四甲基偶氮唑盐比色法测定人外周血NK细胞活性的改进

四甲基偶氮唑盐比色法测定人外周血ＮＫ细胞活性的改进杨建英李红育徐以珍（甘肃省地方病防治研究所，兰州７３００３０）关键词效靶比例（Ｅ／Ｔ）四甲基偶氮唑盐自然杀伤细胞自然杀伤细胞（ＮＫ）活性检测已作为临床观测肿瘤、病毒感染、免疫功能异常等常用指标之一。检...

MTT比色法检测人肿瘤细胞辐射敏感性的体外研究

目的探讨MTT比色法在人肿瘤细胞辐射敏感性检测中的价值。方法用1、2、4和8Gy的γ射线照射肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7),观察存活分数(SF)和平均致死剂量(D0)。结果γ射线剂量为2、4、8Gy时,HepG2和EC-9706的SF均显著低于MCF-7(P<0·05、<0·01);D0值HepG2(2·36Gy)<EC-9706(2·70Gy)<MCF-7(3·95Gy)。HepG2辐射敏感性最高,MCF-7最低。结论MTT法检测人肿瘤细胞辐射敏感性简便、快捷且准确性较高,对指导临床个体化放疗有重要作用。

MTT比色法的改良及其在LAK细胞活性检测中的应用

目的 :改良四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法 ,并用来检测淋巴因子激化的杀伤细胞 (LAK细胞 )活性。方法 :在MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度测定及效靶细胞不同孵育时间的比较等方面进行研究。结果 :MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度为 5 10nm ,效靶细胞最佳孵育时间为 4h。结论 :改良的MTT比色法优于常规的MTT比色法。

替莫唑胺联合分子靶向药物抗人脑胶质瘤细胞的体外试验研究

现今化疗药物种类繁多，但有效率均不理想，本实验应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）法比较替莫唑胺（TMZ）联合分子靶向药物西妥昔单抗（C225）对人脑胶质瘤细胞的抑制作用，旨在探索一种有效、新型的化疗方案。

盐酸多巴酚丁胺注射液细胞毒性研究

目的:比较不同来源盐酸多巴酚丁胺注射液体外细胞毒性的差别,为遴选优质药品、保障用药安全提供科学依据。方法:将不同来源国产盐酸多巴酚丁胺注射液原液以及稀释液,与L929细胞接触培养,通过倒置相差显微镜观察其形态,采用MTT法量化细胞毒性,计算相对增值率和IC50值,进行细胞毒性评价。并将国产盐酸多巴酚丁胺注射液与进口制剂进行比较。结果:8个厂家生产的盐酸多巴酚丁胺注射液原液及进口产品的细胞毒性分级均为4级。不同企业生产的盐酸多巴酚丁胺注射液的IC50值差异较大。盐酸多巴酚丁胺注射液C和F的IC50值较小,说明这两个企业产品的细胞毒性较其他样品大。进口盐酸多巴酚丁胺注射液的IC50值为99.9 mg·L-1,较其他样品高,说明其细胞毒性较其他样品低。进口盐酸多巴酚丁胺注射液中仅添加亚硫酸氢钠一种辅料,国产盐酸多巴酚丁胺注射液中添加的辅料主要为依地酸二钠、亚硫酸氢钠、盐酸半胱氨酸等。按各辅料在国产盐酸多巴酚丁酸注射液中的浓度测其细胞毒性,依地酸二钠、盐酸半胱氨酸和亚硫酸氢钠的细胞毒性分级均为3级。将依地酸二钠的浓度稀释为0.03 mg·ml-1时,其细胞毒性分级为1级,无细胞毒性。将盐酸半胱氨酸稀释到0.11 mg·ml-1时,其细胞毒性分级为1级,基本无细胞毒性。结论:不同厂家生产的盐酸多巴酚丁胺注射液由于生产条件不同、处方不同等原因,这些产品的细胞毒性存在较大的差别。与进口制剂比较,国产制剂中添加的辅料浓度较大,可适当降低其浓度,以减少药物制剂的细胞毒性,从而提高药品的安全性。

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨三七总皂甙对血小板源生长因子刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能机制。方法运用血小板源生长因子刺激兔体外血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术及免疫细胞化学法观察三七总皂甙对其增殖活性、细胞周期及c-myc蛋白表达的影响。结果血小板源生长因子显著刺激血管平滑肌细胞增殖,三七总皂甙呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖,对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖亦具有显著抑制作用;三七总皂甙作用下血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少,c-myc蛋白的表达亦降低。结论三七总皂甙对基础状态下及血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均具有显著抑制作用,部分机制与其阻滞血管平滑肌细胞G1/G0期向S期转化以及下调c-myc基因表达有关。

