四甲基偶氮唑蓝法测定肠毒素C活性初步研究

目的：探讨四甲基偶氮唑蓝（MTT）法替代升白实验测定肠毒素C（SEC）活性。方法：采用小鼠脾T淋巴细胞增殖试验，用MTT法对20批样品进行脾T淋巴细胞增殖活性测定，在酶联免疫仪上检测吸光度，与空白组比值作为生物活性标准指数。结论：MTT法可靠性、重复性好，易操作，适合替代升白实验作为高聚生的生物活性检测方法。

食管癌术后MTT法肿瘤细胞药物敏感试验及临床意义

目的 探讨四甲基氮唑蓝 (MTT)法体外药物敏感试验对食管癌术后化疗的指导意义。 方法 采用MTT法对 70例食管鳞癌患者术后新鲜食管癌标本作体外细胞培养 ,采用常用的 5种化疗药物单独及联合应用 ,测定药物敏感度。 结果 不同肿瘤个体对同一药物、同一个体不同药物的敏感度均不同 ,单独用药者癌细胞对羟基喜树碱和丝裂霉素较敏感 ,联合用药者的总体敏感度明显高于单独用药者。 结论 MTT法体外药物敏感试验具有指导食管癌患者术后化疗的作用 ,减少了用药的盲目性 ,从而提高化疗疗效。

环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80μmol/L)处理24,48,72h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P<0.01;TE-13:F=46.99,P<0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P<0.01;TE-13:r=0.925,P<0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P<0.01;TE-13:r=-0.703,P<0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P<0.01;TE-13:r=-0.753,P<0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.

肿节风注射液对人肝癌细胞株Bel-7404的抑制作用

目的体外观察肿节风注射液对人肝癌细胞株的抑制作用。方法用人肝癌细胞株Bel-7404为供试体,氟尿嘧啶作为阳性对照,以抑制细胞增殖作为指标,采用四甲基唑蓝(MTT)法检测肿节风注射液对人肝癌细胞株的抑制作用。结果肿节风注射液对人肝癌细胞的48h抑制率为19.40%,72h的抑制率为41.90%。结论体外实验表明肿节风注射液对人肝癌细胞有抑制作用。

藤茶提取物的抗肿瘤作用研究

目的观察藤茶提取物(FL0810)体内外抗肿瘤的作用。方法采用S180腹水瘤模型观察FL0810体内抗肿瘤作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究FL0810对肿瘤细胞体外增殖的影响。结果 FL0810能延长S180腹水瘤小鼠生存时间,与模型对照组相比有显著差异(P<0.05);FL0810对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、人前列腺癌细胞DU145均有较强的体外增殖抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性,抑制率随着药物浓度增加而增加;72 h半数抑制浓度(IC50)为别为208.71,226.14,150μg/mL。结论藤茶提取物在体内对S180的生长有一定的抑制作用,在体外对人乳腺癌和人前列腺癌有明显的抑制作用。

疏肝舒乳颗粒对人乳腺癌MCF-7细胞的毒杀作用研究

目的研究疏肝舒乳颗粒(SGSR)对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒性作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在试管内研究SGSR对MTTOD值的影响,检测SGSR对MCF-7细胞的毒杀作用。结果SGSR各浓度组光密度值均低于对照组,说明不同浓度的SGSR对MCF-7癌细胞均有一定的杀伤作用。特别是4,1,0.25 g/m l浓度组,其对癌细胞的杀伤率分别达到99.9%,99%,95.55%,差异有显著性(P<0.01)和很好的剂量效应曲线,杀伤率明显高于β-胡萝卜素(β-CA)和SGSR加β-CA浓度组。结论研究结果现显示,S6SR在试管内对MCF-7乳腺癌细胞有明显的毒杀作用,起效机制除了对肿瘤细胞的直接杀伤作用外,其抗突变、抗有丝分裂作用也可导致DNA链断裂,达到干扰基因转录而产生抗癌作用。SGSR不仅可作为治疗乳腺增生性疾病的药物,也可作为乳腺癌放、化疗时的辅助用药。

