副猪嗜血杆菌江西分离株药物敏感性及四环素耐药基因tet(B)分析

为了解副猪嗜血杆菌江西株的药物敏感性及其耐药基因,本实验采用K-B法测定分离株对57种药物的敏感性,结果显示20株副猪嗜血杆菌均对阿洛西林和万古霉素敏感,80%及以上的分离株对氨苄西林\舒巴坦、阿莫西林\棒酸等高度敏感。但分离株对恩诺沙星、氨曲南、四环素等的耐受性较强,某些菌株对多种药物具有抗性,其中6株菌能够耐受5种药物,5株菌能够耐受12种药物,3株菌能够耐受13种药物,甚至有2株菌能够耐受多达22种药物。将江西分离株的药物敏感性结果与其它国家或地区以及不同时间分离菌株的结果相比较表明,不同地区及不同时间段分离的菌株药物敏感性存在较大差异。为探索副猪嗜血杆菌耐药的分子机制,本研究设计引物并建立了检测四环素耐药基因tet(B)的PCR方法。运用所建立的方法检测江西株tet(B)基因,在15株四环素耐药菌株中检测出其中9株菌存在该基因,推测tet(B)可能是介导该菌对四环素耐药的主要分子机制之一。

致病性猪沙门菌四环素耐药基因tetB的PCR检测

目的检测临床分离猪源致病性沙门菌四环素的耐药基因,确定沙门菌四环素耐药基因类型。方法用KB法测定分离株对四环素等21种抗生素的耐药情况,用PCR方法检测四环素耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG及tetK,并对扩增产物进行测序。结果临床分离株全部对四环素耐药,33株沙门菌中有29株扩增出tetB特异性片段,基因序列与参考菌的同源性为99%,tetB检测与药敏试验阳性符合率为87.9%。结论tetB的PCR检测对四环素耐药性具有较高的特异性,tetB基因是决定本试验中临床分离株四环素耐药的主要基因,为四环素耐药性的分子流行病学监测提供了依据。

猪源致病性沙门氏菌四环素耐药基因tetC的PCR扩增及序列分析

本研究对 16株猪致病性沙门氏菌的四环素耐药性进行了检测 ,结果表明 ,沙门氏菌对四环素类抗生素产生了广泛的耐药性 ,耐药率达 10 0 %。对四环素耐药基因 tet C进行 PCR扩增 ,结果在 12株沙门氏菌的质粒上扩增出特异性产物 ,与药敏试验结果阳性符合率 75 % ,具有较高的检出率 ;序列分析结果表明 tet C的核苷酸同源率较高 ,达 97.7%～ 98.7% ,建立 tet C基因的 PCR检测技术 ,为沙门氏菌对四环素耐药性的分子流行病学监测提供了有效的途径。

B族链球菌的耐药性及红霉素与四环素耐药基因检测

目的:了解多种红霉素、四环素耐药基因在B族链球菌(GBS)中出现规律及其与耐药的关系。方法:药物敏感试验用VITEK2全自动分析仪检测203株GBS的最低抑菌浓度,用D试验法方法检测克林霉素诱导型(MLSB)耐药表型,红霉素及四环素耐药基因用聚合酶链反应方法检测。结果:未发现对青霉素、氨苄青霉素、万古霉素、利奈唑胺、奎诺普汀/达福普汀耐药菌株,但青霉素、氨苄青霉素的中介率分别是9.3%、4.9%;红霉素、克林霉素、四环素耐药率分别为45.3%、45.0%、87.1%、红霉素耐药基因以ermB为主,两种或两种以上erm基因阳性的GBS占12.3%,四环素耐药基因以tetM和tetO为主。结论:青霉素、氨苄青霉素仍可作为治疗GBS感染的首选药物;GBS菌株对红霉素和克林霉素的耐药性具有较高的一致性,红霉素和克林霉素作为预防和治疗GBS感染的药物应用应给予重新评价。ermB是GBS对红霉素耐药的重要基因,在GBS中检出国内少报道的ermC及ermTR基因;应关注非孕妇女,老年人及糖尿病患者感染的监测和防治。

