虫草菌丝调节AMPK/SirT1信号通路对四氯化碳诱导肝纤维化小鼠的作用

目的研究虫草菌丝(cultured mycelium Cordyceps sinensis,CMCS)对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化模型小鼠肝腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1(AMPK/SirT1)信号通路的作用机制。方法将C57BL/6小鼠(n=40)按体重分层随机分为5组:正常对照组、CMCS对照组(3.0 g/kg)、模型对照组、CMCS 1.5 g/kg组(1.5 g/kg)和CMCS 3.0 g/kg组(3.0 g/kg),采用腹腔注射10%CCl4(2 mL/kg)诱导小鼠肝损伤模型。造模与给药2周后,检测血清ALT、AST、TBil水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝炎症;天狼星红染色观察肝胶原沉积;Jamall’s法检测肝羟脯氨酸(Hyp)含量;流式蛋白定量技术(cytometric bead array,CBA)检测肝组织IL-6、MCP-1、IFN-γ、TNF、IL-10、IL-12p70水平;免疫组化观察肝组织CollagenⅠ和SirT1表达情况;RT-qPCR检测肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1和p53水平。结果CCl4染毒2周后,模型对照组血清ALT、AST、TBil水平均明显升高(P<0.05);HE染色和天狼星红染色分别提示肝内大量炎症细胞浸润和胶原沉积;肝Hyp含量及IL-6、MCP-1、TNF表达明显增多(P<0.05),IL-10和IL-12p70表达明显减少(P<0.01);免疫组化染色提示肝组织Collagen I表达增多;SirT1在肝窦间隙表达减少,在胶原沉积处表达增多;RT-qPCR检测提示肝组织Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达下降,p53表达增多(P<0.05)。CMCS可显著降低纤维化小鼠血清ALT、AST水平;降低肝组织IL-6、MCP-1、TNF表达(P<0.05),上调IL-10、IL-12p70水平(P<0.05);减少肝炎细胞浸润、胶原形成和Hyp含量,促进肝窦内SirT1表达,上调肝Prkaa1、Prkaa2、Lkb1表达(P<0.05);减轻肝内CollagenⅠ、p53表达(P<0.05)。与CMCS 1.5 g/kg组相比,CMCS 3.0 g/kg组抑制肝炎症、胶原沉积及上调AMPK/SirT1表达更为明显(P<0.05)。结论CMCS可通过上调AMPK/SirT1信号通路而发挥抗CCl4诱导小鼠肝纤维化的作用。

TLR4/p65水平在四氯化碳诱导非酒精性脂肪性肝炎肝郁脾虚证大鼠中的作用

目的探讨四氯化碳对高脂高糖联合慢性束缚应激与饥饱失常诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝郁脾虚证大鼠复合模型中TLR4/p65水平变化的影响。方法将40只雄性SD大鼠随机分为:正常对照组(A组)、高脂高糖饲料+生理盐水组(B组)、高脂高糖饲料+LPS组(C组)、高脂高糖饲料+40%CCl4组(D组)。于第8周末进行证候积分统计,处死动物,计算肝指数,收集各组大鼠尿液、海马组织和血清,分别检测D-木糖排泄率,去甲肾上腺素(NE)和5-羟色胺(5-HT)含量,血清中转氨酶及TNF-α、IL-1β的含量;取肝脏组织用于冰冻切片制备,进行HE和油红染色,检测TLR4、CD68及p65的蛋白含量。结果B、C、D组大鼠证候积分、尿D-木糖排泄率、NE和5-HT显著高于A组(P<0.01);D组大鼠脂肪变性程度较其他三组明显;D组大鼠血清转氨酶、TLR4、CD68及p65的蛋白表达量明显高于A、B、C组(P<0.01)。结论40%CCl4能够显著提高高脂高糖联合慢性束缚应激与饥饱失常诱导的非酒精性脂肪性肝炎肝郁脾虚证中TLR4/p65蛋白水平的表达。

