四硫化四砷动物药动学研究

目的 初步探讨四硫化四砷（As4S4）的动物药动学规律.方法 原子分光光度法测定As4S4小鼠单次灌胃后血砷浓度以及组织、排泄物中总砷含量.以3P97软件进行药动学参数估算.结果 小鼠单次灌胃As4S4的药-时变化符合一房室模型,吸收不完全,消除较慢,其消除半衰期9～12 h.口服给药后砷在小鼠体内分布广泛,主要分布在体脂、毛、皮、肝、肾、脾和子宫.砷主要从粪、尿排泄.结论 小鼠灌胃As4S4血中和组织中能达到一定浓度,但是吸收有限,因而相对较为安全.消除半衰期较长,值得注意.

四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4的凋亡作用

目的 研究四硫化四砷对NB4细胞的促凋亡作用及这一过程中早幼粒细胞白血病 维甲酸受体α(PML RARα)融合基因及其表达产物的变化。方法通过细胞形态学观察 ,流式细胞仪检测及DNA电泳等方法观察四硫化四砷对NB4细胞的诱导凋亡作用 ,用荧光染色体原位杂交技术 ,反转录PCR及Western印迹技术测定这一过程中PML RARα融合基因及其表达产物的改变。结果 四硫化四砷在 0 .5～ 3μmol·L- 1之间能诱导NB4细胞凋亡 ,在此过程中 ,PML RARα融合基因无明显变化 ,但PML RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白的表达明显减少。结论 四硫化四砷能诱导NB4细胞凋亡 ,其作用靶点可能在PML RARα融合蛋白和野生型RARα蛋白。

四硫化四砷治疗急性早幼粒细胞白血病过程中PML/PML-RARα蛋白的变化

为了研究四硫化四砷 (As4S4)对急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者白血病细胞中PML/PML RARα蛋白的作用 ,在患者治疗前和治疗后不同时间多次留取骨髓或外周血标本 ,用抗PML蛋白单抗对APL细胞进行间接免疫荧光染色 ,并在荧光显微镜下观察荧光信号的演变规律。结果显示 :治疗前APL细胞表现为细胞核内弥漫分布的大量微颗粒荧光信号。As4S4 治疗后 ,最早于第 2天即可出现荧光分布的改变 ,表现为微荧光颗粒消失 ,出现数个大荧光颗粒 ,并出现核周荧光 ,最终大荧光颗粒也消失。当As4S4 合用全反式维甲酸 (ATRA)时 ,PML蛋白荧光信号变化规律与单用As4S4 基本相同。但单独应用ATRA治疗后 ,PML蛋白荧光信号的改变与前两组明显不同 ,主要差别为微荧光颗粒不会很快消失 ,而是在微荧光颗粒逐渐减少的基础上 ,出现越来越多的大荧光颗粒 ,最终微荧光颗粒消失 ,而大荧光颗粒始终存在。结论 :As4S4 使患者体内APL细胞的PML/PML RARα蛋白发生重新分布 。

四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞内Caspase-3活性的影响。方法:2例APL患者给予As4S4(2.5g/d,分3次口服)治疗,治疗前、治疗后7d及14d,分离外周血单个核细胞(PBMNC)。NB4细胞与2μmol/L的As4S4共同培养24h。取APL患者的PBMNC和处理前后的NB4细胞,用流式细胞仪分析亚二倍体细胞数,用荧光分析法检测Caspase-3活性。结果:经As4S4处理的NB4细胞,亚二倍体细胞数(58.9±5.2)%,高于处理前的(1.2±0.5)%(t=23.616,P<0.05);Caspase-3活性为(21.5±3.1)×106s-1,高于处理前的(8.7±1.2)×106s-1。治疗后APL患者的PBMNC内Caspase-3活性较治疗前升高,2例患者均获血液学缓解。结论:As4S4通过激活Caspase-3诱导NB4细胞凋亡,这可能是As4S4治疗APL的主要机制之一。