解脲脲原体对四环素类药物的耐药性及tet M耐药基因研究

目的探讨目前解脲脲原体对四环素类药物的耐药性及其与tetM耐药基因的关系。方法对分离自临床妇产科和性病门诊患者的解脲脲原体株,经鉴定确认后,采用微量肉汤稀释法检测其四环素和米诺环素的最小抑菌浓度(MIC),根据药敏结果分层随机抽取部分菌株,采用PCR技术扩增四环素耐药基因tetM。结果解脲脲原体的米诺环素和四环素MIC50(50%菌株被抑制所需抗生素浓度)分别为<0.062 5 mg/L和<0.125 mg/L;MIC90(90%菌株被抑制所需抗生素浓度)分别为0.125 mg/L和1 mg/L;在34株非四环素耐药的解脲脲原体菌株中,有7株检测到tetM基因。tetM基因阳性组的四环素和米诺环素的MIC水平比tetM阴性组高,且差异有统计学意义(四环素:t=4.34,P=0.000 1;米诺环素:t=5.90,P<0.000 1)。结论在江苏部分地区四环素类药物可以重新作为治疗解脲脲原体感染的一线药物,尤其是米诺环素的抗菌效果较好;在非四环素耐药的解脲脲原体菌株中也存在tetM基因的携带,且影响其MIC的提高。

PCR和核酸探针检测猪源沙门氏菌四环素耐药基因tetC的研究

对沙门氏菌的四环素耐药性进行了检测,结果表明,沙门氏菌对四环素类抗生素产生了广泛的耐药性,耐药率达100%,对其四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验结果阳性符合率75%,具有较高的检出率。用光生物素对PCR产物进行标记,制备核酸探针,采用菌落原位杂交的方法对沙门氏菌进行检测,结果表明13株阳性、3株阴性,杂交结果与PCR结果阳性符合率为93.75%,具有较高的特异性。通过条件的优化,建立的四环素耐药基因tetC的PCR和核酸探针检测技术,为四环素耐药性的分子流行病学监测提供了有效的途径。

四环素外排泵耐药基因tet40和tet42的研究进展

四环素类药物是发现于上个世纪40年代的一类广谱抗生素,从50年代开始应用于医学临床[1]。由于其具有抗菌谱广和毒性低等特点,因而在兽医临床上得到广泛应用,成为用于防治细菌性感染的常见药物。随着药物使用年限的增加,

禽源致病性沙门氏菌四环素耐药性基因tetC的PCR扩增及序列分析

通过对临床分离并经生化实验和血清学试验鉴定的20株禽源沙门氏菌和1株标准株C79-13进行药敏试验,结果证明:有19株有高耐药性,另外2株有低耐药性,耐药率达100%;对其四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验符合率为100%;利用PCR检测四环素耐药基因tetC具有很高的敏感性和特异性,从而为禽类致病性沙门氏菌的耐药性检测提供了高效敏感的手段.

禽源致病性沙门氏菌四环素耐药性基因tetC的PCR扩增及序列分析

通过对临床分离并经生化试验和血清学试验鉴定的20株禽源沙门氏菌和1株标准株C79-13进行药敏试验,结果证明:有19株有高耐药性,另外2株有低耐药性,耐药率达100%;对其四环素耐药基因tetC进行了PCR扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验符合率为100%;利用PCR检测四环素耐药基因tetC具有很高的敏感性和特异性,从而为禽类致病性沙门氏菌的耐药性检测提供了高效敏感的手段.

阴道加德纳菌四环素耐药基因tetM的体外扩增及其产物的序列测定

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对５株耐四环素阴道加德纳菌（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌａｖａｇｉｎａｌｉｓ）（ＭＩＣ＞１６ｍｇ／Ｌ）的耐药基因ｔｅｔＭ进行体外扩增。核苷酸序列测定证实，１株耐四环素阴道加德纳菌的ｔｅｔＭ核苷酸序列与另４株ｔｅｔＭ的序列不同，两者的同源性为９８．４％，同时又和Ｔｎ１５４５、Ｔｎ９１６部分同源。说明在阴道加德纳菌中ｔｅｔＭ基因存在多态性，其获得方式、来源途径均不相同。

阴道加德纳菌四环素耐药基因tetM的体外扩增及其产物的序列测定

利用聚合酶链式反应(PCR)对5株耐四环素阴道加德纳菌(MIC>16mg/L)的耐药基因tetM 进行体外扩增。核苷酸序列测定证实,一株耐四环素阴道加德纳菌的 tetM 核苷酸序列与另四株tetM 的序列不同。两者的同源性为98.4%,同时又和 Tn1545、Tn916部分同源。说明在阴道加德纳菌中 tetM 基因存在多态性。其获得方式、来源途径均不相同。

免疫磁珠-环介导等温扩增快速检测巴氏杀菌乳中蜡样芽孢杆菌的四环素耐药基因tetL

建立了免疫磁珠分离(IMS)结合环介导等温扩增(LAMP)检测巴氏杀菌乳中蜡样芽孢杆菌的四环素耐药基因tetL的方法。结果表明:经优化后,每微克链霉亲和素纳米磁珠与375 ng生物素标记的芽孢杆菌抗体偶联,在含有1×103 CFU/mL耐四环素蜡样芽孢杆菌的巴氏杀菌乳中,25μL免疫磁珠孵育1 h后,对蜡样芽孢杆菌BA117的捕获率为68.1%。该IMS-LAMP方法特异性高,2 h内对巴氏杀菌乳中耐四环素蜡样芽孢杆菌的检测灵敏度为24 CFU/mL。IMS-LAMP方法具有用时短,灵敏度高,操作简单等优点,可以有效检测巴氏杀菌乳中蜡样芽孢杆菌的四环素耐药基因。

