污泥深度脱水对四环素耐药菌和耐药基因的去除特性

研究了四环素耐药菌和四环素抗性基因在污泥深度脱水中的去除特性,分别采用稀释平板涂布法和荧光定量PCR对污泥深度脱水前后四环素耐药菌和4种四环素抗性基因(tetA、tetB、tetM和tetX)进行了测定,分析了污泥脱水前后这些污染物的去除特性.结果表明:污泥深度脱水前后四环素耐药菌和四环素耐药基因均被检出,经污泥深度处理工艺处理后,四环素耐药菌和所测定的四环素耐药基因均得到一定去除,tetA、tetB和tetM的去除率均达到80%以上.论文结果可为耐药菌和耐药基因的污染控制提供参考.

华南地区副猪嗜血杆菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

【目的】副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,了解副猪嗜血杆菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。【方法】参考CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测副猪嗜血杆菌华南分离株对21种抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测9种四环素耐药基因的携带情况,并利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型技术对携带四环素耐药基因的菌株进行了遗传相关性分析。【结果】结果显示:被检菌株对磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对磺胺类药物的耐药率高于80%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受3种或3种以上的抗菌药物,其中以7重和8重耐药菌株的数量最多,分别占19.13%和17.39%。2008-2010年华南地区副猪嗜血杆菌的耐药性总体上呈现逐年上升的趋势。15.62%(18/115)的菌株携带tetB基因,这些菌株之间表现明显的遗传差异性,但是部分菌株存在克隆传播关系。【结论】副猪嗜血杆菌对抗菌药物的耐药性比较高,tetB基因在耐四环素的副猪嗜血杆菌中广泛存在,表明主动外排泵作用可能是副猪嗜血杆菌对四环素产生耐药性的主要机制。本研究有助于了解副猪嗜血杆菌耐药性的变化特点,并初步揭示了该菌对四环素的耐药机理。

市售散装白斩鸡表面四环素耐药菌污染初探

为探究市售散装白斩鸡表面四环素耐药菌的污染特征,评价耐药基因的迁移潜势,本试验从上海市4个区的25个熟食店中采集25份散装即食白斩鸡样品,采用梯度稀释法和脑心浸液肉汤培养基对四环素耐药菌(TET^(r))进行计数,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析6种四环素耐药基因(tet A、tet B、tet C、tet D、tet J、tet M)和一类整合酶基因intⅠ的相对拷贝数,并对13株TET^(r)菌株进行种属鉴定和多重耐药性分析,最后通过自然转化探究其耐药性的水平迁移可能性。结果表明,所有样品均分离到TET^(r)菌,菌落数为(7.07×10^(1)~1.67×10^(8))CFU·g^(-1),占总可培养细菌总数的1.01%~100%;13个样品中6种tet基因和intⅠ基因的相对拷贝数为10^(-4)~10^(-2);分离到的TET^(r)菌主要有芽孢杆菌(Bacillus)、莫拉氏菌(Moraxella)、气单胞菌(Aeromonas)等,所有菌株均至少对2种抗生素耐药,其中2株莫拉氏菌和1株不动杆菌(Acinetobacter)可将四环素耐药表型迁移至大肠杆菌J53中,接合频率为10^(-6)或10^(-2)。综上,市售散装白斩鸡表面存在四环素耐药菌污染,且耐药基因具有水平迁移至异种细菌的风险。本研究为市售散装白斩鸡产品中的抗生素耐药菌监测及风险评估提供了方法参考和数据支撑。

致病性猪沙门菌四环素耐药基因tetB的PCR检测

目的检测临床分离猪源致病性沙门菌四环素的耐药基因,确定沙门菌四环素耐药基因类型。方法用KB法测定分离株对四环素等21种抗生素的耐药情况,用PCR方法检测四环素耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG及tetK,并对扩增产物进行测序。结果临床分离株全部对四环素耐药,33株沙门菌中有29株扩增出tetB特异性片段,基因序列与参考菌的同源性为99%,tetB检测与药敏试验阳性符合率为87.9%。结论tetB的PCR检测对四环素耐药性具有较高的特异性,tetB基因是决定本试验中临床分离株四环素耐药的主要基因,为四环素耐药性的分子流行病学监测提供了依据。