四硫化四砷对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响

目的利用BALB/C裸鼠和人卵巢癌细胞株SKOV3建立裸鼠皮下移植瘤,探讨四硫化四砷在卵巢癌组织中的抑瘤作用及机制。方法建立卵巢癌SKOV3裸鼠皮下移植瘤模型,按照给药剂量(50mg/kg和100mg/kg)及肿瘤生成大小(3mm×3mm和10mm×10mm)将裸鼠随机分成小剂量早期治疗组、大剂量早期治疗组、小剂量治疗组和大剂量治疗组,分别予四硫化四砷隔日灌胃,并设裸鼠生理盐水对照组。观察四硫化四砷对肿瘤的生长的影响;RT-PCR法及Western blotting法检测四硫化四砷对肿瘤组织中Bcl-2/Bax蛋白和mRNA表达的影响。结果各组裸鼠一般情况良好。小剂量早期治疗组、大剂量早期治疗组和大剂量治疗组的抑瘤率分别为84.98%、87.55%和74.25%,与小剂量治疗组的35.19%相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR显示肿瘤组织Bcl-2 mRNA表达下调和Bax mRNA表达上调,Western blotting显示其Bcl-2蛋白表达降低和Bax蛋白表达增加。结论四硫化四砷可以抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,并诱导卵巢癌细胞凋亡。其作用机制可能与凋亡调控基因Bcl-2/Bax表达的改变有关。

四硫化四砷诱导卵巢癌SKOV_3细胞凋亡的研究

0引言 含砷化合物的药物制剂治疗各种疾病有着悠久的历史[1]。砷类矿物中药主要包括砒霜（主成分是As2O3）、雄黄（主要成分是As4S4）和雌黄（主要成分As2S3）。随着As2O3注射液于1999年作为国家二类新药正式上市销售以及美国FDA也于不久前特批该药上市,其临床应用逐步展开[2-6]。

四硫化四砷STI571和除莠霉素诱导K562细胞凋亡的研究(英文)

目的 目前慢性粒细胞性白血病 (CML)的化疗效果仍不理想 ,为寻找对CML敏感的药物 ,该研究探讨四硫化四砷、STI5 71和除莠霉素对CML细胞株K5 6 2的作用。方法 通过MTS方法检测三种药物在不同浓度 (0 .0 1 ,0 .1 ,1 .0 ,2 .0 ,5 .0 ,1 0 .0 μmol/L)下对K5 6 2细胞活力的影响。采用瑞氏染色、荧光染色和琼脂糖凝胶电泳观察药物处理后细胞形态学的变化和细胞凋亡的发生。用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 用 5 .0 μmol/L的四硫化四砷、STI5 71和除莠霉素培养 3天 ,K5 6 2细胞活力明显下降 ,其吸光值分别为 0 .32± 0 .0 4 ,0 .4 9± 0 .0 1 ,0 .6 9± 0 .0 2 ,其中四硫化四砷和STI5 71对细胞的抑制作用强于除莠霉素 (P <0 .0 1 ) ,前两者间无明显差异 (P >0 .0 5 )。 1 .0 ,5 .0 ,1 0 .0 μmol/L的四硫化四砷对K5 6 2细胞的抑制作用呈时间依赖关系 (P <0 .0 1 )。小于 1 .0μmol/L的四硫化四砷对K5 6 2细胞活力无明显影响。四硫化四砷培养 2 4至 4 8小时后 ,K5 6 2细胞出现染色质浓缩、核碎片及凋亡小体等典型的凋亡形态学改变。用 5 .0 μmol/L的四硫化四砷、STI5 71和除莠霉素培养 72小时后 ,K5 6 2细胞的凋亡率分别为 6 8.8%、5 6 .7%和 35 .5 % ,2 .0与 3.0 μmol/L的四硫化四砷诱导K5 6 2细胞凋?