天麻素对体外模拟脑缺血损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的:观察中药天麻素对培养的正常及缺血大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)的影响,以探讨天麻素对BMEC的作用。方法:采用体外培养的BMEC,模拟脑缺血损伤,观察天麻素对其活性、生存率和一氧化氮(NO)的影响。结果:缺血损伤模型BMEC活性及生存率较正常对照组明显降低;不同剂量天麻素对正常对照组BMEC活性、生存率及NO含量有升高趋势;正常对照组不同剂量天麻素BMEC活性较缺血损伤模型组活性有明显升高(P<0.05);天麻素高剂量可明显提高缺血损伤BMEC NO含量(P<0.05)。结论:天麻素各实验剂量可增强缺血损伤BMEC活力,提高受损内皮细胞(EC)的生存率;促使EC NO分泌增加。提示天麻素对体外培养的大鼠BMEC缺血损伤具有一定的保护作用。

美洲大蠊提取物对3株消化系统肿瘤细胞的细胞毒性研究

目的探讨美洲大蠊提取物的抗肿瘤作用。方法通过聚酰胺柱层析分离划段得到美洲大蠊醇提物的不同部位,采用四甲基偶氮唑盐比色法(M TT法)对所得部位进行体外肿瘤细胞毒性测试。结果多个部位样品的半数抑制浓度(IC50)值小于10μg/m L。结论美洲大蠊提取物中确实存在具有肿瘤细胞生长抑制作用的物质,值得进一步研究。

黑灵芝多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响

目的:研究黑灵芝多糖(PSG-1)对小鼠脾淋巴细胞增殖及诱生细胞因子的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测PSG-1在不同质量浓度、不同时间对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,检测不同质量浓度PSG-1单独作用及其与丝裂原共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响;用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定白介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:PSG-1在20～160μg/mL质量浓度范围能显著促进脾细胞的增殖,且48h效果最佳;PSG-1能显著增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞和脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞的增殖作用;并且能显著诱导脾淋巴细胞分泌IL-2和TNF-α。结论:PSG-1能有效的促进脾淋巴细胞的增殖,并与ConA、LPS对T、B淋巴细胞的增殖有协同刺激作用,还可以通过IL-2和TNF-α发挥免疫增强作用。

过氧化物酶体增殖物活化的受体γ特异配体罗格列酮对肝星状细胞生物学特性的影响

目的 研究过氧化物酶体增殖物活化的受体γ(PPARγ)特异配体罗格列酮对肝星状细胞(HSC)PPARγ 表达以及对HSC生物学特性的影响。 方法 设立空白对照组、3μmol L罗格列酮组、10μmol L罗格列酮组;分别 用RT PCR、Western印迹、免疫细胞化学方法检测PPARγ的表达;用Western印迹和免疫细胞化学方法检测α 平滑肌 肌动蛋白(α SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;四甲基偶氮唑盐(methythiazolyltetrazolium,MTT)法检测细胞增殖;流式细胞 仪分析细胞凋亡。 结果 10μmol L罗格列酮组HSC的PPARγmRNA表达明显高于对照组(t=10.87,P<0.01), PPARγ蛋白表达也明显高于对照组(t=4.627,P<0.01);10μmol L罗格列酮组HSC的增殖活性显著低于对照组(t ≥5.542,P<0.01),其α SMA及Ⅰ型胶原表达明显低于对照组(t≥4.627,P<0.01),其凋亡发生率显著高于对照组 (χ2=16.682,P<0.01)。 结论 PPARγ特异配体罗格列酮通过增加PPARγ的表达,能够抑制激活的HSC表达α SMA及Ⅰ胶原,抑制激活的HSC增殖,诱导激活的HSC凋亡。

苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 研究苏拉明 (suramin)对培养人视网膜色素上皮细胞 (retinal pigm ent epithelium,RPE)增殖的影响 .方法 将不同质量浓度的苏拉明 (1.5 ,15和 15 0 mg· L- 1 )加入RPE细胞培养液 ,采用四甲基偶氮唑盐 (tetrazolium,MTT)比色法 ,细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色(Ag NORs)检测苏拉明对 RPE增殖活力的影响 .结果 含有10 0 m L· L- 1小牛血清的培养液可以显著刺激 RPE的增殖(P<0 .0 1) ,无血清组 A值为 0 .19± 0 .0 1、含血清组 A值为0 .30± 0 .0 1;苏拉明抑制了 10 0 m L· L- 1血清条件下 RPE的增殖 ,呈剂量依赖性 ,最大抑制率达 5 1% ,3种浓度组 A值分别为 0 .2 9± 0 .0 1,0 .2 4± 0 .0 1和 0 .14± 0 .0 1,对细胞的形态无明显影响 .结论 苏拉明对血清刺激