猪源致病性沙门氏菌四环素耐药基因tetC的PCR扩增及序列分析

本研究对 16株猪致病性沙门氏菌的四环素耐药性进行了检测 ,结果表明 ,沙门氏菌对四环素类抗生素产生了广泛的耐药性 ,耐药率达 10 0 %。对四环素耐药基因 tet C进行 PCR扩增 ,结果在 12株沙门氏菌的质粒上扩增出特异性产物 ,与药敏试验结果阳性符合率 75 % ,具有较高的检出率 ;序列分析结果表明 tet C的核苷酸同源率较高 ,达 97.7%～ 98.7% ,建立 tet C基因的 PCR检测技术 ,为沙门氏菌对四环素耐药性的分子流行病学监测提供了有效的途径。

乳牛乳腺炎病原菌的质粒提取及其四环素耐药基因的扩增

采用碱裂解法、改良碱裂解法、大质粒简易提取法、试剂盒法和SDS法共5种方法对分离于绵阳市奶牛场的乳腺炎病原菌共50株进行了质粒DNA的提取,并用琼脂糖凝胶电泳对提取质粒进行了电泳分析。结果表明,5种质粒提取方法中SDS法的提取率较高(88%),电泳检测时质粒条带清晰,绝大部分菌株含有大小约20 kb的一种质粒;其他4种方法的提取率都较低,且以弥散性质粒条带为主。以提取的质粒DNA为模板,对其四环素耐药基因tetM、tetK和tetC进行了PCR扩增。结果表明,仅4株扩增出了tetM基因的特异性产物,未能扩增出tetK基因和tetC基因。

广东地区猪链球菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,本研究旨在了解猪链球菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。本试验采用K-B法和CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测猪链球菌广东分离株对18种抗菌药物的耐药性。结果显示,被检菌株对四环素类、磺胺类和氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对四环素类药物的耐药率高达98.2%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受6种或6种以上的抗菌药物,其中以6和14重耐药菌株的数量最多,分别占20%和17%。本试验设计了4对引物检测四环素耐药基因携带情况,结果发现56株菌中以携带tetM基因为最多(85.71%)。结果表明tetM很可能是介导广东SS分离株对四环素产生极高耐药率的主要原因之一。

鸡源大肠杆菌四环素耐药基因检测

用肉汤稀释法测定32株鸡源大肠杆菌对四环素等8种抗菌药物的敏感性,用PCR方法检测5种四环素耐药基因(tet基因),并用ERIC-PCR方法分析试验菌株间的克隆关系。结果显示:32株大肠杆菌对四环素、多西环素的耐药率分别为84%、75%,tetA和tetB阳性率分别为78%和25%。总tet基因阳性率为90.6%,与对四环素、多西环素的耐药率基本一致。携带1种或2种tet基因的临床分离菌,不仅对四环素类药物耐药,还对头孢噻肟、环丙沙星、新霉素和氟苯尼考耐药,呈现多重耐药的特点。试验菌共分为A^O 15个ERIC型,tetA和tetB几乎均匀分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。

四环素耐药基因在鸡源沙门氏菌中的分布和传播

试验分析了84株鸡源沙门氏菌分离株的四环素耐药性,用PCR方法检测四环素耐药基因在分离株中的分布情况。结果显示,四环素耐药率为49%(41/84),鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌仅携带tet(A)基因(23/23),肠炎沙门氏菌和德尔卑沙门氏菌携带tet(A)(8/18)、tet(B)(17/18)或tet(G)(10/18)三种基因,tetC基因在这些沙门氏菌中都没有检测到。该类基因多数位于结合性质粒上,但是不在整合子范围内。