新四环素耐药基因tet(63)的发现与鉴定

四环素类抗生素因其广谱的抗菌活性、低生产成本以及无严重的不良反应被广泛应用于人医临床和畜牧养殖业。然而,随着四环素类抗生素的大量、不合理使用导致细菌四环素耐药性愈发严重,给人类和动物健康造成了巨大威胁。四环素耐药基因的获得是细菌产生四环素类抗生素耐药性的最主要原因。同时,在持续的抗生素选择压力下,四环素耐药基因不断的产生和进化。

斑点叉尾源维氏气单胞菌对四环素类抗生素的耐药性及耐药基因的检测

维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）为气单胞菌属（Aeromonas）的一种,亦被称为维罗纳气单胞菌、凡隆气单胞菌和维隆气单胞菌,存在于水体和淤泥等环境中[1],能够感染斑点叉尾（Ictalurus punctatus）[2,3]、锦鲤（Cyprinus carpio L.）[4]、西伯利亚鲟（Acipenser baerii）[5]、鲱形白鲑（Coregonus clupeaformis）[6]、华鲮（Sinilabeo rendahl）[7]、框镜鲤（Cyprinus carpio）[8]等多种鱼类。其中,斑点叉尾感染维氏气单胞菌近几年才被发现,其发病率可达30%以上,病鱼死亡率在50%以上,给养殖户造成了巨大的经济损失,也严重制约了斑点叉尾养殖业的健康发展[2,9]。

华南地区副猪嗜血杆菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

【目的】副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,了解副猪嗜血杆菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。【方法】参考CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测副猪嗜血杆菌华南分离株对21种抗菌药物的耐药性,用PCR方法检测9种四环素耐药基因的携带情况,并利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型技术对携带四环素耐药基因的菌株进行了遗传相关性分析。【结果】结果显示:被检菌株对磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对磺胺类药物的耐药率高于80%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受3种或3种以上的抗菌药物,其中以7重和8重耐药菌株的数量最多,分别占19.13%和17.39%。2008-2010年华南地区副猪嗜血杆菌的耐药性总体上呈现逐年上升的趋势。15.62%(18/115)的菌株携带tetB基因,这些菌株之间表现明显的遗传差异性,但是部分菌株存在克隆传播关系。【结论】副猪嗜血杆菌对抗菌药物的耐药性比较高,tetB基因在耐四环素的副猪嗜血杆菌中广泛存在,表明主动外排泵作用可能是副猪嗜血杆菌对四环素产生耐药性的主要机制。本研究有助于了解副猪嗜血杆菌耐药性的变化特点,并初步揭示了该菌对四环素的耐药机理。

四环素类耐药基因在不同国家人体、动物和环境微生态中的多样性

目的了解四环素类耐药基因在不同国家人体、动物和环境微生态中的分布情况及其多样性。方法利用生物信息学方法,对2 036份不同来源的微生态样本宏基因组测序数据进行四环素耐药基因的鉴定,研究四环素耐药基因在不同来源、不同国别、不同人体部位的分布及耐药机制。结果2 036份样本中,四环素耐药基因检出率为44.70%(910份),其中人源样本检出率最高,达78.99%(880/1 114),其次是动物样本,检出率40.98%(25/61)。共检出28种四环素耐药基因,248份样本至少检出10种以上四环素耐药基因,在人源性样本中28种基因全部检出,动物源样本中检出6种基因。28种四环素类耐药基因中,包括10种编码核糖体保护蛋白基因,其中5种(tetQ、tet32、tet W、tetO、tet M)在50%以上的人源样本中检出,4种在动物源样本中检出率>16%。338份人源样本具有国别(中国、丹麦、西班牙、美国和日本)信息,耐药基因分析显示,tetO、tetQ和tet W 3种耐药基因在5个国家均有检出;来源于中国的样本均检出tet32、tet40、tetO、tetQ和tet W5种耐药基因,并匹配上24种四环素耐药基因型。在人体不同部位微生态四环素类耐药基因分布中,肠道中的耐药基因型分布最丰富,共有26种四环素耐药基因匹配到肠道样本中,其中tetQ、tet W、tetO、tet32、tet40 5种耐药基因型检出率>70%。结论在人体、动物微生态中存在着大量的、多样的四环素类耐药基因,公众健康和生态环境受到巨大威胁,需要引起高度重视。

