地高辛标记质粒探针监测大肠埃希氏菌对四环素抗药性的研究

用Ｂａｍ Ｈ Ⅰ和Ｎｒｕ Ⅰ双酶切质粒ｐＢＲ３２２ 的四环素抗药基因，经ＤＮＡ 纯化回收试剂盒和低融点琼脂糖挖块法回收纯化６００ ｂｐ 的目的基因片段；以随机引物法用地高辛进行标记，制备成探针；用斑点杂交法通过敏感性和特异性试验，证实这种探针用于检测四环素抗药基因是可行的。采用菌落原位杂交法检测了临床分离的７２ 株猪源大肠埃希氏菌四环素抗药菌株，与药敏试验的阳性符合率达９１ ．７ ％ 。

应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体

目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。

南京地区1999-2004年四环素高度耐药淋球菌tetM基因分型及流行研究

目的 了解南京地区四环素高度耐药淋球菌（TRNG）tetM基因的分子流行病学情况。方法 采用琼脂稀释法检测菌株是否为TRNG，采用纸片酸度定量法测定菌株是否产β-内酰胺酶。采用单管PCR方法对TRNG阳性菌株作terM基因分型。结果 1999-2004年间南京地区804株淋球菌中共检出136株（16．92％）TRNG，β-内酰胺酶阳性的淋球菌（PPNG）为290株，所有TRNG中69．85％（95／136）为PPNG／TRNG，TRNG的阳性率逐年增高。tetM基因分型结果显示，荷兰变型为135株，美国变型仅1株。结论 南京地区流行的TRNG以荷兰型tetM基因为主（99．26％），美国型仅为偶发。