副猪嗜血杆菌江西分离株药物敏感性及四环素耐药基因tet(B)分析

为了解副猪嗜血杆菌江西株的药物敏感性及其耐药基因,本实验采用K-B法测定分离株对57种药物的敏感性,结果显示20株副猪嗜血杆菌均对阿洛西林和万古霉素敏感,80%及以上的分离株对氨苄西林\舒巴坦、阿莫西林\棒酸等高度敏感。但分离株对恩诺沙星、氨曲南、四环素等的耐受性较强,某些菌株对多种药物具有抗性,其中6株菌能够耐受5种药物,5株菌能够耐受12种药物,3株菌能够耐受13种药物,甚至有2株菌能够耐受多达22种药物。将江西分离株的药物敏感性结果与其它国家或地区以及不同时间分离菌株的结果相比较表明,不同地区及不同时间段分离的菌株药物敏感性存在较大差异。为探索副猪嗜血杆菌耐药的分子机制,本研究设计引物并建立了检测四环素耐药基因tet(B)的PCR方法。运用所建立的方法检测江西株tet(B)基因,在15株四环素耐药菌株中检测出其中9株菌存在该基因,推测tet(B)可能是介导该菌对四环素耐药的主要分子机制之一。

多重PCR技术检测沙门菌两种四环素耐药基因

应用两对特异性引物同时检测四环素耐药基因tetB和tetC。通过对35株沙门菌分离株的四环素耐药性检测,表明所有沙门菌分离株均含tetC基因,与药敏试验结果阳性符合率65.7%,8株同时含有tetB基因,与药敏试验结果阳性符合率100%,tetB基因和tetC基因双阳性的菌株与药敏试验结果阳性符合率也为100%。取其中部分菌株扩增出tetB和tetC基因片段进行序列分析,5株菌的tetB基因扩增产物序列完全相同,与质粒pRT11相应序列同源性达99.7%;14株菌的tetC基因扩增产物与质粒pBR322中的相应序列同源性为100%。证实沙门菌耐药基因普遍存在,且同时含有tetB和tetC基因的菌株表现耐药。多重PCR技术同时检测两种四环素耐药基因,适合大量样本的检测,对开展沙门菌四环素多种耐药基因的分子流行病学监测提供了有效途径。

携带四环素耐药基因的鸭源大肠杆菌质粒不相容群分析

目的:用PCR方法测定22株携带四环素耐药基因鸭大肠杆菌所含质粒的不相容群。方法:设计18对引物,分为5个多重PCR体系和3个单一PCR体系,用来检测识别FIA、FIB、FIC、HI1、HI2、I1、L/M、N、P、W、T、A/C、K、B/O、X、Y、F和FⅡ复制子。结果:22株鸭大肠杆菌中,分别有7、4、9、2、6、2、3、7株和19株属于IncI1、IncN、IncFIB、IncY、IncP、IncFIC、IncA/C、In-cK和IncFⅡ。试验菌株所含质粒大部分属于IncFⅡ,占86.4%,属于1、2、3、4、5个不相容群组合的分别为13.6%、31.8%、31.8%、18.2%和4.5%。

红霉素与四环素耐药基因在猪链球菌临床分离株中的检测

为了解临床分离的48株猪链球菌对大环内酯类药物及四环素耐药基因的分布,用微量稀释法测定48株临床分离的猪链球菌对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类9种抗生素的药物敏感性,建立PCR方法对耐药菌株大环内酯类耐药基因ermA/B/C、mefA/E、msrD、mphB、23S rRNA,L4,L22和四环素耐药基因tetM、tetO、tetL、tetK及与Tn916转座子相关的int和xis基因进行检测。结果表明,31株2型猪链球菌中大环内酯类药物耐药率为3.23%,17株9型猪链球菌红霉素耐药率为88.24%,泰乐菌素、磷酸替米考星、阿奇霉素的耐药率均为70.59%。48株猪链球菌对四环素均耐药,但对青霉素、阿莫西林、头孢曲松钠、氨苄西林均敏感。大环内酯类耐药基因主要以ermB为主,占75%(12/16),mefA/E、msrD占25%(4/16),16株红霉素耐药菌株中,tetM、tetO、int、xis的检出率分别为25%(4/16)、62.5%(10/16)、31.25%(5/16)和31.25%(5/16),没有检测到ermA、ermC、mphB、tetL、tetK。所有红霉素耐药菌株均未检测到23S rRNA、L4和L22突变。

