Western blotting法检测肝组织中胶原表达情况。结果随着造模时间的延长,病理染色显示肝纤维化程度不断加重,胶原表达逐步增加,血清ALT、AST水平逐渐升高,肝匀浆SOD、GSH活性降低,氧化产物MDA含量升高。在造模的相同时间点,体积分数10%CCl_4、5 m L/kg剂量组相比于体积分数20%CCl4、1 m L/kg剂量组,病理染色显示肝纤维化程度更加严重,血清ALT、AST水平明显升高,肝脏中SOD、GSH活性明显降低,氧化产物MDA含量明显升高,肝纤维化形成的时间更短,效果更好。结论两种造模方法都能形成肝纤维化小鼠模型,但体积分数10%CCl_4(5 m L/kg)剂量组的纤维化形成时间更短且效果更好。因此,每周2次,连续8周腹腔注射10%CCl_4(5 m L/kg)可作为一种较为理想的纤维化小鼠造模方法。

大豆皂苷对四氯化碳致肝损伤小鼠肝脏氧化应激的干预作用

研究大豆皂苷对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激的干预作用。将实验小鼠按体重随机分为5组,即正常对照组、模型对照组、水飞蓟素组(阳性对照组)及大豆皂苷高、低剂量组。每日给药1次,连续7 d。实验末期,除正常对照组外,其余组小鼠腹腔注射CCl4建立急性肝损伤模型,比色法检测血清白蛋白(Alb)含量、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性以及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。结果显示,大豆皂苷明显增高CCl4致急性肝损伤小鼠血清Alb水平,降低血清ALT、AST和ALP活性;升高肝组织总SOD、CAT和GPx活性,提高肝GSH水平,降低肝MDA水平;升高肝线粒体Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase和Mn-SOD活性,降低肝线粒体MDA含量。这说明大豆皂苷可降低CCl4致急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激,对肝损伤具有保护作用。

肝勃宁对四氯化碳致大鼠慢性肝损害的保护作用

四氯化碳（ＣＣｌ４）致大鼠慢性肝损害，用肝勃宁（ＧＢＮ）２．３１，０．７７，０．２６ｇ／ｋｇ分别给大鼠每天１次ｉｇ，连续４５天。经病理学检查显示能减轻肝纤维化程度，肝脂肪变、嗜酸性坏死发生率明显减少；血清总蛋白量增高，ＳＧＰＴ、ＳＧＯＴ、唾液酸浓度、羟脯氨酸含量下降。结果表明ＧＢＮ对ＣＣｌ４致大鼠慢性肝损害有一定保护作用。

红毛五加多糖对四氯化碳肝损伤大鼠的保护作用

目的:研究红毛五加多糖(AGP)对四氯化碳(CCl4)肝损伤的保护作用。方法:大鼠CCl4肝损伤模型进行实验。结果:AGP能明显抑制CCl4肝损伤大鼠血清AST、ALP、BILIT和肝TG水平的升高及血清TP、TG、TC、Alb和Glu水平的下降;同时使血清升高的NO含量降低。结论:AGP对CCl4肝损伤大鼠有明显保护作用,其机制可能与降低过高的NO含量有关。

腹腔注射低浓度四氯化碳建立小鼠肝纤维化模型

在中国患肝炎病后,肝纤维化、硬化、肝癌高发.建立肝纤维化动物模型,有利于进行病理过程的研究.四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）导致肝微粒体脂质过氧化,肝脂肪变性、进而纤维化.常规采用高浓度CCl4建模型,对动物选择性强,同时因给药剂量高,动物死亡率高.本实验采用低浓度CCl4、反复腹腔注射,希望建立一套简便可行的小鼠肝纤维化建模方法.

波棱瓜子提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究波棱瓜子乙酸乙酯提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:建立四氯化碳(CC l4)诱导小鼠肝损伤模型,以测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织丙二醛(MDA)含量为指标来观察波棱瓜子乙酸乙酯提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用。结果:波棱瓜子乙酸乙酯提取物高中低剂量组均能不同程度的降低动物模型的血清ALT、AST和肝脏MDA的含量。结论:波棱瓜子乙酸乙酯提取物对化学性肝损伤具有明显的保护作用。

含羞草总黄酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究含羞草总黄酮(TFM)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法用四氯化碳建立小鼠肝损伤模型,相应药物灌胃后测定小鼠血清ALT、AST的活性,血清白蛋白(Alb)含量以及总抗氧化能力(T-AOC);并测定肝匀浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,同时观察肝脏组织病理学变化。结果与模型对照组相比,含羞草总黄酮(TFM)各剂量组ALT、AST和MDA含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),Alb含量和T-AOC活性均明显增加(P<0.05或P<0.01),SOD活力明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论含羞草总黄酮(TFM)能明显改善肝组织病理损伤程度,对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用。