抑制脂肪酸合成酶对大肠癌细胞生长的影响及其机制

背景:流行病学研究显示,大肠癌的发生、发展与饮食中脂肪酸的含量和种类有关,而目前有关脂肪酸代谢与大肠癌关系的研究较少。目的:探讨抑制脂肪酸合成酶（FAS）对人大肠癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:在体外实验中应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察FAS抑制剂Cerulenin对大肠癌细胞LoVo生长的抑制作用,并通过流式细胞仪（FCM）对细胞周期变化和细胞凋亡进行检测。结果:Cerulenin可抑制LoVo细胞生长,其抑制作用具有剂量依赖性。2.5、5、10和20 mg/L Cerulenin作用48h的抑制率分别为3.6％±3.3％、7.8％±4.0％、38.5％±1.6％和58.7％±5.6％,与对照组比较有显著差异（P<0.05）。FCM测定显示,Cerulenin可引起LoVo细胞发生G2/M期阻滞。10mg/L Cerulenin作用48h可使68.2％±3.2％的LoVo细胞阻滞于G2/M期,与对照组比较有显著差异（P<0.05）。Cerulenin可诱导LoVo细胞发生细胞凋亡,10mg/L Cerulenin作用12、24和48h后上。LoVo细胞的凋亡率分别为1.3％±0.9％、4.7％±1.4％和39.0％±5.8％,后两组与对照组比较有显著差异（P<0.05）。结论:抑制FAS可抑制大肠癌细胞生长,其机制可能是诱导细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡。

外源性端粒酶催化亚基不影响人骨髓间充质干细胞的特性

目的研究稳定表达端粒酶催化亚基的人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)生物学特性。方法用含有人端粒酶返转录酶(hTERT)基因的反转录病毒质粒pBabepuro-hTERT感染hBMSCs,经嘌呤霉素(puro)筛选出转基因细胞,我们将其命名为hTERT-hBMSCs。采用TRAP-ELISA法检测hBMSCs细胞转染前后端粒酶活性的变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,染色体核型分析,测量平板克隆形成率,成骨诱导等方法对hTERT-hBMSCs细胞生物学特性进行分析。结果TRAP-ELISA法检测转染hTERT的hBMSCs的端粒酶为阳性;hTERT-hBMSCs细胞表面抗原CD44表达阳性,CD34阴性;hTERT-hBMSCs比hBMSCs增殖活跃,目前已传了11代,尚未见衰老迹象,其染色体数目和结构正常,未见畸变;克隆形成率较低,为正常细胞;并保持干细胞成骨分化潜能。结论将外源性hTERT基因转入hBMSCs后,不影响其生物学特性和分化功能。

和胃降逆胶囊通过PI3K/AKT信号通路调控人胃癌AGS细胞增殖与凋亡机制研究

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。

孕激素对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探索孕激素对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取2015年1月至2018年1月郑州大学第三附属医院收治的200例子宫肌瘤患者作为研究对象,标本均是在手术期间提取,且均进行原代细胞培养、Westem blot检测孕激素受体表达、原代肌瘤细胞的鉴定、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖和凋亡。结果:孕激素受体(PR)–M(+)在0 mol·L^(-1)巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、10^(-6) mol·L^(-1) MIF、10^(-5) mol·L^(-1) MIF、10^(-4) mol·L^(-1) MIF的增殖抑制率和凋亡率与PR–M(–)比较,差异具有统计学意义(P <0.05),同时随着MIF浓度增加,两组细胞的增殖抑制率逐渐增加,同时随着药物浓度的增加和作用时间延长,细胞凋亡率逐渐增加。结论:MIF对子宫肌瘤细胞具有抑制增殖和促进细胞凋亡作用,且可通过PR–M促进肌瘤发生发展。