香港海鸥型菌四环素耐药性及其耐药分子机制研究

目的:了解香港海鸥型菌分离株对四环素的耐药性及四环素耐药基因的分布情况。方法:采集草鱼和青蛙的肠道标本,用选择性培养基分离、生化鉴定和16SrRNA基因鉴定的方法分离出香港海鸥型菌。用纸片扩散法对香港海鸥型菌分离株进行四环素类抗生素的耐药性测定,用PCR方法检测四环素耐药株中5种四环素耐药基因的携带情况,并将检测阳性的PCR产物进行序列测定。结果:从614份肠道标本中共分离出157株香港海鸥型菌,其中鱼分离株82株,蛙分离株75株,鱼和蛙的分离率分别为18.51%和43.86%。5株四环素耐药株均来自蛙分离株,其中有2株检测出四环素耐药基因tetA及其阻遏基因tetR,其他四环素耐药基因则未检出。tetA基因的氨基酸序列与已报道的香港海鸥型菌的TetA蛋白同源性为100%。结论:不同宿主的香港海鸥型菌对四环素的耐药性存在显著差异。该菌携带的四环素耐药基因以tetA为主,某些耐药菌株的耐药机制仍然未知。

活性污泥SBR系统对四环素耐药菌和总四环素的去除特性

通过模拟运行SBR工艺,比较不同四环素进水浓度、运行周期以及氧环境条件对四环素耐药菌及痕量四环素的去除特性.结果表明,痕量四环素的存在会对活性污泥中微生物耐药性产生影响,SBR进水四环素浓度为250μg.L-1时活性污泥中的微生物会逐步变成耐药微生物,而进水中不含四环素时,耐药的微生物会逐步变成非耐药微生物.总四环素的去除效果在好氧条件下周期为12 h时最好,达到90%以上.好氧条件下周期为8 h时每克污泥增加的四环素耐药菌数最多,约为2.89×109CFU.g-1;好氧条件下周期为20 h时为最少,约为1.0×108CFU.g-1,有利于缓解四环素耐药菌的产生.

家养及大型养殖场鸡肠道微生物菌群及四环素耐药菌多样性的比较研究(英文)

本研究分析比较了农家家养鸡与大型养殖场鸡肠道菌群组成及抗四环素抗性基因在肠道菌群中的分布情况。通过454焦磷酸法对细菌16SrRNA V3区进行测序来分析肠道菌群的组成;用平板琼脂法筛选四环素耐药菌株,对其16SrRNA基因全长测序,并与RDP(Ribosomal Database Project)数据库比对进行菌种鉴定;聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测常见四环素耐药基因。家养鸡粪便中菌群香农多样性指数为5.321±0.590,养殖场鸡为4.398±0.440,前者显著大于后者(Mann-Whitney U test,P=0.008)。从家养鸡和养殖场鸡粪便中随机分离到69株和65株四环素耐药菌株,后者四环素耐药菌的种类多于前者。家养鸡较养殖场鸡的肠道菌群更具多样性,而抗生素抗性基因在养殖场鸡的肠道菌群中分布更广泛。结果表明,不同饲养方式对鸡的肠道菌群有影响,对抗生素抗性基因的分布也有一定影响。