四硫化四砷诱导K562细胞凋亡的机制研究

为了探讨四硫化四砷(As4S4)诱导慢性粒细胞性白血病(CML)细胞株K562凋亡及机制,用台盼蓝染色和MTS方法观察四硫化四砷对K562细胞生长抑制的影响,用瑞氏染色检测药物处理后的细胞形态学变化和细胞凋亡发生,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期改变,实时定量逆转录聚合酶链反应(realtimequantitativePCR)检测BCRABL、Bcl2、BclXL、Bad和Bax等mRNA的表达,Westernblot方法检测BCRABL、Akt和pAkt蛋白的表达。结果表明:四硫化四砷能明显抑制K562细胞活力,在0.5μmol/L浓度下培养24小时,细胞生长明显受抑制且有剂量和时间依赖关系。小于0.1μmol/L的四硫化四砷对K562细胞活力无明显影响。K562细胞经与四硫化四砷培养24至48小时后,出现典型的凋亡改变。与四硫化四砷培养12小时后,1.0μmol/L条件下,K562细胞凋亡率上升,大于2.0μmol/L浓度的四硫化四砷能明显诱导细胞凋亡,四硫化四砷能使K562细胞周期阻滞于G2/M期。四硫化四砷能使K562细胞BclXL的mRNA表达下调,但对Bcl2、Bad、Bax和BCRABL等的mRNA表达无影响。四硫化四砷能使K562细胞的pAkt蛋白表达下调,而BCRABL蛋白表达无变化。结论:四硫化四砷能有效地通过诱导凋亡抑制K562细胞生长,其机制可能与抑制凋亡途径因子BclX和pAkt等表达有关。

四硫化四砷对NB4细胞增殖的抑制作用

目的探讨四硫化四砷(As4S4)在体外对NB4细胞增殖的抑制作用。方法As4S4(处理)NB4细胞后,应用台盼蓝排斥实验测定细胞活力,用MTT实验测定细胞增殖抑制率,并观察As4S4对NB4细胞集落形成能力的影响。结果NB4细胞在As4S4存在下进行培养,其细胞活力受到显著抑制,应用MTT实验检测到的As4S4对NB4细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,半数抑制浓度为2.86μmol/L。同时As4S4以剂量依赖的方式抑制NB4细胞的集落形成能力。结论As4S4在体外具有降低NB4细胞活力、抑制NB4细胞增殖及其克隆形成能力的作用。

四硫化四砷对荷NB4细胞SCID小鼠生存期的影响

目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对荷NB4细胞SCID小鼠生存期的影响。方法:34只荷NB4细胞腹水瘤的SCID小鼠均分为2组:治疗组给予As4S4悬液(100mg/kg)腹腔内注射,隔日1次,共3次;对照组同法给予5g/L甲基纤维素溶液。观察2组小鼠的生存期。结果:治疗组小鼠的生存期为(22.44±6.77)d,比对照组((16.27±2.34)d)明显延长(P<0.01);As4S4治疗过程中无明显的毒副作用,小鼠最终死于NB4细胞增殖所致的腹水。结论:As4S4可抑制SCID小鼠体内NB4细胞的增殖,延长荷瘤小鼠的生存期。

四硫化四砷对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤抑瘤作用的研究

目的探讨四硫化四砷（As4S4）对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长和瘤细胞凋亡的影响。方法建立卵巢癌SKOV3裸鼠皮下移植瘤模型，观察As4S4对肿瘤生长的抑制情况；RT—PCR法检测As4S4对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中bcl-2和baxmRNA表达水平的影响；Westernblot法检测As4S4对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中bcl—2和bax蛋白表达的影响。结果As4S4作用于卵巢癌裸鼠皮下移植瘤后，肿瘤的体积和重量明显减小，而且随药物剂量的增加抑瘤率明显增加。As4S4作用后，RT—PCR可见bcl-2mRNA表达强度减弱，baxmRNA表达强度增强；Westernblot法可见bcl-2蛋白带变细，bax蛋白带增粗。结论As4S4可以抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长，诱导肿瘤细胞凋亡，其作用机制可能与调节Bcl-2／Bax的表达有关。

四硫化四砷抑制人胃癌SGC7901细胞增殖及其作用机制

目的:探讨四硫化四砷(As4S4)对人胃癌细胞系SGC7901增殖抑制作用及其作用机制。方法:MTT法检测四硫化四砷对体外培养SGC7901细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR法检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测bcl-2和bax蛋白的表达。结果:四硫化四砷具有体外抑制SGC7901细胞增殖的作用,能诱导细胞凋亡,细胞中bcl-2的表达降低,bax的表达增强。结论:四硫化四砷具有抑制胃癌细胞系SGC7901细胞生长的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和调节bcl-2与bax表达有关。