化瘀软肝胶囊对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的作用

目的探讨化瘀软肝胶囊对肝纤维化大鼠的作用以及对肝组织Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将60只大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(50只),造模组以CCl_(4)复合因素造模6周后,随机分为模型组、秋水仙碱组(0.2 mg/kg)和化瘀软肝胶囊低、中、高剂量组(0.27、0.54、1.08 g/kg),各组以相应的药物或生理盐水灌胃6周,每天2次。HE和Masson染色观察大鼠肝组织病理改变,生化法和化学发光法分别检测大鼠血清肝功能(ALT、AST、TG、TBIL)和肝纤维化指标(HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C),RT-qPCR和Western blot法检测大鼠肝组织Wnt1、Wnt3a、Wnt10、GSK-3β、β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达,免疫荧光法检测大鼠肝组织β-catenin和α-SMA蛋白表达。结果与正常组比较,模型组肝组织病理损伤,血清ALT、AST、TG、TBIL、HA、LN、PC-Ⅲ、Ⅳ-C水平升高(P<0.01),肝组织Wnt1、Wnt3a、Wnt10、β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达升高(P<0.01),GSK-3βmRNA和蛋白表达降低(P<0.01),免疫荧光显示肝组织α-SMA和β-catenin蛋白表达增强(P<0.01);与模型组比较,化瘀软肝胶囊各剂量组可不同程度地改善肝组织病理变化,减弱α-SMA荧光强度,恢复血清肝功能和肝纤维化指标(P<0.05,P<0.01),降低Wnt1、Wnt3a、Wnt10、β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01),升高GSK-3βmRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论化瘀软肝胶囊可减轻大鼠肝纤维化程度,其机制可能与调节Wnt/β-catenin信号通路中相关基因和蛋白的表达有关。

赶黄草泡腾片的制备及其对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的优化赶黄草泡腾片制备工艺,探讨其对四氯化碳(CCl_(4))诱导小鼠肝损伤的保护作用。方法在单因素试验基础上,以酸碱总量、酸碱比例、甜味剂用量为影响因素,色泽、澄清度,口感,崩解效果为评价指标,通过响应面法优化制备工艺。将小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组(0.15 g/kg)及赶黄草泡腾片高、中、低剂量组(8、4、2 g/kg),灌胃给予相应药物21 d,末次给药后除空白组外,其余各组腹腔注射0.1%CCl_(4)花生油溶液,禁食16 h后处死,检测小鼠血清中ALT、AST活性及TNF-α水平,肝组织中SOD活性及GSH、MDA水平,观察肝组织病理学变化。结果赶黄草泡腾片的最佳制备工艺条件为崩解剂(柠檬酸∶碳酸氢钠=1.4∶1)用量34.0%、赶草浸膏粉用量10.0%、甜菊糖苷用量5.0%、PEG6000用量6.0%、乳糖用量45.0%,综合评分为4.19分。与模型组比较,赶黄草泡腾片中、高剂量组小鼠肝脏指数降低(P<0.05,P<0.01),赶黄草泡腾片各剂量组小鼠ALT、AST活性降低(P<0.01),TNF-α、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性和GSH水平升高(P<0.05),且对CCl_(4)诱导的肝脏病理损伤具有一定的保护作用。结论该方法简单稳定,可用于赶黄草泡腾片的工业生产。赶黄草泡腾片对CCl_(4)诱导小鼠急性肝损伤具有保护作用,可能是通过抑制ALT、AST、TNF-α的释放,抑制脂质过氧化损伤、氧化应激反应,提高抗氧化活性发挥作用。