四环素耐药基因的生化和遗传机制研究进展

细菌对四环素类抗生素的耐药主要是获得了有关编码相关蛋白的四环素耐药基因,通过外输泵出机制、核糖体保护机制及产生灭活四环素的钝化酶机制等介导。四环素耐药基因常与质粒、转座子、接合转座子等可移动性遗传成分相连,在细菌的种间或属间转移,导致其在菌群中广泛分布。四环素可在转录或翻译水平对耐药基因的表达进行调节,使菌株对四环素类药物表现出不同程度的耐药。

禽源致病性沙门氏菌四环素耐药性基因tetC的PCR扩增及序列分析

通过对临床分离并经生化实验和血清学试验鉴定的20株禽源沙门氏菌和1株标准株C79-13进行药敏试验,结果证明:有19株有高耐药性,另外2株有低耐药性,耐药率达100%;对其四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验符合率为100%;利用PCR检测四环素耐药基因tetC具有很高的敏感性和特异性,从而为禽类致病性沙门氏菌的耐药性检测提供了高效敏感的手段.

PCR法解脲脲原体分群和四环素耐药检测

目的 建立解脲脲原体 (Ureaplasmaurealyticum ,Uu)的分群和四环素耐药PCR检测方法。方法 1 根据Uu的多带抗原 (multi-bandedantigen ,MBA)基因序列自行设计引物 (P15′ -ATT ,TGC ,AAT ,CTT ,TAT ,ATG ,TT ;P2 5′ -TTC ,AGC ,TGA ,TGT ,AAG ,TGC ,AGC ,ATT ,AAA ,T) ,并建立分群PCR反应体系。 2 根据TetM基因序列自行设计引物 (P15′-TTA ,TCA ,ACG ,GTT ,TAT ,CAG ,G ;P2 5′ -GCT ,ATA ,TAT ,GCA ,AGA ,CG) ,并建立四环素耐药反应体系。结果 1 MBA基因PCR能将Uu14个血清型正确分为二个生物群 ,其中生物一群 (1、3、6、14等 4个血清型 )出现 4 0 4bp的产物带 ,生物二群 (2、4、5、7、8、9、10、11、12、13等 10个血清型 )出现 4 4 8bp的产物带。 6 0株Uu临床分离株经MBA基因PCR检测 ,生物一群 5 3例、生物二群 6例、生物一 /二群同时存在 1例。 2 Uu典型株 14个血清型TetM基因PCR扩增的不能出现任何条带 ;6 0株Uu临床分离株经TetM基因PCR检测 4 1例出现目的条带。结论 PCR法进行Uu生物分群和四环素耐药检测简单、快速 ,为相关研究提供了手段。

生猪肉加工厂食品接触面四环素耐药菌及其耐药基因的分布

耐药菌的传播会对食品安全与人类健康造成严重威胁。本研究通过对某大型生猪肉加工厂食品接触面污染微生物四环素耐药情况进行分析,探讨其对生猪肉制品质量与安全的潜在危害。从生猪加工厂食品接触面共采集样品100份,共分离到168株细菌。通过药敏试验,发现60.7%的污染细菌对四环素具有耐药性,包括85.7%的假单胞菌属、85.7%的葡萄球菌属、86.7%的沙雷氏菌属、80%的乳球菌属、80%的大肠杆菌、60.0%的不动杆菌属和55.0%的气单胞菌属。通过对分离株进行15种四环素耐药基因的筛查,发现生猪肉加工厂设备食品接触面存在9种四环素耐药基因,包括tet L、tet A、tet B、tet C、tet E、tet M、tet S、tet K和tet X,其检出率分别为7.7%、6.0%、4.8%、4.8%、3.6%、3.6%、3.6%、1.2%和0.6%。本研究结果表明,生猪肉加工厂食品接触面四环素耐药菌污染严重,可能交叉污染生猪肉制品,其携带的四环素耐药基因可能向不同细菌种属间转移,进而由食物链向人类传播,对人类健康造成潜在的威胁。