天然药物抑制晶状体上皮细胞增殖及其信号转导机制

目的:探讨天然药物榄香烯(Ele)、姜黄素(Cur)、雷公藤内酯醇(Tri)对重组人表皮生长因子(rhEGF)诱导的晶状体上皮细胞(LEC)增殖的抑制作用及其信号转导机制. 方法:用rhEGF诱导体外培养的牛LEC增殖,将高、中、低不同浓度的Ele、Cur、Tri与增殖状态的LEC共同孵育后,进行以下研究:1、四甲基偶氮唑蓝法(MTT)法检测LEC增殖情况.2、流式细胞仪(FCM)检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达.3、荧光分光光度法检测LEC内游离Ca2+浓度.4、放射免疫法检测LEC内环化腺苷酸(cAMP)和环化鸟苷酸(cGMP)含量.

三氧化二砷诱导人卵巢癌耐药细胞系3AO/cDDP细胞凋亡及机制的研究

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人卵巢癌耐药细胞系 3AO/cDDP细胞生长的影响及其机制。方法 采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法 ,检测不同浓度As2 O3 作用后 ,3AO/cDDP细胞的生长抑制率 ;采用流式细胞技术检测细胞凋亡率 ,细胞周期变化 ,以及Fas、FasL基因表达的变化。所有结果均与人卵巢癌细胞系 3AO细胞相比较 ;采用细胞骨架染色法观察 3AO/cDDP细胞凋亡细胞形态变化 ,通过吖啶橙染色 ,荧光显微镜观察As2 O3 作用后 3AO细胞的形态变化。结果 As2 O3 能明显抑制3AO/cDDP细胞的增殖 ,抑制作用呈时间和剂量依赖性 (P <0 0 5 ) ;在一定浓度范围内 ,3AO/cDDP细胞凋亡率与As2 O3 的浓度和作用时间呈依赖关系 ,诱导凋亡的最适浓度是 3μmol/L ;As2 O3 低浓度时 ,3AO/cDDP细胞周期S期通过受阻 ,高浓度时诱导S期细胞凋亡 ;As2 O3 作用后 ,两种细胞系Fas基因的表达均呈升调节 ,FasL基因的表达无变化 ;与 3AO细胞相比 ,差异均无显著意义 (P >0 0 5 ) ;As2 O3作用后 3AO及 3AO/cDDP形成典型的凋亡小体。结论 As2 O3 通过Fas/FasL系统 ,诱导S期细胞凋亡 。

过氧化氢对血管平滑肌细胞的作用

目的 研究过氧化氢 (H2 O2 )对兔血管平滑肌细胞的作用机制。方法 兔血管平滑肌细胞 (VSMCs)原代培养 ,微量细胞培养四甲基偶氮唑蓝法 (MTT)检测不同浓度H2 O2 在不同时段对其增殖影响 ,确定进一步研究的H2 O2 浓度 ,并应用流式细胞仪检测此浓度H2 O2 对VSMCs细胞周期和细胞凋亡的作用。结果 MTT法检测 ,H2 O2 浓度≥ 10 0 μmol/L(10 0～ 14 0 0 μmol/L)时 ,与VSMCs作用仅 1h ,即出现吸光度值显著降低 (P <0 .0 1) ;流式细胞仪细胞周期检测 ,H2 O2 浓度≥ 10 0 μmol/L时 ,与VSMCs作用 2 4h后 ,其G1期细胞数显著高于对照组 (94.65 %和 79.97% ) (P <0 .0 1) ,以H2 O2浓度在 10 0 μmol/L时尤为明显 ;流式细胞仪AnnexinV PI双标细胞凋亡检测 ,10 0 μmol/LH2 O2 有促进VSMCs凋亡作用 ,并在作用 48h左右达到高峰 ,占 2 6.76% ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 H2 O2 浓度≥ 10 0 μmol/L时 ,可显著抑制VSMCs增殖 ;当H2 O2 浓度为 10 0 μmol/L时 ,有促进VSMCs凋亡作用。