四硫化四砷联合维甲酸、蒽环类药物治疗体系下附加染色体对急性早幼粒细胞白血病预后的影响

目的分析在以维甲酸联合四硫化四砷、蒽环类药物为主的治疗体系下附加染色体对预后的影响以及有附加染色体异常患者的临床表现和对含四硫化四砷诱导治疗方案的反应性。方法回顾性分析158例初治急性早幼粒细胞白血病患者临床资料。结果附加染色体异常在急性早幼粒细胞白血病中占18．4％。其中三体8以及i17q-是最常见的附加异常，有附加染色体异常组患者弥散性血管内凝血发生率增高（P〈0．05）。在附加染色体异常组完全缓解率降低（75．9％vs90．7％）、复发率增高（13．8％vs6．2％）、中枢神经系统白血病的发生率增高（17．2％VS6．2％），但差异未见统计学意义。两组生存率差异无统计学意义（P=0．160）。结论在此三类药物治疗体系下，尚未发现附加染色体对预后影响的统计学意义。

四硫化四砷对急性早幼粒细胞白血病患者心电图QTc间期的影响

目的 探讨四硫化四砷 (As4S4)对急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者心电图校正后QT(QTc)间期的影响。方法 复方柏子仁 (主要成分As4S4)治疗的 90例患者分为诱导缓解组和巩固维持治疗组。诱导缓解组测定并记录患者服药前及缓解后的血砷浓度及同步 12导联心电图 ;巩固维持治疗组测定并记录患者服药前及第 2 ,4 ,6 ,8,10疗程后的血砷浓度及心电图。测量每份心电图的QT间期值 ,以Bazett公式校正 ,计算出QTc,观察血砷浓度与QTc间期的关系。结果 无论诱导缓解组还是巩固维持治疗组 ,口服As4S4均能引起QTc间期的延长 ,QTc与As4S4的剂量及血砷浓度有关 ,随着As4S4的累积剂量或血砷浓度增大 ,QTc值及其延长的幅度也增大。在巩固维持治疗组服药的 10个疗程中 ,QTc值异常 (≥ 4 4 0ms)率平均为 37.7% ,随服用As4S4累积剂量的增加 ,各疗程血砷浓度缓慢上升 ,但各疗程之间的变化差异无显著性 (P >0 .0 5 )。各疗程中QTc间期虽逐步延长 ,但QTc值异常率在各疗程中无显著性差异 (P >0 .0 5 )。QTc异常的患者均无临床症状 ,未出现室性心动过速或尖端扭转型室性心动过速等病变 ,无一例患者因QTc间期延长而终止治疗。结论 As4S4治疗APL虽可引起QTc间期延长 ,且QTc间期的变化与血砷浓度呈正相关 。

四硫化四砷对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用

目的:研究四硫化四砷(As4S4)对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用及其作用机制。方法:体外培养SGC7901,取对数生长期的细胞分为空白对照组(不加药物)和20、40、60、80μmol/LAs4S4处理组,分别作用24、48、72 h。采用MTT法检测细胞增殖的抑制率,透射电镜观察细胞的形态,流式细胞仪分析细胞的周期分布,逆转录-聚合酶链式反应法和蛋白质印迹法检测作用48 h后细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,20(作用48、72 h)、40、60、80μmol/LAs4S4处理组细胞增殖的抑制率明显升高(P<0.01),与浓度和时间呈正相关;从40μmol/L As4S4处理组细胞开始出现凋亡,60μmol/L As4S4处理组细胞开始出现大量凋亡,细胞周期阻滞于S期;与空白对照组比较,As4S4处理组细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白表达随As4S4浓度的增加而减弱,Bax mRNA和蛋白表达随As4S4浓度的增加而增强。结论:As4S4具有抑制SGC7901细胞增殖的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调Bcl-2表达、上调Bax表达有关。