健康鸡猪体内大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因分布

【目的】四环素作为人类和动物临床上广泛使用的广谱抗生素,其耐药性问题一直为全球所关注。健康动物体内的共生性大肠杆菌作为耐药指示菌和耐药基因的贮存库,了解其对四环素的耐药性及耐药机制对于疾病的防控具有重要意义。【方法】从健康鸡、猪体内分离大肠杆菌,用微量肉汤法检测其对四环素的耐药性,并用PCR方法对耐药菌株中8种四环素耐药基因的携带情况进行调查,运用统计学方法分析鸡、猪体内大肠杆菌分离株的耐药性和耐药基因分布情况的差异。【结果】总共分离鉴定出大肠杆菌269株,其中86.2%的菌株对四环素产生了耐药性,健康猪体内大肠杆菌分离株的耐药性明显高于健康鸡体内分离株(P<0.05)。tet(A)、tet(B)和tet(M)3种四环素耐药基因广泛存在于健康鸡、猪体内的共生大肠杆菌中,所携带比例分别为87.9%、28.4%和15.5%;所有对四环素耐药的大肠杆菌均携带tet(A)或tet(B)基因,其中25.0%和2.6%的耐药菌株分别携带有2种和3种耐药基因,tet(M)基因与tet(A)或tet(A)+tet(B)基因共存于对四环素耐药的大肠杆菌中;健康鸡、猪体内耐药性大肠杆菌在tet(A)+tet(M)基因携带率方面的差异具有统计学意义(P<0.01)。【结论】健康鸡、猪体内的大肠杆菌分离株普遍对四环素耐药,四环素耐药基因广泛分布于大肠杆菌分离株中,大肠杆菌对四环素的耐药机制以主动外排作用为主,核糖体保护基因在大肠杆菌对四环素耐药机制方面的作用尚待进一步的研究。

贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测

为考察贵州省猪源大肠杆菌对四环素类抗菌药的耐药情况和耐药基因的流行情况,本试验采用微量肉汤稀释法测定783株分离于贵州省8个地区规模化养殖场的猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法检测其携带四环素耐药基因情况。结果显示,猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的耐药率分别为97.3%、97.6%、96.6%、89.3%、48.0%和34.2%;土霉素和四环素的耐药水平最高,其MIC50分别为256和128μg/mL,而MIC90均为512μg/mL,四环素的耐药倍数高于土霉素;米诺环素和替加环素的耐药水平最低,其MIC90分别为32和4μg/mL,耐药倍数相同;耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD和tetM的检出率分别为92.60%、41.50%、58.75%、58.62%和70.10%;耐药菌株中主要以tetA基因为主,且大多数以携带复合基因的形式存在;大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素的耐药性分别与耐药基因tetB和tetM呈极显著相关(P<0.01),tetD基因分别与对米诺环素和替加环素的耐药性呈极显著相关(P<0.01)。贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况十分普遍,尤其是四环素和土霉素,金霉素和强力霉素有高度耐药的趋势;外排泵是四环素类药物主要的耐药机制;在兽医临床上越来越严重的耐药情况与耐药基因的广泛存在有很大关系。

广东地区猪链球菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,本研究旨在了解猪链球菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。本试验采用K-B法和CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测猪链球菌广东分离株对18种抗菌药物的耐药性。结果显示,被检菌株对四环素类、磺胺类和氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对四环素类药物的耐药率高达98.2%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受6种或6种以上的抗菌药物,其中以6和14重耐药菌株的数量最多,分别占20%和17%。本试验设计了4对引物检测四环素耐药基因携带情况,结果发现56株菌中以携带tetM基因为最多(85.71%)。结果表明tetM很可能是介导广东SS分离株对四环素产生极高耐药率的主要原因之一。

乳牛乳腺炎病原菌的质粒提取及其四环素耐药基因的扩增

采用碱裂解法、改良碱裂解法、大质粒简易提取法、试剂盒法和SDS法共5种方法对分离于绵阳市奶牛场的乳腺炎病原菌共50株进行了质粒DNA的提取,并用琼脂糖凝胶电泳对提取质粒进行了电泳分析。结果表明,5种质粒提取方法中SDS法的提取率较高(88%),电泳检测时质粒条带清晰,绝大部分菌株含有大小约20 kb的一种质粒;其他4种方法的提取率都较低,且以弥散性质粒条带为主。以提取的质粒DNA为模板,对其四环素耐药基因tetM、tetK和tetC进行了PCR扩增。结果表明,仅4株扩增出了tetM基因的特异性产物,未能扩增出tetK基因和tetC基因。