连续性血液透析滤过对四氯化碳模型大鼠肝肾肠功能的保护作用

背景四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))中毒是化工从业人员常见的中毒类型,但目前尚无特效的临床药物能治疗此类中毒导致的肝、肾、肠损伤.目的探索连续性血液透析滤过(continuous blood purification,CBP)对口服CCl4中毒大鼠肝、肾、肠功能的保护作用及其潜在干预机制.方法将斯泼累格·多雷大鼠分为对照组、模型组(CCl4)和CBP治疗组(CCl_(4)+CBP),利用CCl4灌胃建立大鼠模型.收集外周血用于检测白细胞和中性粒细胞数以及血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(alanine aminotransferase,AST)、D-乳酸(D-lactic acid,D-LA)、肠性脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,I-FABP)和降钙素(procalcitonin,PCT)的水平.将收集的肝肾肠组织进行相关病理检测,免疫组化法和免疫印迹法检测核转录因子(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)通路的相对表达水平.结果CBP处理可显著降低CCl_(4)引起的白细胞和中性粒细胞增多(P<0.05)以及血清BUN、Cr、CRP、ALT、AST、D-LA、I-FABP和PCT的水平的增高(P<0.05),并降低肾脏组织中损伤标记物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的表达以及肝、肾、肠相关病理形态改变.免疫组化和免疫印迹法检测显示,CBP处理能降低CCl4引起的NF-κB通路激活(P<0.05).结论CBP对CCl4引起的肝、肾、肠损伤具有保护效果,其可能通过降低CCl_(4)引起NF-κB通路激活从而改善肝、肾、肠损伤的症状.

三叶香茶菜对四氯化碳致肝纤维化大鼠TLR4信号通路的影响

目的探讨三叶香茶菜对四氯化碳(CCl_4)致肝纤维化大鼠toll样受体-4(TLR4)信号通路的影响。方法采用CCl4致肝纤维化大鼠模型,生化检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶水平(AST),HE、Masson染色病理检查评价三叶香茶菜对肝组织的保护作用,酶联免疫吸附实验检测血清白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,荧光定量PCR法检测大鼠肝组织TLR4m RNA、My D88m RNA的表达。结果三叶香茶菜能够显著抑制肝纤维化大鼠血清ALT和AST的水平,改善大鼠肝组织纤维化,抑制肝纤维化大鼠IL-1β、TNF-α的表达,对肝纤维化大鼠肝组织TLR4 m RNA的表达具有显著的下调作用,与模型对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),对My D88 m RNA的表达无显著抑制作用(P>0.05)。结论三叶香茶菜对CCl4致大鼠肝纤维化具有一定的抑制作用,机制之一是下调TLR4信号通路的活化。

蒙药地格达-4对四氯化碳致大鼠脂代谢紊乱的调节作用研究

目的研究地格达-4对四氯化碳(CCl4)致大鼠脂代谢紊乱的调节作用。方法 SD大鼠按3 ml.kg-1腹部皮下注射40%CCl4橄榄油溶液,每周两次,造模一月后动物分组,开始分别给予地格达-4高、中、低剂量(1.5,0.75,0.38 g.kg-1),并维持原方法造模,给药40 d后处理大鼠,测定血清中TC、TG、HDL的含量,以及肝组织中的TC、TG、NEFA、HL、LPL含量,并对肝组织做病理学检测。结果地格达-4能显著升高血清中TC、HDL的值,显著降低肝组织中异常升高的NEFA值、LPL和HL活力;可以显著升高肝组织中的TC值。减轻肝组织变性、坏死等病理改变。结论地格达-4对CCl4所致的大鼠脂代谢紊乱具有改善作用。

Toll样受体4在四氯化碳致大鼠慢性肝损伤中的作用机制研究

目的:动态观察肝Kupffer细胞(KCs)Toll样受体4(TLR4)mRNA及蛋白在四氯化碳(CCl4)致大鼠慢性肝损伤中的表达及作用。方法:以CCl4诱导慢性肝损伤大鼠模型,于0、4、6、8、10周采集标本,分离肝组织KCs并以逆转录聚合酶链反应检测TLR4mRNA的表达;用基质显色法测定大鼠血清内毒素水平;放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素1-β(IL1-β)水平;TLR4蛋白和核因子κB(NF-κB)蛋白采用免疫组化SP法检测。结果:0周组肝组织TLR4蛋白、KCsTLR4mRNA几乎无表达,NF-κB蛋白和炎症积分水平也处于较低水平;4、6、8、10周组肝组织TLR4蛋白、NF-κB蛋白、炎症积分和KCsTLR4mRNA以及血清内毒素、TNF-α、IL-1β水平明显升高,同0周组比较差异有显著性(P<0.001)。NF-κB蛋白、TLR4蛋白、KCsTLR4mRNA和TNF-α在第10周时较第8周有轻度下降;肝KCsTLR4mRNA的表达与血浆内毒素水平呈正相关(r=0.845,P<0.001)。结论:CCl4诱导的慢性肝损伤中,内毒素可上调KCsTLR4的表达,而TLR4的高表达进一步造成肝脏的损伤。