细胞体外药敏试验与急性淋巴细胞白血病患儿临床治疗及预后的研究

目的分析在临床危险因素分型基础上,依据细胞体外药物敏感性确定个体化治疗方案治疗儿童ALL的可行性。方法留取50例ALL患儿治疗前骨髓/外周血液标本,行细胞体外药敏试验;将白血病细胞对泼尼松（PRED）、长春新碱（VCR）、门冬酰胺酶（ASP）3种药物敏感程度进行积分（PVA积-分）。每种药物的积分为1分（高度敏感）、2分（中度敏感）、3分（不敏感/耐药）,3种药物总积分分为3＋4分（高度敏感）、5~7分（中度敏感）、8＋9分（不敏感/耐药）;临床按传统危险因素分型之后,依据PVA积-分为患儿制定个体化治疗方案。结果 50例患儿全部完成诱导缓解治疗,完全缓解（CR）率100%。中位随访时间63个月。复发、死亡14例,无事件生存（EFS）率64.3%;PVA积-分3＋4分24例,死亡1例,EFS率96.1%;PVA积-分5~7分15例,死亡4例,EFS率79.7%（t=3.737,P=0.002）;PVA积-分8＋9分11例,死亡9例,EFS率54.2%（t=2.448,P=0.028）。结论在危险因素分型基础上,依据PVA积-分确定个体化治疗方案不仅避免标危ALL患儿因耐药使化疗方案强度不足,CR之后易复发,导致生存期缩短,而且可避免高危ALL患儿因过强化疗后的治疗相关毒性及死亡。PVA积-分是对ALL传统危险因素分型的补充。

VP22增强人巨细胞病毒pp65核酸疫苗在小鼠体内免疫活性的实验研究

目的构建人巨细胞病毒(HCMV)主要被膜磷蛋白pp65(HCMVpp65)基因高表达载体以及VP22.pp65联合表达载体,并评价VP22增强pp65核酸疫苗的体内免疫效果。方法8周龄正常BALB/C雌性小鼠分为pcDNA3.pp65组、pVP22.pp65组、实验对照组,每组7只。利用分子克隆技术构建HCMVpp65表达载体pcDNA3.pp65、VP22与pp65融合基因载体pVP22.pp65,免疫小鼠,四甲基偶氮唑蓝法测定T淋巴细胞增殖反应、白细胞介素(IL)2生物学活性,乳酸脱氢酶释放法测定自然杀伤细胞(NK)活性,酶联免疫吸附实验测定血清HCMVIgM、IgG抗体含量、血清及脾细胞培养液中的IL2、IL4含量。结果小鼠的一般状况始终良好,成功构建了HCMV核酸疫苗载体pcDNA3.pp65、pVP22.pp65;免疫小鼠后,两种疫苗T淋巴细胞增殖反应(8周时刺激指数分别为5.11和5.55)和NK细胞活性(12周分别为8.74%和12.08%)及HCMVIgM(6周时A值分别为1.20和1.58)、IgG抗体(6周时A值分别为1.09和1.78)均高于对照组,且pVP22.pp65组高于pcDNA3.pp65组(P<0.05)。小鼠血清中IL2和IL4含量及IL2的生物学活性较低,各组间差异无统计学意义(均P>0.05);小鼠脾细胞上清中IL2和IL4含量以pVP22.pp65组(411.11pg/ml、76.10pg/ml)最高,IL2生物学活性也以pVP22.pp65组(A值为0.22)最高。结论HCMV核酸疫苗无毒性。

声动力效应抑制卵巢癌细胞的体外实验

目的研究超声激活血卟啉对卵巢癌细胞抑制的体外效应。方法应用一定强度的超声激活血卟啉,采用四甲基偶氮唑蓝法、克隆形成率方法检测抑制卵巢癌细胞的作用,并用显微镜观察处理后细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果超声激活血卟啉对抑制细胞生长有明显作用(P<0.05),且随着血卟啉浓度的升高,抑制作用明显增强(P<0.05)。同时,超声激活血卟啉的效应与超声辐照时间有关。结论声动力处理抑制细胞生长作用明显,并可以诱导凋亡。