三七总皂苷对体外培养的大鼠海马神经干细胞增殖分化的作用

目的探讨不同剂量三七总皂苷(PNS)对体外培养的新生大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法无血清原代培养新生SD大鼠海马NSCs,利用巢蛋白(Nestin),5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)和神经元、星形胶质细胞的特异性标记物β-Ⅲ型微管蛋白(Tuj-1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)对培养的NSCs进行鉴定。将培养的细胞分为对照组、PBS组和PNS组,PNS组包括0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 g/L组,观察各组细胞克隆形成率、细胞增殖曲线和细胞分化比例。将培养的细胞分为对照组和0.4 g/L PNS组,利用流式细胞仪检测PNS对海马神经干细胞分化的影响。结果海马神经干细胞呈神经球聚集生长,BrdU染色阳性。加入血清后神经球周围有细胞呈放射状向四周生长,并带有突起。染色呈Tuj-1和GFAP阳性。与对照组相比,中低剂量组(0.1、0.2、0.4 g/L)对大鼠海马NSCs增殖能力无显著影响,而高剂量的三七总皂苷(0.8 g/L及1.0 g/L)干预组则明显抑制了NSCs的增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。在分化条件下,三七总皂苷0.4 g/L干预组显著提高NSCs向神经元分化的比例,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三七总皂苷能够调节体外培养的大鼠海马NSCs的增殖和分化水平,在合适的剂量下明显提高了神经元的分化比例。

睾酮在体外对脾淋巴细胞增殖反应和分泌IgG的影响

为探讨雄激素对大鼠脾淋巴细胞产生免疫球蛋白和增殖反应的影响 ,用不同浓度睾酮作用于脾淋巴细胞 ,用中性红活染比色法和四甲基偶氮唑兰法 (MTT)分别观察睾酮对培养的大鼠脾淋巴细胞增殖的影响 ;用酶联免疫法 (ELISA)检测不同浓度睾酮处理的脾淋巴细胞由刀豆素A(ConA)刺激产生白细胞介素 6(IL- 6)和免疫球蛋白 (IgG)的影响。结果发现在睾酮作用下 ,细胞增殖反应下降 ;睾酮可下调脾淋巴细胞产生的IgG。

生物可降解材料PHBV的细胞毒性评价的研究

通过体外细胞毒性试验,对新型材料β-羟基丁酸与β-羟基戊酸共聚物(PHBV)的细胞生物相容性进行了研究。主要依据ISO10993及GB/T 16886—1997的标准,应用四甲基偶氮唑盐(MTT assay)比色法对PHBV的细胞毒性进行评价。选用不同体积分数、不同温度下的PHBV材料浸提液为培养液,以及与PHBV材料直接接触培养来检测1d、3 d、5 d小鼠成纤维细胞BHK-21的相对增值率,确定PHBV材料的毒性程度。实验结果表明,PHBV材料即使在高温下其物理化学性质也很稳定;它的细胞毒性程度为0级,有着良好的细胞生物相容性。

3种方法提取洋葱中的类黄酮物质对肝癌细胞株HepG2的作用

目的研究3种方法提取洋葱中的类黄酮物质对肝癌细胞株HepG2的作用。方法采用水煎煮法、50%乙醇回流法及50%乙醇冷浸法从洋葱中提取类黄酮物质,将其分别加入处于对数生长期的HepG2肝癌细胞中培养,以PBS为对照组,20、30、40、50、70μg.ml-1的类黄酮物质为实验组,用MTT法分别测定给药前及给药72 h后各浓度组在490 nm处的吸光度。结果水煎煮法、50%乙醇回流法及50%乙醇冷浸法提取的类黄酮物质抑制HepG2肝癌细胞生长的起始浓度分别为40、50、40μg.ml-1,随着浓度的增加,抑制作用显著增强。结论洋葱中类黄酮物质对体外培养的HepG2肝癌细胞表现出明显的抗肿瘤活性,50%乙醇冷浸法所提类黄酮物质的抗肿瘤活性最强。