2-乙基-3-羟基-6-苯硫基-4(1H)-吡啶酮对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的影响

目的 研究 2 乙基 3 羟基 6 苯硫基 4(1H) 吡啶酮 (HPP)对四氯化碳 (CCl4 )损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用。方法 原位灌流法分离大鼠肝细胞培养 2 4h后加入HPP ,同时造成CCl4 损伤 ,于损伤后 2 4h和 48h测培养液中丙二醛 (MDA)含量、谷丙转氨酶 (ALT)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)的活性 ,48h后用MTT法测肝细胞存活率。结果 HPP对GPT活力的升高有抑制作用 ,同时抑制MDA的产生及肝细胞损伤造成的GSH Px活力的降低。结论 HPP能有效抑制CCl4

蝙蝠草醇提物对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的影响

研究蝙蝠草醇提物对四氯化碳(CCl_(4))所致大鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。40只雄性SD大鼠随机分为5组,包括正常组、模型组、水飞蓟素组(120 mg/kg)、蝙蝠草醇提物组(260和520 mg/kg),连续灌胃给药15 d。于第14天,除正常组外,其余大鼠腹腔注射12%CCl_(4)(5 mL/kg)建立急性肝损伤模型。造模24 h后,采血剖检大鼠,并计算肝指数,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,检测肝组织白介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平,HE染色观察肝组织病理学改变。结果显示,蝙蝠草醇提物各剂量组均可降低肝指数(P<0.05),降低血清AST、ALT和肝组织IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平(P<0.05),升高肝组织SOD、GSH水平(P<0.05),明显改善肝组织病理学损伤。认为,蝙蝠草醇提物对CCl_(4)所致急性肝损伤具有良好的保护作用,可减轻肝损伤,其机制可能与增强肝功能,促进组织修复,降低促炎因子水平和增强机体抗氧化损伤能力有关。

4-羟基苯并恶唑-2-酮对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究4-羟基苯并恶唑-2-酮(4-hydroxy-2-benzoxazolone,HBOA)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:84只KM小鼠分组,造模,给药,采样,检测。结果:和模型组比较,中、高剂量HBOA能降低小鼠血清AST、ALT水平和肝组织MDA含量,升高肝组织SOD和GSH含量(P<0.05,P<0.01),同时能减轻肝细胞损伤程度(P<0.01)。结论:HBOA对CCl4诱导的小鼠急性肝损伤有一定的保护作用,其作用机制可能与清除自由基,抑制脂质过氧化有关。

四氯化碳诱导性肝纤维化大鼠肝组织白细胞介素4表达的研究

目的通过观察四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化过程中的白细胞介素4(IL-4)在肝组织中的表达情况,探讨肝纤维化机制。方法建立(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化动物模型。19只Wistar大鼠分为对照组4只和肝纤维化组15只(肝纤维化组按照CCl4的作用时间又分为2、4、6、8周组)。对各组大鼠肝组织进行苏木精-伊红染色和SP法免疫组织化学染色,观察肝组织病理变化及IL-4的表达情况。结果免疫组织化学染色显示,IL-4在正常肝脏组织几乎没有表达,肝纤维化组注射CCl4诱导后,大鼠肝组织中IL-4的表达强度较对照组明显增强,主要分布在肝组织纤维化增生的汇管区。IL-4表达随CCl4作用时间延长而增强,4、6周后变化尤其明显。结论IL-4可能在肝纤维化过程中发挥着重要作用。

大豆皂苷对四氯化碳致肝损伤小鼠肝脏氧化应激的干预作用

研究大豆皂苷对四氯化碳(CCl4)所致急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激的干预作用。将实验小鼠按体重随机分为5组,即正常对照组、模型对照组、水飞蓟素组(阳性对照组)及大豆皂苷高、低剂量组。每日给药1次,连续7 d。实验末期,除正常对照组外,其余组小鼠腹腔注射CCl4建立急性肝损伤模型,比色法检测血清白蛋白(Alb)含量、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性以及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量。结果显示,大豆皂苷明显增高CCl4致急性肝损伤小鼠血清Alb水平,降低血清ALT、AST和ALP活性;升高肝组织总SOD、CAT和GPx活性,提高肝GSH水平,降低肝MDA水平;升高肝线粒体Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase和Mn-SOD活性,降低肝线粒体MDA含量。这说明大豆皂苷可降低CCl4致急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激,对肝损伤具有保护作用。