黄芪多糖对四氯化碳肝损伤保护的影响

目的观察四氯化碳(CCl4)对小鼠实验性肝损伤的影响,进而探讨黄芪多糖对肝损伤的保护作用机制。方法用CCL4建立小鼠肝损伤模型。实验分正常对照组、CCl4模型组,黄芪多糖大小剂量组和联苯双酯阳性对照组。采用赖氏法测定血清谷丙转氨酶(sALT)的活力,按考马斯亮蓝蛋白测定总蛋白含量,HE染色检测小鼠肝脏形态学变化。结果黄芪多糖能有效降低CCl4引起的小鼠sALT水平与总蛋白含量的升高,明显减轻CCl4对肝组织的损伤。结论黄芪多糖具有抗CCl4所致动物肝损伤的作用。

四氯化碳联合二乙基亚硝胺对小鼠肾脏毒性作用的研究

为了研究四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_4)联合二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)对小鼠肾脏组织的毒性损伤作用,将30只雄性昆明鼠随机分为对照组和实验组,其中实验组小鼠每周2次腹腔注射15%CCl_4花生油溶液,并且自由饮用0.07%DEN溶液;而对照组小鼠注射等量的纯花生油,自由饮用纯净水,观察并记录各组小鼠的饮水、进食情况和体重变化,以及生活状态的改变。在实验过程中,分别于第3、6、8周解剖两组小鼠各4只,取其肾脏组织样本进行病理方面的组织切片观察。体重统计结果显示,与对照组相比,实验组小鼠体重明显下降。同时,实验组小鼠的肾脏系数明显高于对照组,并且具有显著差异(P<0.05)。组织切片观察发现,对照组小鼠肾脏组织结构比较清晰,排列较规则,而实验组小鼠肾脏组织呈现出显著的变性和坏死;且随着处理时间的延长,肾脏组织变得散乱无规则,细胞凝集现象越来越明显,肾小管与集合小管管腔变窄,颗粒样变性。上述结果表明CCl_4联合DEN对小鼠肾脏具有损伤效应,处理时间越长,损伤作用越严重。

腹腔注射四氯化碳辅以饮食改良制备犬慢性肝纤维化模型

探讨一种经典的、与人类慢性肝纤维化——肝硬化进程相似的大动物模型建立方法.采用15只成年健康中华田园犬:对照组5只,使用生理盐水腹腔注射及正常饲料干预;实验组10只,采用小剂量四氯化碳(CCl4)腹腔注射及高脂饮食干预.间断采血检测肝功能、血清学肝纤维化指标,B超引导下定期肝穿活检作HE染色和Masson染色.56周后所有实验动物成功诱导至不同程度的肝纤维化.丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸转氨酶、球蛋白、总胆红素、γ-谷氨酰基转肽酶以及透明质酸与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).联合应用小剂量CCl4和单纯高脂饮食可成功诱导犬慢性肝纤维化-肝硬化模型,该方法动物存活率和成模率均较高,可为后续的相关研究提供更好的平台.

地顶孢霉菌丝体对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究地顶孢霉菌丝体(AMM)对四氯化碳(CC l4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法建立CC l4诱导的小鼠急性肝损伤模型;观察AMM对血清中ALT和AST活性的影响及AMM对肝组织SOD、MDA、GSH-PX表达水平和肝、脾、胸腺指数的影响;HE染色观察AMM对CC l4小鼠肝脏形态学影响。结果 AMM(1 000、500 mg.kg-1)可显著降低血清中ALT和AST活性及肝组织匀浆中MDA的表达水平,升高肝组织匀浆中SOD、GSH-PX的表达水平,降低肝脏指数,但对脾、胸腺指数无显著影响;同时HE染色结果显示AMM能明显减轻肝脏的病理损伤。结论 AMM对CC l4所致小鼠急性肝损伤模型具有保护作用。

注射用丹酚酸A抗四氯化碳致大鼠肝纤维化的作用

目的 观察注射用丹酚酸A抗四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纤维化的作用.方法 采用皮下注射CCl4诱导大鼠肝纤维化建模;造模4周后,分为模型对照组和丹酚酸A高、低剂量组及丹酚酸胶囊组,另设正常对照组.高、低剂量组分别尾静脉注射5 mg/kg、2.5 mg/kg丹酚酸A;丹酚酸胶囊组经口灌胃丹酚酸浸膏粉50 mg/kg;正常对照组和模型对照组尾静脉注射生理盐水10 ml/kg;各组每日一次,连续给药4周后,测定血清天冬氨酸转氨酶（AST）、谷氨酸转氨酶（ALT）活性,以及肝脏脏器系数、肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的变化.结果 与模型对照组比,丹酚酸A高、低剂量组和丹酚酸胶囊组均可明显改善纤维化大鼠的体征,显著降低肝脏器系数（P＜0.05）;ALT、AST活性、Hyp含量以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达量在丹酚酸A高剂量组显著降低（P＜0.05,P＜0.01）.结论 注射用丹酚酸A具有抗肝纤维化的作用,且静脉注射5 mg/kg丹酚酸A作用优于口服50 mg/kg丹酚酸胶囊.