四硫化四砷通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路对乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的观察四硫化四砷（As4S4）通过磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用。方法利用噻唑蓝（MTT）法分别检测0、20、40、60、80 μmol/L的As4S4处理24、48、72 h及10 μmol/L LY294002处理48 h后MCF-7细胞的增殖；细胞划痕实验及Transwell实验检测As4S4处理48 h对MCF-7细胞迁移及侵袭的影响；流式细胞仪检测As4S4及10 μmol/L LY294002处理48 h对MCF-7细胞凋亡的影响；Western blot检测As4S4及10 μmol/L LY294002处理48 h对MCF-7细胞PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白PI3K、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、mTOR表达的影响。结果与0 μmol/L处理比较，20 μmol/L As4S4处理24 h时对细胞增殖无明显抑制（P=0.065），处理48、72 h时对细胞增殖具有明显抑制作用（P=0.033），抑制率分别达到11.1%和14.3%。As4S4浓度为40、60、80 μmol/L时对MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用（P=0.002），处理72 h后，抑制率分别达到47.9%、58.8%、67.1%。As4S4的抑制作用与时间、浓度呈正相关。和对照组比较，60 μmol/L As4S4作用48 h后，MCF-7细胞迁移及侵袭能力下降42.4%，差异有统计学意义（P=0.005）；细胞的凋亡率增加至（19.56±1.12）%，差异有统计学意义（P=0.009），PI3K的表达无明显变化，p-Akt的表达显著下降64.3%，mTOR的表达显著下降58.7%（P=0.008）。As4S4处理后MCF-7的增殖与凋亡与抑制剂LY294002处理结果一致。结论As4S4可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及转移，促进细胞凋亡。

雄黄抗肿瘤作用及分子机制研究进展

雄黄为硫化物类矿物雄黄族雄黄,在现代临床研究中应用颇为广泛,对白血病、肺癌、宫颈癌、胃癌等多种癌症表现出较强的抗肿瘤特性。本文整理近年雄黄及其纳米制剂、微生物转化液等抗肿瘤相关文献,重点综述雄黄诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤干细胞分化和血管生成,以及协同其他药物抗肿瘤的作用及分子机制,以期为雄黄的深入研究及合理开发利用提供依据和理论参考。

构建雄黄诱导维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病NB4-R1细胞凋亡的蛋白质双向电泳图谱

目的构建雄黄(四硫化四砷,tetra-arsenic tetra-sulfide,As4S4)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)维甲酸耐药细胞株NB4-R1细胞凋亡前后的差异蛋白质组表达谱。方法 首先应用MTT法、透射电镜、AnnexinV/PI双染法和激光共聚焦显微镜的一系列体外实验定性化和定量化雄黄诱导NB4-R1细胞凋亡的作用;然后应用高分辨二维双向电泳技术构建雄黄诱导维甲酸耐药细胞株NB4-R1凋亡前后的差异蛋白质组表达谱。结果 雄黄对NB4-R1细胞的生长抑制效应呈剂量和时间依赖性,雄黄作用24h半数抑制浓度(IC50)为(24.06±0.19)μmol/L,48h IC50为(9.50±0.13)μmol/L,72h IC50为(6.55±0.03)μmol/L;确定了25μmol/L雄黄作用24h和48h时分别为NB4-R1细胞凋亡主群的早期和凋亡晚期阶段;成功构建了雄黄诱导维甲酸耐药细胞株NB4-R1凋亡前后的差异蛋白质组表达谱,ImageMasterTM2D Platinum图像分析软件分析显示,未处理组(R0)、处理24h组(R24)和处理48h组(R48)的蛋白质组表达图谱分别平均含1069、975和893个点;R24与R0的匹配率为79.94%,R48与R0的匹配率为69.33%,R24与R48的匹配率为71.91%。结论 成功构建雄黄诱导维甲酸耐药细胞株NB4-R1凋亡前后的差异蛋白质组表达谱,为今后从整体上更好地理解雄黄诱导耐药APL细胞凋亡的蛋白质组传导网络以及筛选恶性血液肿瘤新型生物标志物和药物靶标方面奠定了基础。

肿瘤

043415 大剂量甲氨蝶呤治疗儿童白血病毒副作用临床研究／刘筱梅…∥儿科药学杂志.-2003,9(5).-4~5 对16例患儿进行40例次的大剂量甲氨蝶呤十四氢叶酸钙的治疗,对用药前后患儿的临床表现、血尿常规、心电图、心肌酶谱、肝肾功能等和患儿的一般反应、皮肤粘膜损害、心脏毒性。