肝勃宁对四氯化碳致大鼠慢性肝损害的保护作用

四氯化碳（ＣＣｌ４）致大鼠慢性肝损害，用肝勃宁（ＧＢＮ）２．３１，０．７７，０．２６ｇ／ｋｇ分别给大鼠每天１次ｉｇ，连续４５天。经病理学检查显示能减轻肝纤维化程度，肝脂肪变、嗜酸性坏死发生率明显减少；血清总蛋白量增高，ＳＧＰＴ、ＳＧＯＴ、唾液酸浓度、羟脯氨酸含量下降。结果表明ＧＢＮ对ＣＣｌ４致大鼠慢性肝损害有一定保护作用。

桑黄对四氯化碳致大鼠肝损伤的保护作用

目的 :研究桑黄对肝损伤的保护作用。方法 :以四氯化碳诱导大鼠肝损伤 ,观察桑黄对血清学和组织学指标的影响。结果 :桑黄治疗组大鼠肝细胞变性明显减轻 ,肝组织结构完好 ;血清氨基酸转移酶水平显著降低 ,蛋白合成能力增强 ;血清活性氧显著减少 ,肝组织超氧化物歧化酶活力提高 ;血清白细胞介素 -4水平降低 ,γ -干扰素显著增高。结论 :桑黄具有保护肝细胞功能 ,抗脂质过氧化和调节炎症因子水平为其作用机理。

波棱瓜子提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究波棱瓜子乙酸乙酯提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:建立四氯化碳(CC l4)诱导小鼠肝损伤模型,以测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和肝组织丙二醛(MDA)含量为指标来观察波棱瓜子乙酸乙酯提取物对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤的保护作用。结果:波棱瓜子乙酸乙酯提取物高中低剂量组均能不同程度的降低动物模型的血清ALT、AST和肝脏MDA的含量。结论:波棱瓜子乙酸乙酯提取物对化学性肝损伤具有明显的保护作用。

腹腔注射低浓度四氯化碳建立小鼠肝纤维化模型

在中国患肝炎病后,肝纤维化、硬化、肝癌高发.建立肝纤维化动物模型,有利于进行病理过程的研究.四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）导致肝微粒体脂质过氧化,肝脂肪变性、进而纤维化.常规采用高浓度CCl4建模型,对动物选择性强,同时因给药剂量高,动物死亡率高.本实验采用低浓度CCl4、反复腹腔注射,希望建立一套简便可行的小鼠肝纤维化建模方法.

红毛五加多糖对四氯化碳肝损伤大鼠的保护作用

目的:研究红毛五加多糖(AGP)对四氯化碳(CCl4)肝损伤的保护作用。方法:大鼠CCl4肝损伤模型进行实验。结果:AGP能明显抑制CCl4肝损伤大鼠血清AST、ALP、BILIT和肝TG水平的升高及血清TP、TG、TC、Alb和Glu水平的下降;同时使血清升高的NO含量降低。结论:AGP对CCl4肝损伤大鼠有明显保护作用,其机制可能与降低过高的NO含量有关。

含羞草总黄酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究含羞草总黄酮(TFM)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法用四氯化碳建立小鼠肝损伤模型,相应药物灌胃后测定小鼠血清ALT、AST的活性,血清白蛋白(Alb)含量以及总抗氧化能力(T-AOC);并测定肝匀浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,同时观察肝脏组织病理学变化。结果与模型对照组相比,含羞草总黄酮(TFM)各剂量组ALT、AST和MDA含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),Alb含量和T-AOC活性均明显增加(P<0.05或P<0.01),SOD活力明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论含羞草总黄酮(TFM)能明显改善肝组织病理损伤程度,对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用。