胡桃醌诱导HeLa细胞凋亡的机制

目的探讨胡桃醌对宫颈癌He La细胞促凋亡作用的机制,及其相关的信号转导通路。方法选取处于对数生长期的He La细胞将其分为空白对照组和30μmol/L胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对不同时间点He La细胞的抑制作用;Hoechst 33258试剂盒,流式细胞仪测定胡桃醌对不同时间点He La细胞凋亡的影响;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路中AKt及p Akt的表达。结果MTT实验显示,与对照组比较,各时间点He La细胞具有抑制作用,且差异显著均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);Hoechst 33258检测表明,30μmol/L胡桃醌处理细胞4,8,12 h后可出现明显的细胞核典型凋亡细胞形态;细胞凋亡检测表明,30μmol/L胡桃醌培养不同时间后,与对照组相比早期凋亡率明显增高;Western blotting检测显示,与正常对照组相比,30μmol/L胡桃醌处理细胞12h后,He La细胞Bcl-2,p Akt蛋白的表达明显降低,而Bax、Cleave-Caspase-3,Akt蛋白表达明显升高。结论胡桃醌通过抑制PI3K/Akt通路,进而促进He La细胞凋亡。

新型牙本质黏结剂体外细胞毒性研究

目的:评价一种新型牙本质黏结剂的细胞毒性,并与商品化的两种黏结剂细胞毒性进行比较。方法:采用琼脂覆盖法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,评价新型牙本质黏结剂优邦 (UB)和商品化黏结剂AdperPrompt自酸蚀黏结剂(AP)与Prime&BondNT(PB)在人牙本质片上使用后,对L929小鼠成纤维细胞的毒性作用。结果:MTT实验中三种牙本质黏结剂细胞毒性均为 1级;琼脂覆盖实验中,三种材料两种厚度牙本质片均出现脱色区和部分细胞溶解,细胞毒性评价均为 1级。结论:新型牙本质黏结剂具有轻微的细胞毒性,UB对牙髓组织的影响还有待进一步研究。

几种医用材料的细胞生物相容性评价的实验研究

目的 :通过 2种体外细胞毒性试验研究 ,评价几种生物材料的细胞生物相容性。方法 :依据ISO 10 993 1.1997及GB/T 16886.1 1997,应用琼脂覆盖法和四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法对聚丙烯酰胺水凝胶、壳聚糖和类金刚石等 5种生物材料的细胞毒性进行评价。通过建立MTT比色法的L92 9细胞生长代谢标准曲线 ,确定了 96孔板适宜的细胞接种数。结果 :5种生物材料MTT试验中毒性级均为 0级 ,琼脂覆盖法中材料周围及脱色区内细胞溶解评价 (Z/L值 )均为 0 / 0。结论

不同浓度骨碎补总黄酮复合可注射骨修复材料对MC3T3-E1成骨细胞作用的实验研究

目的本实验旨在观察中药骨碎补提取物骨碎补总黄酮(AFDR)复合海藻酸基可注射骨修复材料对成骨细胞MC3T3-E1体外培养的影响。方法将成骨细胞株MC3T3-E1随机分为空白对照组、单纯使用海藻酸基可注射骨修复材料组、AFDR0.04mg/L、0.16mg/L、0.64mg/L、1.28mg/L、5.12mg/L 7组,体外复合海藻酸基可注射骨修复材料,以24h和48h为观察时间点,倒置显微镜观察MC3T3-E1细胞形态,台盼蓝拒染法检测MC3T3-E1存活率,MTT法观察细胞增殖效应,碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度骨碎补总黄酮促进MC3T3-E1分化作用,采用Von kossa钙化染色法观察其促MC3T3-E1细胞钙化作用。结果①倒置显微镜下观察复合海藻酸基可注射骨修复材料的MC3T3-E1细胞形态,细胞形态呈三角形、多边形、长梭形等,呈集落样生长,无接触抑制,有伪足伸出,胞液透亮,核圆形。AFDR各组不同程度促进成骨细胞的增殖、分化:7组能不同程度的促进成骨细胞的增殖、分化,与空白对照组比较,以0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组的成骨细胞增殖数量最多,1.28mg/L,5.12mg/L的AFDR对细胞增殖作用不明显;②MC3T3-E1平均存活率≥90%;③骨碎补总黄酮(AFDR)0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组在培养24小时和48小时,其OD值与空白对照组及组间均有显著性差异,可促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05和P<0.01);④AFDR 0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组能使MC3T3-E1的ALP活性升高(P<0.05);⑤AFDR 0.64mg/L剂量组能促进MC3T3-E1骨钙素合成(P<0.05);⑥AFDR 0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组均可促进细胞钙化(P<0.05)。结论 AFDR可显著促进在海藻酸基可注射骨修复材料上MC3T3-E1的增殖、分化和钙化,其作用具有时间依赖和剂量依赖关系。