四氯化碳对杜氏盐藻的毒性实验

按等浓度对数间距0.2设置毒物四氯化碳(CCl_4)浓度对杜氏盐藻进行了毒性实验,根据细胞的生长以及β-胡萝卜素含量的变化,观察CCl_4对盐藻的毒性效应。结果表明,CCl_4浓度小于0.13％时对盐藻生长及β-胡萝卜素累积几乎没有影响。盐藻对CCl_4的最大耐受浓度为0.20％。CCl_4浓度达到0.32％时,5天之后造成细胞全部死亡和β-胡萝卜素累积消失。

银丝草对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察银丝草对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法将60只昆明种小鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、阳性对照组(联苯双酯滴丸)、银丝草低、中、高剂量组(10 g生药/kg、20 g生药/kg、40 g生药/kg),每组10只。通过皮下注射0.2%CCl4花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性及肝组织中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力;计算肝脏指数并同时对肝组织进行病理学检查。结果银丝草高、中、低剂量组都能不同程度地降低CCl4致小鼠急性肝损伤血清ALT,AST活性,降低肝匀浆中MDA的含量,增强SOD的活力(P<0.05)。通过病理学切片观察,银丝草各剂量组能明显改善肝组织的病理变化。结论银丝草对四氯化碳引起的小鼠急性肝损伤具有显著的保护作用,其作用机制可能与清除体内自由基和抗氧化有关。

保肝护脾液对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:观察保肝护脾液对四氯化碳化学性肝损伤的保护作用。方法:采用皮下注射2%四氯化碳石蜡油溶液ml/kg.bw造成小鼠急性肝损伤为模型,测定保肝护脾液对肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的活性,同时观察肝脏组织的病理学变化以评价肝脏损伤程度和药物的保护作用。结果:该药物能明显降低四氯化碳致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST升高,减轻四氯化碳对肝脏细胞的病理损伤。结论:保肝护脾液对四氯化碳致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。

致肝损伤毒物四氯化碳体外染毒剂量的选择

目的探讨四氯化碳(CCl4)致肝脏损伤体外实验模型的染毒剂量。方法以不同浓度CCl4作用于正常人二倍体肝细胞HL-7702细胞,使其终浓度分别为0(阴性对照),5,10,20,30 mmol/L和40 mmol/L。采用CCK8法检测不同浓度CCl4对肝细胞活性的影响,采用生化分析法检测染毒后肝细胞培养上清中谷草转氨酶(AST),谷丙转氨酶(ALT),乳酸脱氢酶(LDH),碱性磷酸酶(AKP)的水平。结果①染毒24 h后,肝细胞活性呈剂量依赖性降低,其中20-40 mmol/L CCl4对肝细胞活性有明显抑制作用,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。②染毒24 h后,随着CCl4染毒剂量的增加,各染毒组肝细胞培养上清中AST的活性有逐渐升高的趋势,其中40 mmol/L CCl4染毒组与阴性对照组比较有统计学差异(P<0.05);各染毒组肝细胞培养上清中ALT的活性逐渐增加,其中10-30 mmol/L CCl4染毒组与阴性对照组相比显著升高(P<0.05);各染毒组肝细胞培养上清中AKP和LDH的活性与阴性对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 10 mmol/L CCl4在对HL-7702肝细胞活性无明显影响的情况即可引起肝细胞培养上清中ALT的活性升高,对肝细胞膜造成一定的损伤,可作为其肝损伤机制研究的体外染毒剂量。

长柱金丝桃提取物对四氯化碳和酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用研究

为了研究长柱金丝桃提取物对四氯化碳(CCl4)和酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用,试验采用白酒灌胃的方式建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,腹腔注射CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、肝脏指数。结果表明:长柱金丝桃乙酸乙酯部位组能极显著抑制CCl4肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的升高(P<0.01),长柱金丝桃正丁醇部位组能显著抑制CCl4肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的升高(P<0.05),且两组均能显著降低肝脏指数(P<0.05);长柱金丝桃乙酸乙酯部位组能抑制酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性的升高(P<0.05),且能降低肝脏指数(P<0.05)。说明长柱金丝桃提取物对CCl4和酒精引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用。