氨甲喋呤对映体对人肝癌细胞HepG-2增殖的抑制作用

[目的]研究手性药物氨甲喋呤(MTX)单一对映体对人肝癌细胞株HepG-2的体外增殖的抑制作用。[方法]应用MTT比色法检测MTX对映体[(+)MTX、(-)MTX]对HepG-2细胞增殖抑制作用,用倒置显微镜观察细胞的形态学变化。[结果]0.1～150μmol/L(+)MTX和10～150μmol/L(-)MTX可抑制HepG-2细胞的生长,且其作用具有剂量和时间依赖性(P<0.01),但抑制强度为(+)MTX>(-)MTX;倒置显微镜观察不同浓度(+)MTX和(-)MTX作用HepG-2细胞株不同时间后,细胞出现不同程度的形态学改变。[结论](+)MTX和(-)MTX对HepG-2细胞的抑制作用不同,(+)MTX抗增殖作用明显强于(-)MTX。

高氟茶浸泡液的细胞毒性及致突变性

[目的]研究含氟茶浸泡液的细胞毒性和致突变性,探讨高氟茶对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的遗传毒作用。[方法]选取绿茶A、绿茶B、对照茶为研究对象,分别制备其茶浸泡液。将上述3种茶浸泡液分别设立0.63、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00g/L7个质量浓度组,对V79细胞分别进行2、4、8、12、24h染毒。采用甲基四唑蓝(MTT)法检测3种茶浸泡液对V79细胞的毒性;运用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Amestest)检测3种茶浸泡液的致突变性。[结果]绿茶A、绿茶B和对照茶浸泡液中氟化物的浓度分别为2330、1390、7.53mg/kg,绿茶A、绿茶B的氟含量均超过了中国农业行业标准(NY659—2003)规定茶叶中氟化物(以F-计)≤200mg/kg的标准。在MTT实验中,3种茶浸泡液对细胞活性的抑制作用具有明显的时间-效应(P<0.05)和剂量-效应关系(P<0.05)。绿茶A、绿茶B的细胞存活率明显低于对照茶(P<0.05)。在作用4￣24h时,绿茶A的细胞存活率低于绿茶B(P<0.05)。分析3种茶不同培养时间的半数抑制浓度(IC50)发现,3种茶组间IC50的差异均有统计学意义(P<0.05),绿茶A、绿茶B、对照茶不同培养时间平均IC50分别为20.26、23.24、28.18g/L。在Ames试验中,3种茶浸泡液在8￣5000μg/皿的浓度上,4菌株回变菌落数与相应的阴性对照组之间的差异均有统计学意义。[结论]绿茶A、B浸泡液对V79细胞活性均有抑制作用,其细胞毒性均明显高于对照茶。未见高氟茶浸泡液有致突变作用。绿茶A、B对V79细胞的毒性比对照组大可能与它含氟量高有关。

N-琥珀酰壳聚糖对牛血红蛋白和正常肝细胞毒性研究

目的探究N-琥珀酰壳聚糖(NSCS)对牛血红蛋白(BHb)和正常肝细胞(HL-7702)的毒性。方法在模拟人体生理条件下,以BHb为研究对象,采用紫外-可见分光光度法、荧光光谱法和同步荧光光谱法结合,探究NSCS对BHb的毒性;同时以HL-7702为研究对象,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法考察NSCS对HL-7702的细胞毒性。结果紫外-可见分光光度法和MTT法结果表明,NSCS的毒性较弱,且取代度对NSCS毒性的影响较小。荧光光谱显示,NSCS可以猝灭BHb的内源性荧光,且猝灭作用随取代度的增大略有增强。其猝灭机制主要为动态猝灭,二者间作用力主要为静电作用力和疏水作用力。同步荧光光谱显示,NSCS对BHb的构象基本无影响。结论 NSCS对BHb和HL-7702细胞的毒性均较弱。